N-ЗАМЕЩЕННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ТИОГИДРАЗИДОВ ОКСАМИНОВЫХ КИСЛОТ, СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

Изобретение относится к N-замещенным производным тиогидразидов оксаминовых кислот общей формулы: ! ! где R и R1, представляют собой Н, незамещенные или замещенные Het, фенил, Alk, при этом заместителями могут быть Alk, Hal, CF3, COOR3, SR3, либо R+R1=C2H4OC2H4; R2 представляет собой Н, Alk, OR3, Hal, где R3=Alk; Het представляет собой 5- или 6-членное кольцо, содержащее один или два гетероатома, выбранных из N, S. Изобретение также относится к способу получения указанных соединений. Технический результат - получение новых соединений, которые проявляют антибактериальную активность и могут быть использованы в качестве антибактериальных средств для подавления патогенных бактерий, в том числе и хламидий. 3 н. и 1 з.п. ф-лы.

1. N-замещенные производные тиогидразидов оксаминовых кислот общей формулы:

где R и R₁, представляют собой Н, незамещенные или замещенные Het, фенил, Alk, при этом заместителями могут быть Alk, Hal, CF₃, COOR₃, SR₃, либо R+R₁=C₂H₄OC₂H₄;
R₂ представляет собой Н, Alk, OR₃, Hal, где R₃=Alk;
Het представляет собой 5- или 6-членное кольцо, содержащее один или два гетероатома, выбранных из N, S.

2. Соединения по п.1, обладающие антибактериальной активностью в отношении патогенных бактерий.

3. Способ получения N-замещенных производных тиогидразидов оксаминовых кислот по пп.1 и 2, заключающийся во взаимодействии соответствующих хлорацетамидов общей формулы

где R и R₁ имеют вышеуказанные значения, с раствором элементной серы в морфолине, пропускании полученного раствора соответствующих монотиооксамидов общей формулы

где R и R₁ имеют вышеуказанные значения, через слой сорбента, последующей обработкой раствора монотиооксамидов гидразингидратом и взаимодействием образующихся при этом тиогидразидов оксаминовых кислот с производными салицилового альдегида, с последующим восстановлением полученных гидразонов натрий боргидридом.

4. Способ подавления патогенных бактерий, заключающийся в воздействии на бактерии эффективным количеством соединения по пп.1 и 2.

Изобретение относится к новым тиогидразидам оксаминовых кислот, а именно к новым N- замещенным производным тиогидразидов оксаминовых кислот, к способу их получения, а также к их использованию как антибактериальных средств для подавления патогенных бактерий.

Проблема антибиотикорезистентности является наиболее острой на данный момент, поскольку отмечено, что ко всем существующим классам антибактериальных препаратов у патогенных бактерий развивается устойчивость в той или иной степени {Сидоренко С.В. Механизмы антибиотикорезистентности / Антибактериальная терапия: Практическое руководство под ред. Страчунского Л.С., Белоусова Ю.Б., Козлова С.Н. - 2000. - М.: Фарммединфо. - 190 с.; Страчунский Л.С., Богданович Т.М. Состояние антибиотикорезистентности в России / Антибактериальная терапия: Практическое руководство под ред. Страчунского Л.С., Белоусова Ю.Б., Козлова С.Н. - 2000. - М, Фарммединфо. - 190 с.; Фурлетова Н.М., Карп В.П., Мирская М.А., Никитин А.П. Мониторинг спектра и чувствительности выделяемой микрофлоры в стационаре - МКО-10, 2002; Clatworthy A.E., Pierson E., Hung D.T. Targeting virulence: a new paradigm for antimicrobial therapy - Nature Chemical Biology - 2007. - V.3. - N9. - P.541-548).

Так, например, к группе β-лактамных антибиотиков на данный момент описано более 200 ферментов β-лактамаз, инактивирующих путем гидролиза одну из связей β-лактамного кольца. Согласно статистике, такие ферменты встречаются у 60-80% штаммов стафилококков, 30-40% - Escherihia coli, 20% у возбудителей тяжелых нозокомиальных инфекций Enterobacter spp., в результате чего существенно снизилась эффективность цефалоспоринов III и, в последнее время, IV поколений.

Практически у всех грамотрицательных бактерий с течением времени развивается еще один механизм устойчивости к данной группе препаратов: снижение проницаемости внешних структур, в результате мутаций, приводящих к полной или частичной утрате поринов, белков, участвующих в осуществлении динамической связи между бактериями и окружающей средой, в том числе поддерживают структурную целостность клетки, регулируют транспорт питательных веществ и бактерицидных агентов).

Аналогичная ситуация складывается с чувствительностью патогенов к аминогликозидам. Описано более 50 ферментов, инактивирующих данную группу антибиотиков.

Кроме того, используемые в клинической практике антибиотики в большинстве своем эффективно работают против острых инфекций, но не эффективны к хронической стадии инфекционного процесса. Это объясняется тем, что острая и хроническая инфекции - две разные формы взаимодействия патогена и организма хозяина, при которых реализуются две различные стратегии, заложенные в геноме патогена. В отличие от острой инфекции, хроническая инфекция это более сложная система взаимодействия, эволюционно выработанная адаптация, направленная на длительное выживание.

Таким образом, создание новых лекарственных препаратов для борьбы с хроническими инфекциями является актуальнейшей проблемой биологии и медицины.

Описанные выше проблемы заставили разработать подходы к синтезу новых антибактериальных средств для борьбы с патогенными бактериями.

В литературе описаны соединения, содержащие тиогидразидные фрагменты в своем составе, обладающие антибактериальными и антивирусными свойствами (К.Waisser, N.Houngbedji, Z.Odlerova, W.Thiel, R.Mayer. Pharmazie 45 (1990), H.2, 141; Antituberkulotika 45. Mitteilung: Antimykobakterielle Thiohydrazide, Waisser K., Odlerova Z., Houngbedji N., Thiel W., Mayer R. Zentralbl Mikrobiol. (1989), 144(5), 355). Практически не изучено биологическая активность тиогидразидов оксаминовых кислот.

Наиболее близкими к заявляемым соединениям являются тиогидразиды оксаминовых кислот общей формулы:

где R = циклогексил, фенил, дифенил, нафтил, которые исследовались в качестве противотуберкулезных средств (Antituberkulotika 45. Mitteilung: Antimykobakterielle Thiohydrazide, Waisser К., Odlerova Z., Houngbedji N., Thiel W., Mayer R. Zentralbl Mikrobiol. (1989), 144(5), 355). Однако производные тиогидразидов оксаминовых кислот, в том числе N-замещенные тиогидразиды оксаминовых кислот не изучались в качестве средств против патогенных бактерий, в том числе хламидий, вызывающих хронические инфекции.

Большую опасность для человека представляют хламидии, чрезвычайно успешно адаптированные к длительному сосуществованию с организмом хозяина и определяющие возможность развития хронических инфекций. Как известно патогенными для человека являются два основных вида хламидий: Ch.trachomatis и Ch.pneumoniae. Ch.trachomatis - самый распространенный возбудитель урогенитальных инфекций бактериальной природы. В нашей стране регистрируется ежегодно более 1,5 млн. новых случаев заболеваний, но это не отражает истинную картину заболеваемости, так как почти в 80% случаев инфекция протекает бессимптомно, а значит, не выявляется и не лечится, что и приводит к развитию хронического процесса. Хронические урогенитальные хламидиозы имеют очень серьезные последствия: женское и мужское бесплодие, патологии беременности, артрит, рак простаты и шейки матки.

Другим патогенным для человека видом хламидий является Ch.pneumoniae - возбудитель респираторного хламидиоза. С этим возбудителем связывают от 10 до 20% внебольничных пневмоний, а в период эпидемии показатели могут увеличиваться до 25%. Летальность при хламидийных пневмониях составляет почти 10%.

Задачей настоящего изобретения является изыскание новых соединений, возможность их использования в качестве антибактериальных средств против патогенных бактерий, в том числе и хламидий, и разработка способа их получения.

Поставленная задача достигается новыми N-замещенными производными тиогидразидов оксаминовых кислот общей формулы (I):

где R и R₁, представляют собой Н, незамещенные или замещенные Het, Ar, Alk, при этом заместителями могут быть Alk, Hal, CF₃, NR₃R₄, COOR₃, CONR₃R₄, CONHNR₃R₄, COR₃, NO₂, CN, ОН, OR₃, SH, SR₃, либо R+R₁=C₂H₄OC₂H₄,

R₂ представляет собой Н, Alk, OR₃, Hal, COOR₃, CONH₂, NO₂ CN, OH, SR₃, где R₃,R₄ = Alk

Het представляет собой 5- или 6-членное кольцо, содержащее один или два гетероатома, выбранных из О, N, S

и способом их получения, заключающимся во взаимодействии соответствующих хлорацетамидов с раствором элементной серы в морфолине с последующим пропусканием полученного раствора монотиооксамида через слой сорбента и обработкой его гидразингидратом, взаимодействием образующихся при этом тиогидразидов оксаминовых кислот с производными салицилового альдегида с последующим восстановлением полученных гидразонов натрий боргидридом, в соответствии с нижеприведенной схемой:

При этом тиогидразиды оксаминовых кислот получают по методу, который отличается от описанного в литературе (Синтез тиогидразидов оксаминовых кислот и карбамоил-1,3,4-тиадиазолов, В.Н.Яровенко, А.В.Широков, О.Н.Крупинова, И.В.Заварзин, М.М.Краюшкин. ЖОрХ, (2003), 39(8), 1204) тем, что промежуточный монотиооксамид не выделяют и реакционную смесь, содержащую монотиооксамид, пропускают через слой сорбента и затем обрабатывают гидразингидратом. Для получения целевых продуктов образующиеся при этом тиогидразиды оксаминовых кислот подвергают взаимодействию с производными салицилового альдегида с последующим восстановлением полученных гидразонов натрийборгидридом.

Предложенный метод позволяет получать новые N- замещенные производные тиогидразидов оксаминовых кислот с хорошим выходом.

Соединения (I) проявляют антибактериальную активность и могут быть использованы в качестве антибактериальных средств для подавления патогенных бактерий, в том числе и хламидий.

Способ подавления патогенных бактерий заключается в воздействии на бактерии эффективным количеством соединения (I).

Полученные соединения хорошо растворимы в органических растворителях, что способствует их дальнейшему изучению и продвижению в качестве лекарственных препаратов.

Конкретные примеры выполнения группы изобретений.

Пример 1.

2-[2-(2-гидроксибензил)гидразино]-N-(2-метилфенил)-2-тиоксоацетамид (1)

N-хлорацетил-2-метиланилин (2).

К раствору 10,7 г (0,1 моль) 2-метиланилина в 100 мл ДМФА добавляем, при охлаждении, 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления перемешиваем при комнатной температуре раствор еще 2 часа. Затем выливаем реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровываем осадок. Промываем его на фильтре водой и сушим на воздухе.

Выход хлорацетамида (2) 15,5 г, 85%. Т.пл. 124-126°С. ЯМР¹H DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 1,74 (с, 3Н, СН₃); 7,41 (м, 1H, аром); 7,21 (м, 1H, аром); 7,07 (м, 1Н, аром) 7,63 (м, 1H, аром); 4,20 (с, 2Н, CH₂Cl); 10,57 (с, 1H, NH). Найдено (%) 58.86, Н 5.47, N 7.64. Вычислено (%): С 58.87, Н 5.49, N 7.63. Масс-спектр, m/z: 183.

2-[гидразино-(тиоксо)-ацетиламино]-2-метиланилин (3).

Готовим раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляем 5 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешиваем 20-30 минут и добавляем к ней раствор 9,15 г (0,05 моль) хлорацетамида (2) в минимальном количестве ДМФА, при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешиваем 3-4 часа (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускаем через слой силикагеля, к полученному раствору добавляем 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешиваем при комнатной температуре 2 часа. Затем выливаем в воду и подкисляем разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровываем осадок и сушим его на воздухе.

Выход тиогидразида (3) 10,4 г, 60%. Т.пл. 154-155°С. ЯМР¹H DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 1,74 (с, 3Н, СН₃); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1H, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1H, аром); 10,59 (с, 1Н, NH). Найдено: С 51.64, Н 5.28, N 20,10. Вычислено: С 51.66, Н 5.30, N 20.08. Масс-спектр, m/z: 209.

2-{2-[(2-гидроксифенил)метилиден]гидразино}-N-(2-метилфенил)-2-тиоксоацетамид (4)

К 209 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (3) в 1-2 мл ДМФА добавили 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре, затем добавили 3 мл метанола, выпавший осадок отфильтровали и промыли метанолом.

Выход гидразона (4) 156 мг, 50%. Т.пл. 215-217°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 2,50 (с, 3Н, СН₃); 7,02 (м, 4Н, аром); 7,41 (м, 1H, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH). 11,92 (с, 1Н, NH т.амид). 12,76 (с, 1H, ОН, фен.). Найдено: С 61.33, Н 4.81, N 13.40. Вычислено: С 61.32, Н 4.82, N 13.41. Масс-спектр, m/z: 313.

2-[2-(2-гидроксибензил)гидразино]-N-(2-метилфенил)-2-тиоксоацетамид (1)

К 313 мг (1 ммоль) тиогидразона (4) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола или этанола.

Выход гидразида (1) 220 мг, 70%. Т.пл. 245-246°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 2,50 (с, 3Н, СН₃); 4,35 (с, 1H, СН₂); 6,45 (с, 1H, NH); 6,96 (м, 2Н, аром); 7,21 (м, 5Н, аром); 7,98 (м, 1H, аром); 9,92 (с 1H, ОН, фен.). Найдено (%): С 61.10, Н 5.11, N 13.40. Вычислено (%): С 60.93, Н 5.43, N 13.32. Масс-спектр, m/z: 315.

Пример 2.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (5)

N-хлорацетил-4-фторанилин (6).

К раствору 11,1 г (0,1 моль) 4-фторанилина в 100 мл ДМФА добавляем при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления перемешиваем при комнатной температуре раствор еще 2 часа. Затем выливаем реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровываем осадок. Промываем его на фильтре водой и сушим на воздухе.

Выход хлорацетамида (6) 80% Т.пл. 110-112°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 4,20 (с, 2Н, СН₂С1). Найдено (%): С 51.21, Н 3.73, N 7.46. Вычислено (%): С 51.22, Н 3.76, N 7.47. Масс-спектр, m/z: 187.

2-[гидразино-(тиоксо)-ацетиламино]-4-фторанилин (7).

Готовим раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляем 0,06 моль морфолина. Полученную смесь перемешиваем 20-30 минут и добавляем к ней раствор 9,37 г (0,05 моль) хлорацетамида (6) в минимальном количестве ДМФА, при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешиваем 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускаем через слой силикагеля, к полученному раствору добавляем 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешиваем при комнатной температуре 2 часа. Затем выливаем в воду и подкисляем разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровываем осадок и сушим его на воздухе.

Выход тиогидразида (7) 6,4 г, 60%. Т.пл. 154-155°С. ЯМР¹Н DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH). Найдено (%): С 51.64, Н 5.28, N 20,10. Вычислено (%): С 45.06, Н 3.78, N 19,71. Масс-спектр, m/z: 213.

2-{[1-(2-гидрокси3-этокси-фенил)-метилиден-гидразиноокситиоацетил]-амино}-4-фторанилин (8).

К 213 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (7) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (8) 180 мг, 50%. Т.пл. 215-217°С. ЯМР¹H CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.5 (м, 3Н, СН₃); 4,15 (м, 2Н, СН₂); 6,88 (м, 2Н, аром); 7,07 (м, 3Н, аром) 7,65 (м, 2Н, аром); 8,57 (м, 1H, гидр.); 10,05 (с, 1H, ОН); 10,98 (с, 1Н, NH). 12,00 (с, 1H, NH т.амид). Найдено (%): С 56.41, Н 4.30, N 11.79. Вычислено (%): С 56.50, Н 4.46, N 11.63. Масс-спектр, m/z: 361.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензип)гидразино]-N-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (5)

К 361 мг (1 ммоль) тиогидразона (8) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола или этанола.

Выход гидразида (5) 272 мг, 75%. Т.пл. 232-233°С. ЯМР¹H CDC1₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.46 (м, 3Н, СН₃); 4,12 (м, 2Н, СН₂); 4,36 (с, 2Н, СН₂), 6,85 (м, 4Н, аром); 7,08 (м, 1H, аром) 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (с, 1H, ОН). Найдено (%): С 56.43, Н 4.62, N 11.78. Вычислено (%): С 56.19, Н 4.99, N 11.56. Масс-спектр, m/z: 363.

Пример 3.

2-[2-(3,5-дибром-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (9)

2-{2-[(3,5-дибром-2-гидроксифенил)метилиден]гидразино}-Н-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (10)

К 213 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (7) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (10) 394 мг, 83%. Т.пл. 315-317°С. ЯМР¹Н CDCl₃ 7,22 (д, 2Н, аром); 7,08 (д, 2Н, аром) 7,21 (с, 1Н, аром); 7,07 (с, 1H, аром); 10,55 (с, 1H, NH); 11,70 (с, 1Н, NH т.амид); 13,78(с, 1Н, ОН, фен.). Найдено (%): С 37.72, Н 2.19, N 8.98. Вычислено (%): С 37.92, Н 2.12, N 8.84. Масс-спектр, m/z: 475.

2-[2-(3,5-дибром-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (9)

К 475 мг (1 ммоль) тиогидразона (10) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола, этанола или хлороформа.

Выход гидразида (9) 357 мг, 75%. Т.пл. 272-273°С. ЯМР¹H CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 4,36 (с, 2Н, СН₂), 6,85 (м, 4Н, аром); 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (с, 1H, ОН). Найдено (%): С 37.56, Н 2.73, N 8.62. Вычислено (%): С 37.76, Н 2.53, N 8.81. Масс-спектр, m/z: 477.

Пример 4.

2-[2-(5-бром-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (11)

2-{2-[(5-бром-2-гидроксифенил)метилиден]гидразино}-N-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (12)

К 213 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (7) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (12) 277 мг, 70%. Т.пл. 235-237°С. ЯМР¹H CDCl₃ 7,22 (д, 2Н, аром); 7,08 (д, 2Н, аром) 7,21 (с, 1Н, аром); 7,07 (м, 2Н, аром); 10,55 (с, 1Н, NH); 11,70 (с, 1H, NH т.амид); 13,78 (с, 1H, ОН, фен.). Найдено (%): С 45.36, Н 2.89, N 10.77. Вычислено (%): С 45.47, Н 2.80, N 10.60. Масс-спектр, m/z: 396.

2-[2-(5-бром-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (11)

К 478 мг (1 ммоль) тиогидразона (12) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола, этанола или хлороформа.

Выход гидразида (11) 278 мг, 70%. Т.пл. 222- 223°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 4,36 (с, 2Н, СН₂), 6,85 (м, 4Н, аром); 7,08 (м, 1H, аром) 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (с, 1H, ОН). Найдено (%): С 56.43, Н 4.62, N 11.78. Вычислено (%): С 56.19, Н 4.99, N 11.56. Масс-спектр, m/z: 398.

Пример 5.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(3-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (13)

N-хлорацетил-3-фторанилин (14).

К раствору 11,1 г (0,1 моль) 3-фторанилина в 100 мл ДМФА добавляем при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления перемешиваем при комнатной температуре раствор еще 2 часа. Затем выливаем реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровываем осадок. Промываем его на фильтре водой и сушим на воздухе.

Выход хлорацетамида (14) 80% Т.пл. 130-131°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 7,21 (м, 3Н, аром); 7,07 (с, 1Н, аром); 4,20 (с, 2Н, CH₂Cl). Найдено (%): С 51.21, Н 3.73, N 7.46. Вычислено (%): С 51.22, Н 3.76, N 7.47. Масс-спектр, m/z: 187.

2-[гидразино-(тиоксо)-ацетиламино]-3-фторанилин (15).

Готовим раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляем 0,06 моль морфолина. Полученную смесь перемешиваем 20-30 минут и добавляем к ней раствор 9,37 г (0,05 моль) хлорацетамида (14) в минимальном количестве ДМФА, при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешиваем 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускаем через слой силикагеля, к полученному раствору добавляем 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешиваем при комнатной температуре 2 часа. Затем выливаем в воду и подкисляем разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровываем осадок и сушим его на воздухе.

Выход тиогидразида (15) 6,4 г, 60%. Т.пл. 164-165°С. ЯМР¹Н DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH). Найдено (%): С 51.64, Н 5.28, N 20,10. Вычислено (%): С 45.06, Н 3.78, N 19,71. Масс-спектр, m/z: 213.

2-{[1-(2-гидрокси3-этокси-фенил)-метилиден-гидразиноокситиоацетил]-амино}-3-фторанилин (16).

К 213 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (15) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (16) 158 мг, 50%. Т.пл. 225-226°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.5 (м, 3Н, СН₃); 4,15 (м, 2Н, СН₂); 6,88 (м, 3Н, аром); 7,07 (м, 3Н, аром); 7,65 (с, 1Н, аром); 8,57 (м, 1H, гидр.); 10,05 (с, 1H, ОН); 10,98 (с, 1H, NH); 12,00 (с, 1H, NH т.амид). Найдено (%):С 56.41, Н 4.30, N 11.79. Вычислено (%): С 56.50, Н 4.46, N 11.63. Масс-спектр, m/z: 361.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(3-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (13)

К 361 мг (1 ммоль) тиогидразона (16) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола или этанола.

Выход гидразида (13) 272 мг, 75%. Т.пл. 232- 233°С. ЯМР¹Н CDC1₃ (δ, м.д., J,Гц): 1.46 (м, 3Н, СН₃); 4,12 (м, 2Н, СН₂); 4,36 (с, 2Н, СН₂), 6,85 (м, 4Н, аром); 7,08 (м, 1H, аром); 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (с, 1H, ОН). Найдено (%): С 56.43, Н 4.62, N 11.78. Вычислено (%): С 56.19, Н 4.99, N 11.56. Масс-спектр, m/z: 363.

Пример 6.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(2-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (17)

N-хлорацетил-2-фторанилин (18)

К раствору 11,1 г (0,1 моль) 2-фторанилина в 100 мл ДМФА добавляем при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления перемешиваем при комнатной температуре раствор еще 2 часа. Затем выливаем реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровываем осадок. Промываем его на фильтре водой и сушим на воздухе.

Выход хлорацетамида (18) 80% Т.пл. 130-132°С. ЯМР¹H DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 7,21 (м, 2Н, аром); 7,07 (м, 2Н, аром); 4,20 (с, 2Н, СН₂С1). Найдено (%): С 51.21, Н 3.73, N 7.46. Вычислено (%): С 51.22, Н 3.76, N 7.47. Масс-спектр, m/z: 187.

2-[гидразино-(тиоксо)-ацетиламино]-2-фторанилин (19).

Готовим раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляем 0,06 моль морфолина. Полученную смесь перемешиваем 20-30 минут и добавляем к ней раствор 9,37 г (0,05 моль) хлорацетамида (18) в минимальном количестве ДМФА при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешиваем 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускаем через слой силикагеля, к полученному раствору добавляем 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешиваем при комнатной температуре 2 часа. Затем выливаем в воду и подкисляем разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровываем осадок и сушим его на воздухе.

Выход тиогидразида (18) 6,4 г, 60%. Т.пл. 164-165°С. ЯМР¹Н DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH). Найдено (%): С 51.64, Н 5.28, N 20,10. Вычислено (%): С 45.06, Н 3.78, N 19,71. Масс-спектр, m/z: 213.

2-{[1-(2-гидрокси3-этокси-фенил)-метилиден-гидразиноокситиоацетил]-амино}-2-фторанилин (19).

К 213 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (18) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (19) 158 мг, 50%. Т.пл. 215-217°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.5 (м, 3Н, СН₃); 4,15 (м, 2Н, СН₂); 6,88 (м, 2Н, аром); 7,07 (м, 3Н, аром) 7,65 (м, 2Н, аром); 8,57 (м, 1H, гидр.); 10,05 (с, 1H, ОН); 10,98 (с, 1H, NH). 12,00 (с, 1H, NH т.амид). Найдено (%): С 56.41, Н 4.30, N 11.79. Вычислено (%): С 56.50, Н 4.46, N 11.63. Масс-спектр, m/z: 361.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(2-фторфенил)-2-тиоксоацетамид (17)

К 361 мг (1 ммоль) тиогидразона (19) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола или этанола.

Выход гидразида (17) 272 мг, 75%. Т.пл. 232-233°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1,46 (м, 3Н, СН₃); 4,12 (м, 2Н, СН₂); 4,36 (с, 2Н, СН₂); 6,85 (м, 4Н, аром); 7,08 (м, 1Н, аром); 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (с, 1Н, ОН). Найдено (%): С 56.43, Н 4.62, N 11.78. Вычислено (%): С 56.19, Н 4.99, N 11.56. Масс-спектр, m/z: 363.

Пример 7.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-2-тиоксо-N-[2-(трифторметил)фенил]ацетамид (20)

N-хлорацетил-2-(трифторметил)-анилин (21).

К раствору 16,1 г (0,1 моль) 2-(трифторметил)-анилина в 100 мл ДМФА добавляем при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления перемешиваем при комнатной температуре раствор еще 2 часа. Затем выливаем реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровываем осадок. Промываем его на фильтре водой и сушим на воздухе.

Выход хлорацетамида (21) 19 г 80%. Т.пл. 115-116°С. ЯМР¹Н DMSO_d6(δ, м.д, J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 4,20 (с, 2Н, CH₂Cl).

Найдено (%): С 45.38, Н 2.81, N 5.96. Вычислено (%): С 45.49, Н 2.97, N 5.89. Масс-спектр, m/z: 237.

2-[гидразино-(тиоксо)-ацетиламино]-2-(трифторметил)-анилин (22).

Готовим раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляем 0,06 моль морфолина. Полученную смесь перемешиваем 20-30 минут и добавляем к ней раствор 11,85 г (0,05 моль) хлорацетамида (21) в минимальном количестве ДМФА при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешиваем 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускаем через слой силикагеля, к полученному раствору добавляем 6 мл (0,12 моль) гидразин гидрата и перемешиваем при комнатной температуре 2 часа. Затем выливаем в воду и подкисляем разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровываем осадок и сушим его на воздухе.

Выход тиогидразида (22) 6,4 г, 60%. Т.пл. 154-155°С. ЯМР¹Н DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH). Найдено (%): С 41.16, Н 3.13, N 15.83. Вычислено (%): С 41.06, Н 3.06, N 15.96. Масс-спектр, m/z: 263.

2-{[1-(2-гидрокси3-этокси-фенил)-метилиден-гидразиноокситиоацетил]-амино}-2-(трифторметил)-анилин (23).

К 263 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (13) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (23) 158 мг, 50%. Т.пл. 215-217°С. ЯМР¹H CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.5 (м, 3Н, СН₃); 4,15 (м, 2Н, СН₂); 6,88 (м, 2Н, аром); 7,07 (м, 3Н, аром); 7,65 (м, 2Н, аром); 8,57 (м, 1H, гидр.); 10,05 (с, 1H, ОН); 10,98 (с, 1Н, NH); 12,00 (с, 1H, NH т.амид). Найдено (%): С 52.43, Н 3.82, N 10.31. Вычислено (%): С 52.55, Н 3.92, N 10.21. Масс-спектр, m/z: 411.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-2-тиоксо-N-[2-(трифторметил)фенил]ацетамид (20)

К 411 мг (1 ммоль) тиогидразона (23) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола или этанола.

Выход гидразида (20) 272 мг, 75%. Т.пл. 232-233°С. ЯМР¹H CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.46 (м, 3Н, СН₃); 4,12 (м, 2Н, СН₂); 4,36 (c, 2Н, CH₂),6,85 (4H, аром); 7,08 (м, 1Н, аром); 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (c, 1H, OH). Найдено (%): С 52.29, Н 4.25, N 10.11. Вычислено (%): С 52.30, Н 4.39, N 10.16. Масс-спектр, m/z: 413. .

2-[2-(3,5-дибром-2-гидроксибензил)гидразино]-2-тиоксо-N-[2-(трифторметил)фенил]ацетамид (25)

2-{2-[(3,5-дибром-2-гидроксифенил)метилиден]гидразино}-2-тиоксо-N-[2-(трифторметил) фенил]ацетамид (23)

К 263 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (13) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (25) 158 мг, 50%. Т.пл. 215-217°С.ЯМР¹H CDCl₃ 7,22 (д, 2Н, аром); 7,08 (д, 2Н, аром) 7,21 (с, 1Н, аром); 7,07 (с, 1Н, аром); 10,55 (с, 1Н, NH); 11,70 (с, 1H, NH т.амид); 13,78 (с, 1H, ОН, фен.). Найдено (%): С 36.69, Н 1.81, N 8.09. Вычислено (%): С 36.60, Н 1.92, N 8.00. Масс-спектр, m/z: 525.

2-[2-(3,5-дибром-2-гидроксибензил)гидразино]-2-тиоксо-H-[2-(трифторметил)фенил]ацетамид (25)

К 525 мг (1 ммоль) тиогидразона (25) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола, этанола или хлороформа.

Выход гидразида (24) 272 мг, 75%. Т.пл. 232-233°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д, J, Гц): 1.46 (м, 3Н, СН₃); 4,12 (м, 2Н, СН₂); 4,36 (с, 2Н, СН₂); 6,85 (м, 4Н, аром); 7,08 (м, 1Н, аром); 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (с, 1Н, ОН). Найдено (%): С 36.35, Н 2.21, N 7.84. Вычислено (%): С 36.46, Н 2.29, N 7.97. Масс-спектр, m/z: 527.

Пример 9.

2-[2-(5-бром-2-гидроксибензил)гидразино]-2-тиоксо-N-[2-(трифторметил)фенил]ацетамид (26)

2-{(2-[(5-бром-2-гидроксифенил)метилиден]гидразино}-2-тиоксо-N-[2-(трифториетил)фенил]ацетамид (27)

К 263 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (13) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (27) 312 мг, 70%. Т.пл. 215-217°С. ЯМР¹Н CDCl₃ 7,22 (д, 2Н, аром); 7,08 (д, 2Н, аром); 7,21 (с, 1Н, аром); 7,07 (с, 1Н, аром); 10,55 (с, 1Н, NH); 11,70 (с, 1H, NH т.амид); 13,78 (с, 1Н, ОН, фен.). Найдено (%): С 43.16, Н 2.35, N 9.52. Вычислено (%): С 43.07, Н 2.48, N 9.42. Масс-спектр, m/z: 446.

2-[2-(5-бром-2-гидроксибензил)гидразжо]-2-тиоксо-N-[2-(трифторметил)фенил] ацетамид (26)

К 446 мг (1 ммоль) тиогидразона (26) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола, этанола или хлороформа.

Выход гидразида (26) 358 мг, 75%. Т.пл. 232-233°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.46 (м, 3Н, СН₃); 4,12 (м, 2Н, СН₂); 4,36 (с, 2Н, СН₂); 6,85 (м, 4Н, аром); 7,08 (м, 1Н, аром); 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (с, 1H, ОН). Найдено (%): С 42.76, Н 2.86, N 9.42. Вычислено (%): С 42.87, Н 2.92, N 9.37. Масс-спектр, m/z: 448.

Пример 10.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-2-тиоксо-N-[3-(трифторметил)фенил]ацетамид (28)

N-хлорацетил-3-(трифторметил)-анилин (29).

К раствору 16,1 г (0,1 моль) 3-(трифторметил)-анилина в 100 мл ДМФА добавляем при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления перемешиваем при комнатной температуре раствор еще 2 часа. Затем выливаем реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровываем осадок. Промываем его на фильтре водой и сушим на воздухе.

Выход хлорацетамида (29) 19 г 80% Т.пл. 125-126°С. ЯМР¹H DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 4,20 (с, 2Н, CH₂Cl).

Найдено (%): С 45.38, Н 2.81, N 5.96. Вычислено (%): С 45.49, Н 2.97, N 5.89. Масс-спектр, m/z: 237.

2-[гидразино-(тиоксо)-ацетиламино]-3-(трифторметил)-анилин (30).

Готовим раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляем 0,06 моль морфолина. Полученную смесь перемешиваем 20-30 минут и добавляем к ней раствор 11,85 г (0,05 моль) хлорацетамида (21) в минимальном количестве ДМФА при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешиваем 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускаем через слой силикагеля, к полученному раствору добавляем 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешиваем при комнатной температуре 2 часа. Затем выливаем в воду и подкисляем разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровываем осадок и сушим его на воздухе.

Выход тиогидразида (30) 6,4 г, 60%. Т.пл. 154-155°С. ЯМР¹Н DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH). Найдено (%): С 41.16, Н 3.13, N 15.83. Вычислено (%): С 41.06, Н 3.06, N 15.96. Масс-спектр, m/z: 263.

2-{(2-[(3-этокси-2-гидроксифенил)метилиден]гидразино}-2-тиоксо-N-[3-(трифторметил)фенил]ацетамид (31)

К 263 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (30) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (31) 158 мг, 50%. Т.пл. 215-217°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.5 (м, 3Н, СН₃); 4,15 (м, 2Н, СН₂); 6,88 (м, 2Н, аром); 7,07 (м, 3Н, аром) 7,65 (м, 2Н, аром); 8,57 (м, 1H, гидр.); 10,05 (с, 1Н, ОН); 10,98 (с, 1H, NH); 12,00 (с, 1H, NH т.амид). Найдено (%): С 52.43, Н 3.82, N 10.31. Вычислено (%): С 52.55, Н 3.92, N 10.21. Масс-спектр, m/z: 411.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-2-тиоксо-N-[3-(трифторметил)фенил]ацетамид (28)

К 411 мг (1 ммоль) тиогидразона (31) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола или этанола.

Выход гидразида (28) 272 мг, 75%. Т.пл. 232-233°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.46 (м, 3Н, СН₃); 4,12 (м, 2Н, СН₂); 4,36 (с, 2Н, СН₂); 6,85 (м, 4Н, аром); 7,08 (м, 1H, аром); 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (с, 1Н, ОН). Найдено (%): С 52.39, Н 4.25, N 10.11. Вычислено (%): С 52.30, Н 4.39, N 10.16. Масс-спектр, m/z: 413.

Пример 11.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-2-тиоксо-N-[4-(трифторметил)фенил]ацетамид (32)

N-хлорацетил-4-(трифторметил)-анилин (33).

К раствору 16,1 г (0,1 моль) 4-(трифторметил)-анилина в 100 мл ДМФА добавляем при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления перемешиваем при комнатной температуре раствор еще 2 часа. Затем выливаем реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровываем осадок. Промываем его на фильтре водой и сушим на воздухе.

Выход хлорацетамида (33) 19 г 80% Т.пл. 115-116°С. ЯМР¹Н DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 4,20 (с, 2Н, CH₂Cl). Найдено (%): С 45.38, Н 2.81, N 5.96. Вычислено (%): С 45.49, Н 2.97, N 5.89. Масс-спектр, m/z: 237.

2-гидразино-2-тиоксо-N-[4-(трифторметил)фенил]ацетамид (34).

Готовим раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляем 0,06 моль морфолина. Полученную смесь перемешиваем 20-30 минут и добавляем к ней раствор 11,85 г (0,05 моль) хлорацетамида (33) в минимальном количестве ДМФА при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешиваем 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускаем через слой силикагеля, к полученному раствору добавляем 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешиваем при комнатной температуре 2 часа. Затем выливаем в воду и подкисляем разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровываем осадок и сушим его на воздухе.

Выход тиогидразида (34) 6,4 г, 60%. Т.пл. 154-155°С. ЯМР¹H DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 7,21 (д, 2Н, аром); 7,07 (д, 2Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH). Найдено (%): С 41.16, Н 3.13, N 15.83. Вычислено (%): С 41.06, Н 3.06, N 15.96. Масс-спектр, m/z: 263.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензилиден)гидразино]-2-тиоксо-N-[4-(трифторметил)фенил]ацетамид (35).

К 263 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (34) в 0,5 мл ДМФА добавили 11 ммоль салицилового альдегида в 1 мл метанола. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре. Затем добавили 2 мл метанола и охладили до -5, осадок отфильтровали и промыли небольшим количеством ледяного метанола.

Выход гидразона (35) 158 мг, 50%. Т.пл. 215-217°С. ЯМР¹H CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 1.5 (м, 3Н, СН₃); 4,15 (м, 2Н, СН₂); 6,88 (м, 2Н, аром); 7,07 (м, 3Н, аром) 7,65 (м, 2Н, аром); 8,57 (м, 1H, гидр.); 10,05 (с, 1Н, ОН); 10,98 (с, 1H, NH). 12,00 (с, 1Н, NH т.амид). Найдено (%): С 52.43, Н 3.82, N 10.31. Вычислено (%): С 52.55, Н 3.92, N 10.21. Масс-спектр, m/z: 411.

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-2-тиоксо-N-[4-(трифторметил)фенил]ацетамид (32)

К 411 мг (1 ммоль) тиогидразона (35) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола или этанола.

Выход гидразида (32) 309 мг, 75%. Т.пл. 232-233°С. ЯМР¹Н CDCl₃, (δ, м.д, J, Гц): 1.46 (м, 3Н, СН₃); 4,12 (м, 2Н, СН₂); 4,36 (с, 2Н, СН₂); 6,85 (м, 4Н, аром); 7,08 (м, 1Н, аром); 7,60 (м, 2Н, аром); 9,85 (с, 1H, ОН). Найдено (%): С 52.39, Н 4.25, N 10.11. Вычислено (%): С 52.30, Н 4.39, N 10.16. Масс-спектр, m/z: 413.

Пример 12.

5-этил-2-{[1-(2-гидрокси-бензил)-гидразино]-2-тиоксо-N-[амино}-тиофен-3-этилкарбоксилат]ацетамид (36)

N-хлорацетил-3-карбэтокси-5-этил-тиофен (37).

К раствору 19,9 г (0,1 моль) 2-амино-3-карбэтокси-5-этилтиофена, полученного по реакции Гевальда (J. Heterocycl. Chem. Vol.36, (1999), p.333-345, в 100 мл ДМФА добавляем при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления перемешиваем при комнатной температуре раствор еще 2 часа. Затем выливаем реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровываем осадок. Промываем его на фильтре водой и сушим на воздухе.

Выход хлорацетамида (37) 23,4 г, 85%. Т.пл. 123-125°С (EtOH). Спектр ЯМР¹Н (δ, м.д., J, Гц): 1,27 (м, 3Н, СН₃); 1,30 (м, 3Н, СН₃); 2,45 (м, 2Н, СН₂); 4,43 (м, 2Н, СН₂); 4,3 (с, 2Н, CH₂Cl); 7,53 (с, 1H, тиофен); 10,65 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 47.92, Н 5.11, N 5.07. Вычислено (%): С 47.91, Н 5.12, N 5.08. Масс-спектр, m/z: 275.

5-этил-2-[гидразино]-2-тиоксо-N-[амино-тиофен-3-этилкарбоксилат]ацетамид (38),

Готовим раствор 4,8 г (0,15 моль) элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляем 5,1 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешиваем 20-30 минут и добавляем к ней раствор 13,75 г (0,05 моль) хлорацетамида (37) в минимальном количестве ДМФА при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешиваем 3-10 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускаем через слой силикагеля, к полученному раствору добавляем 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешиваем при комнатной температуре 2 часа. Затем выливаем в воду и подкисляем разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровываем осадок и сушим его на воздухе.

Выход тиогидразида (38) 8,6 г, 57%. Т.пл. 152-154°С. Спектр ЯМР¹Н (δ, м.д., J, Гц): 1.2 (т, 3Н, СН₃); 1.4 (т, 3Н, СН₃); 2.8 (м, 3Н, СН₃); 4.3 (м, 3Н, СН₃); 7.10 (с, 1Н, Н аром.); 12.40 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 43.90, Н 5.97, N 13.90. Вычислено (%): С 43.84, Н 5.02, N 13.94. Масс-спектр, m/z: 301.

5-этил-2-{[1-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-2-тиоксо-1H-[амино}-тиофен-3-этилкарбоксилат]ацетамид (39).

К 300 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (38) в 1-2 мл ДМФА добавили 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре, затем добавили 3 мл метанола, выпавший осадок отфильтровали и промыли метанолом.

Выход гидразона (39) 364 мг, 90%. Т пл. 189-190°С. Спектр ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц):1.2 (т, 3Н, СН₃); 1.4 (т, 3Н, СН₃); 2.8 (м, 3Н, СН₃); 4.3 (м, 3Н, СН₃); 7.05 (м, 4Н, Н аром); 7.10 (с, 1Н, Н аром.); 7.35 (с, 1Н); 12.40 (с, 1 Н, NH). Найдено (%): С 53.33, Н 4.71, N 10.35. Вычислено (%): С 53.32, Н 4.72, N 10.36.

5-этил-2-{[1-(2-гидрокси-бензил)-гидразино]-2-тиоксо-N-[амино}-тиофен-3-этилкарбоксилат]ацетамид (36)

К 405 мг (1 ммоль) тиогидразона (39) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и нейтрализовали разбавленной соляной кислотой до нейтральной среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола или этанола.

Выход гидразида (36) 364 мг, 90%. Т пл. 159-160°С. Спектр ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 1.2 (т, 3Н, СН₃); 1.4 (т, 3Н, СН₃); 2.8 (м, 3Н, СН₃); 4.3 (м, 3Н, СН₃); 4,36 (с, 2Н, СН₂); 7.05 (м, 4Н, Н аром); 7.10 (с, 1Н, Н аром.); 12.40 (с, 1Н, NH). Найдено (%): С 53.33, Н 4.71, N 10.35. Вычислено (%): С 53.32, Н 4.72, N 10.36.

Пример 13

N-(2-гидроксибензил)-2-морфолин-4-ил-2-оксоэтантиогидразид (40)

N-хлорацетилморфолид (41).

К раствору 8,7 мл (0,1 моль) морфолина в 50 мл ДМФА добавляют, при охлаждении, 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем реакционную смесь выливают в 600 мл холодной воды и экстрагируют хлористым метиленом. Промываем органический слой раствором карбоната натрия, затем водой. Сушим над сульфатом натрия и упариваем растворитель на роторном испарителе.

Выход хлорацетамида (41) 13,8 г (85%). Т.пл. 82-83°С. ЯМР¹H DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 1,94 (м, 4Н, СН₂); 2,10 (м, 4Н, СН₂); 4,20 (с, 2Н, CH₂Cl). Найдено (%): С 44.21, Н 6.03, N 8.43. Вычислено (%): С 44.05, Н 6.16, N 8.56. Масс-спектр, m/z: 163.

2-[гидразино-(тиоксо)-ацетиламино]-морфолид (42).

Готовят раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и добавляют к ней раствор 8,15 г (0,05 моль) хлорацетамида (41) в минимальном количестве ДМФА при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 10°С. Полученную смесь перемешивают 3-4 часа (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через слой силикагеля. К полученному раствору добавляют 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешивают при комнатной температуре 2 часа. Затем реакционную смесь выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Экстрагируют вещество этилацетатом, промываем водой. Органический слой сушим над сульфатом натрия и пропускаем через небольшой слой силикагеля. Элюат упариваем на роторном испарителе при комнатной температуре.

Выход тиогидразида (42) 6,14 г (65%). Т.пл. 104-105°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 2,01 (м, 4Н, СН₂); 2,22 (м, 4Н, СН₂) 10,45 (с, 1H, NH). Найдено: С 38.15, Н 5.95, N 22.43. Вычислено: С 38.08, Н 5.86, N 22.20. Масс-спектр, m/z: 189.

2-{[1-(2-гидрокси-фенил)-метилиден-гидразиноокситиоацетил]-амино}-морфолид (43).

К 189 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (42) в 1-2 мл ДМФА добавляют 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл воды. Выпавший осадок отфильтровывают и сушат на воздухе.

Выход гидразона (43) 156 мг (50%). Т.пл. 155-157°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д, J, Гц): 1,94 (м, 4Н, СН₂); 2,10 (м, 4Н, СН₂); 7,42 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH). 11,82 (с, 1Н, NH т.амид); 12,76 (с, 1Н, ОН, фен.). Найдено: С 53.39, Н 5.26, N 14.21. Вычислено: С 53.23, Н 5.15, N 14.32. Масс-спектр, m/z: 293.

N′-(2-гидроксибензил)-2-морфолин-4-ил-2-оксоэтантиогидразид (40)

К 293 мг (1 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (43) в 3 мл метанола добавляем 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не поднималась выше 5 градусов. После добавления боргидрида натрия реакционную смесь перемешиваем 1,5 часа при охлаждении, затем выливаем в 30 мл холодной воды и подкисляем разбавленной соляной кислотой до нейтральной реакции по лакмусу. Выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из изопропанола или хлороформа.

Выход гидразида (40) 156 мг (50%). Т.пл. 215-217°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 1,94 (м, 4Н, СН₂); 2,10 (м, 4Н, СН₂); 4,10 (с, 2Н, СН₂); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1Н, NH); 11,92 (с, 1H, NH т.амид). 12,76 (с, 1Н, ОН, фен.). Найдено: С 52.94, Н 5.64, N 14.43. Вычислено: С 52.87, Н 5.80, N 14.23. Масс-спектр, m/z: 295.

Пример 14

2-[2-(2-гидроксибензил)гидразино]-N-изопропил-2-тиоксоацетамид (44)

N-хлорацетил-2-аминопропан (45).

К раствору 5,9 г (0,1 моль) изопропиламина в 20 мл ДМФА и 10 мл триэтиламина (0,1 моль) добавляют, при охлаждении, 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем реакционную смесь выливают в 200 мл холодной воды и экстрагируют хлористым метиленом. Промываем органический слой раствором карбоната натрия, затем водой. Сушим над сульфатом натрия и упариваем растворитель на роторном испарителе.

Выход хлорацетамида (45) 10,1 г (75%). Т.пл. 71-73°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д, J, Гц): 1,54 (м, 6Н, СН₃); 1,85 (м, 1H, СН); 4,25 (с, 2Н, CH₂Cl). Найдено (%): С 44.14, Н 7.52, N 10.23. Вычислено (%): С 44.29, Н 7.43, N 10.33. Масс-спектр, m/z: 135.

[гидразино-(тиоксо)-ацетиламино]-2-аминопропан (46).

Готовят раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и добавляют к ней раствор 6,75 г (0,05 моль) хлорацетамида (45) в минимальном количестве ДМФА при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 10°С. Полученную смесь перемешивают 3-4 часа (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через слой силикагеля. К полученному раствору добавляют 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешивают при комнатной температуре 2 часа. Затем реакционную смесь выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Экстрагируют вещество этилацетатом, промываем водой. Органический слой сушим над сульфатом натрия и пропускаем через небольшой слой силикагеля. Элюат упариваем на роторном испарителе при комнатной температуре.

Выход тиогидразида (46) 5,23 г (65%). Т.пл. 104-105°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д, J, Гц): 1,55 (м, 6Н, СН₃); 1,92 (м, 1Н, СН) 10,47 (с, 1H, NH). Найдено: С 37.13, Н 6.78, N 26.23. Вычислено: С 37.25, Н 6.88, N 26.06. Масс-спектр, m/z: 161.

{[1-(2-гидроксифенил)-метилиден-гидразиноокситиоацетил]-амино}-2-аминопропан (47).

К 161 мг(10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (46) в 1-2 мл ДМФА добавляют 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл воды. Выпавший осадок отфильтровывают и сушат на воздухе.

Выход гидразона (47) 106 мг (40%). Т.пл. 154-155°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 1,56 (м, 6Н, СН₃); 1,98 (м, 1Н, СН); 7,41 (м, 1H, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1H, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH); 11,88 (с, 1Н, NH т.амид); 12,54 (с, 1H, ОН, фен.). Найдено: С 54.21, Н 5.60, N 15.98. Вычислено: С 54.32, Н 5.70, N 15.84. Масс-спектр, m/z: 265.

2-[2-(2-гидроксибензил)гидразино]-N-изопропил-2-тиоксоацетамид (44)

К 265 мг (1 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (47) в 3 мл метанола добавляем 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не поднималась выше 5 градусов. После добавления боргидрида натрия реакционную смесь перемешиваем 1,5 часа при охлаждении, затем выливаем в 30 мл холодной воды и подкисляем разбавленной соляной кислотой до нейтральной реакции по лакмусу Выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из изопропанола или хлороформа.

Выход гидразида (44) 133 мг (50%). Т.пл. 145-147°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 1,55 (м, 6Н, СН₃); 1,97 (м, 1H, СН); 4,15 (с, 2Н, СН₂); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1H, аром); 10,55 (с, 1Н, NH); 11,90 (с, 1H, NH т.амид); 12,55 (с, 1H, ОН, фен.). Найдено: С 53.80, Н 6.62, N 15.47. Вычислено: С 53.91, Н 6.41, N 15.72. Масс-спектр, m/z: 267.

Пример 15

2-[2-(2-гидрокси-4-метилбензил)гидразино]-N-(2-метилфенил)-2-тиоксоацетамид (48)

2-{[1-(2-гидрокси-5-метил-фенил)-метилиден-гидразиноокситиоацетил]-амино}-2-метиланилин (49).

К 209 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (3) в 1-2 мл ДМФА добавляют 149 мг (11 ммоль) 2-гидрокси-4-метилбензальдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход гидразона (49) 228 мг (70%). Т.пл. 225-227°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 1,75 (с, 3Н, СН₃); 1,82 (с, 3Н, СН₃); 7,05 (м, 4Н, аром); 7,31 (м, 1H, аром); 7,21 (с, 1Н, аром); 7,17 (м, 1Н, аром); 10,55 (с, 1H, NH); 11,74 (с, 1Н, NH т.амид); 12,45 (с, 1H, ОН, фен.). Найдено: 62.23, Н 5.12, N 12.95. Вычислено: С 62.37, Н 5.23, N 12.83. Масс-спектр, m/z: 327.

2-[2-(2-гидрокси-4-метилбензил)гидразино]-N-(2-метилфенил)-2-тиоксоацетамид (48)

К 327 мг (1 ммоль) тиогидразона оксаминовой кислоты (49) в 3 мл метанола добавляем 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не поднималась выше 5 градусов. После добавления боргидрида натрия реакционную смесь перемешиваем 1,5 часа при охлаждении, затем выливаем в 30 мл холодной воды и подкисляем разбавленной соляной кислотой до нейтральной реакции по лакмусу Выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из изопропанола или хлороформа.

Выход гидразида (48) 230 мг (70%). Т.пл. 211-212°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 1,75 (с, 3Н, СН₃); 1,82 (с, 3Н, СН₃); 4,12 (с, 2Н, СН₂); 7,05 (м, 4Н, аром); 7,34 (м, 1Н, аром); 7,22 (с, 1Н, аром); 7,19 (м, 1Н, аром); 11,74 (с, 1H, NH т.амид). 12,45 (с, 1H, ОН, фен.). Найдено: С 61.75, Н 5.98, N 12.84. Вычислено: С 61.98, Н 5.81, N 12.76. Масс-спектр, m/z: 329.

Пример 16

2-[2-(2-гидроксибензил)-гидразино]-N-[4-(метилтио)анилин]-тиоксоацетамид (50).

N-хлорацетил-4-(метилтио)анилин (51).

К раствору 13,9 г (0,1 моль) 2-хлор-N-[4-(метилтио)фенил]ацетамида в 100 мл ДМФА добавляем, при охлаждении, 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления перемешиваем при комнатной температуре раствор еще 2 часа. Затем выливаем реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровываем осадок. Промываем его на фильтре водой и сушим на воздухе.

Выход хлорацетамида (51) 19,4 г, 90%. Т.пл. 144-146°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 2,54 (с, 3Н, SCH₃); 7,52 (м, 2Н, аром); 7,34 (м, 2Н, аром); 4,20 (с, 2Н, CH₂Cl); 10,57 (с, 1Н, NH). Найдено (%) С 50.02, Н 4.85, N 6.35. Вычислено (%): С 50.12, Н 4.67, N 6.49. Масс-спектр, m/z: 215.

2-[гидразино]-N-[4-(метилтио)анилин]-тиоксоацетамид (52).

Готовим раствор 0,15 моль элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляем 5 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешиваем 20-30 минут и добавляем к ней раствор 10,7 г (0,05 моль) хлорацетамида (51) в минимальном количестве ДМФА при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Полученную смесь перемешиваем 3-4 часа (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускаем через слой силикагеля, к полученному раствору добавляем 6 мл (0,12 моль) гидразингидрата и перемешиваем при комнатной температуре 2 часа. Затем выливаем в воду и подкисляем разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровываем осадок и сушим его на воздухе.

Выход тиогидразида (52) 7,8 г, 65%. Т.пл. 154-155°С. ЯМР¹Н DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 2,55 (с, 3Н, SCH₃); 7,54 (м, 2Н, аром); 7,44 (м, 2Н, аром); 10,53 (с, 1H, NH). Найдено: С 44.64, Н 4.67, N 17.67. Вычислено: С 44.79, Н 4.59, N 17.41. Масс-спектр, m/z: 241.

2-[2-(2-гидроксибензилиден)-гидразино]-N-[4-(метилтио)анилин]-тиоксоацетамид (53).

К 241 мг (10 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (52) в 1-2 мл ДМФА добавили 140 мг (11 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставили на сутки при комнатной температуре, затем добавили 3 мл метанола, выпавший осадок отфильтровали и промыли метанолом.

Выход гидразона (53) 207 мг, 70%. Т.пл. 205-207°С. ЯМР¹Н DMSO_d6(δ, м.д., J, Гц): 2,55 (с, 3Н, SCH₃); 7,54 (м, 2Н, аром); 7,44 (м, 2Н, аром); 7,41 (м, 1Н, аром); 7,21 (м, 1Н, аром); 7,07 (м, 1Н, аром); 7,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH); 11,92 (с, 1H, NH т.амид). 12,77 (с, 1H, OH, фен.). Найдено: С 55.50, Н 4.49, N 12.25. Вычислено: С 55.63, Н 4.38, N 12.16. Масс-спектр, m/z: 345.

2-[2-(2-гидроксибензил)гидразино]-N-[4-(метилтио)анилин]-тиоксоацетамид (50).

К 345 мг (1 ммоль) тиогидразона (53) в 3 мл метанола при охлаждении льдом (0-5°С) добавили 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия, небольшими порциями. Реакционную смесь оставили на 2 часа при охлаждении, затем добавили 15 мл воды и подкислили разбавленной соляной кислотой до нейтральной (по лакмусу) реакции среды. Выпавший осадок отфильтровали и перекристаллизовали из изопропанола или этанола.

Выход гидразида (50) 260 мг, 75%. Т.пл. 255-256°С. ЯМР¹Н CDCl₃ (δ, м.д., J, Гц): 2,55 (с, 3Н, SCH₃); 4,35 (с, 1H, СН₂); 7,54 (м, 2Н, аром); 7,44 (м, 2Н, аром); 6,45 (с, 1Н, NH); 6,96 (м, 2Н, аром); 7,21 (м, 5Н, аром); 7,98 (м, 1H, аром); 9,92 (с 1H, ОН, фен.). Найдено (%): С 55.22, Н 5.10, N 12.18. Вычислено (%): С 55.31, Н 4.93, N 12.09. Масс-спектр, m/z: 347.

Пример 17.

2-[N-(2-Гидрокси-бензил)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксоацетамид (54).

N-хлорацетил-2-аминопиридин (55).

К раствору 9,4 г (0,1 моль) 2-аминопиридина в 100 мл ДМФА добавляют при охлаждении 8,75 мл (0,11 моль) хлорацетилхлорида, следя за тем, чтобы температура не превышала 20°С. После окончания прибавления раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем выливают реакционную смесь в 600 мл холодной воды и отфильтровывают осадок. Промывают его на фильтре водой и сушат на воздухе.

Выход: N-хлорацетил-2-аминопиридина (55) 11,9 г, (70%). Т.пл. 140-141°С. ЯМР¹H DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 7,41 (м, 1Н, аром); 8,21 (м, 1H, аром) 8,07 (м, 1Н, аром); 8,63 (м, 1Н, аром); 4,20 (с, 2Н, CH₂Cl); 10,57 (с, 1H, NH). Найдено (%): С 49.20, Н 4.03, N 16.21. Вычислено (%): С 49.28, Н 4.14, N 16.42. Масс-спектр, m/z: 170.

N(S)-морфолино-N(О)-(пиридино)-тиоксамид (56).

Готовят раствор 4,8 г (0,15 моль) элементной серы в 50 мл ДМФА и добавляют 5 мл (0,06 моль) морфолина. Полученную смесь перемешивают 20-30 минут и при охлаждении добавляют к ней раствор 8,5 г (0,05 моль) хлорацетамида (55) в минимальном количестве ДМФА, следя за тем, чтобы температура не превышала 15°С. Реакционную смесь перемешивают в течение 3-5 часов (контроль по ТСХ). После окончания реакции реакционную смесь пропускают через небольшой слой сорбента, в качестве которого может быть использован силикагель, промывают его 50 мл ДМФА, полученный раствор выливают в воду, экстрагируют этилацетатом, промывают органический слой водой и пропускают через небольшую колонку с силикагелем (элюент-этилацетат). Упаривают этилацетат на роторном испарителе.

Выход: N(S)-морфолино-N(О)-(пиридино)-тиоксамида (56) 8,5 г, (68%). Т.пл. 170-172°С. ЯМР¹H DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 7,41 (м, 1Н, аром); 8,21 (м, 1H, аром); 8,07 (м, 1Н, аром) 8,63 (м, 1H, аром); 3,38 (м, 2Н, СН_2, морф); 4,12 (м, 2Н, СН_2,морф); 10,59 (с, 1H, NH). Найдено (%): С 52.42, Н 5.10, N 16.55. Вычислено (%): С 52.57, Н 5.21, N 16.72. Масс-спектр, m/z: 251.

2-Гидразино-N-пиридин-2-ил-2-тиоксоацетамид (57).

Растворяют 2,5 г (0,01 моль) монотиоксамида (56) в 15 мл ДМФА. При охлаждении и перемешивании добавляют 1 мл (0,02 моль) гидразингидрата. Раствор перемешивают при комнатной температуре еще 2 часа. Затем выливают в воду и подкисляют разбавленной соляной кислотой до рН 7. Отфильтровывают осадок и сушат его на воздухе.

Выход: 2-гидразино-N-пиридин-2-ил-2-тиоксоацетамида (3) 1,2 г, (60%). Т.пл. 164-165°С. ЯМР¹H DMSO_d6 (δ, м.д, J, Гц): 7,41 (м, 1H, аром); 8,21 (м, 1Н, аром); 8,07 (м, 1Н, аром); 8,63 (м, 1Н, аром); 10,59 (с, 1H, NH). Найдено (%): С 42.76, Н 4.01, N 28.44. Вычислено (%): С 42.85, Н 4.11, N 28.55. Масс-спектр, m/z: 196.

2-[N′-(2-Гидроксибензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксоацетамид (58).

К 196 мг (1,0 ммоль) тиогидразида оксаминовой кислоты (57) в 1-2 мл ДМФА добавляют 140 мг (1,1 ммоль) салицилового альдегида в 1 мл ДМФА. Реакционную смесь оставляют на сутки при комнатной температуре, затем добавляют 3 мл метанола, выпавший осадок отфильтровывают и промывают метанолом.

Выход: 2-[N′-(2-гидрокси-бензилиден)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксоацетамида (58) 150 мг, (50%). Т.пл. 204-205°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): 7,02 (м, 4Н, аром); 7,41 (м, 1H, аром); 8,21 (м, 1H, аром); 8,07 (м, 1H, аром); 8,63 (м, 1H, аром); 10,59 (с, 1H, NH); 11,92 (с, 1Н, NH т.амид). 12,76 (с, 1Н, ОН, фен.). Найдено (%): С 55.79, Н 4.12, N 18.66. Вычислено (%): С 55.99, Н 4.03, N 18.65. Масс-спектр, m/z: 300.

2-[N′-(2-Гидроксибензил)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксоацетамид (54).

К 300 мг (1 ммоль) тиогидразона оксаминовой кислоты (58) в 3 мл метанола добавляем 55 мг (1,5 ммоль) боргидрида натрия при охлаждении, следя за тем, чтобы температура не поднималась выше 5 градусов. После добавления боргидрида натрия реакционную смесь перемешиваем 1,5 часа при охлаждении, затем выливаем в 30 мл холодной воды и подкисляем разбавленной соляной кислотой до нейтральной реакции по лакмусу. Выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из изопропанола или хлороформа.

Выход гидразида (54) 211 мг (70%), Т.пл. 231-232°С. ЯМР¹Н DMSO_d6 (δ, м.д., J, Гц): ЯМР¹H DMSO_d6 (δ, м.д, J, Гц): 4,39 (с, 1H, СН₂); 7,05 (м, 4Н, аром); 7,43 (м, 1H, аром); 8,25 (м, 1H, аром); 8,11 (м, 1H, аром); 8,66 (м, 1H, аром); 10,61 (с, 1H, NH); 12,16 (c, 1H, ОН, фен.). Найдено (%): С 55.52, Н 4.74, N 18.67. Вычислено (%): С 55.62, Н 4.67, N 18.53. Масс-спектр, m/z: 302.

Аналогично были получены соединения формулы (I), где R и R₁ представляют собой незамещенные или замещенные Het, Ar, Alk, при этом заместителями могут быть NR₃R₄, CONR₃R₄, CONHNR₃R₄, COR₃, NO₂, CN, OH, OR₃, SH; R₂ представляет собой COOR₃, CONH₂, NO₂ CN, OH, SR₃, где R₃,R₄ = Alk с выходами 70-75%.

Для определения биологической активности производных тиогидразидов оксаминовых кислот были использованы следующие методы:

1. Метод суспензионного заражения эукариотических клеток.

Для получения суспензии использовали суточный монослой клеток McCoy В и HL, который обрабатывали 2,5 мл раствора трипсина и версена (соотношение 1:3, соответственно) для открепления клеток от поверхности флакона. Флакон помещали в термостат на 5 мин. Затем отбирали раствор трипсина и версена и добавляли 2,5 мл полной среды культивирования (СК). Открепившиеся клетки отмывали в указанном объеме СК путем центрифугирования при 1000 об/мин 10 мин. Убирали надосадок и ресуспендировали клетки в 2 мл СК.

Для получения монослоя из приготовленной клеточной суспензии производили подсчет клеток в камере Горяева из расчета 1,5×10⁵ кл/мл. Заражение клеток штаммом Bu-434 Chlamydia trachomatis серовар L2 производили в соотношении бактерия:клетка 1:1 в необходимом объеме транспортной среды, что обеспечивает 80-90% инфицированных клеток. Готовую суспензию вносили в лунки 96- или 24-луночных планшетов в объеме 100 мкл или 1000 мкл соответственно. Для осаждения клеток и стимуляции взаимодействия с ними хламидий планшеты центрифугировали при 3000 об/мин 1 час при температуре 25°С. После этого планшет помещали в СО₂ инкубатор на 48 ч при 37°С.

2. Определение влияния производных тиогидразидов оксаминовых кислот на жизнеспособность хламидий.

Исследуемые химические соединения в разных концентрациях вносили в культуру клеток одновременно с патогеном, для оценки возможного их влияния на взаимодействие хламидии с эукариотической клеткой: сразу после центрифугирования зараженной суспензии (ранняя стадия внутриклеточного цикла хламидии 0-2 ч), через 6-8 часов после начала эксперимента (средняя фаза), через 16 часов (поздняя стадия). Эффект оценивали методом прямой иммунофлюоресценции и путем высева материала, полученного из лизата клеток, инфицированных в присутствии ингибитора клеток.

Для данного метода были использованы клеточные линии McCoy В и HL. Работу проводили в формате 96-луночных планшетов. В суточном монослое клеток заменяли СК на транспортную среду (ТС) и заражали С.trachomatis L2 для получения 80-90% инфицированных клеток (множественность инфекции 1:1). После центрифугирования при 3000 об/мин 30 мин при 25°С клетки инкубировали в течение 48 ч в СО₂ инкубаторе при 37°С. Разные дозы исследуемого соединения добавляли в рабочую суспензию с учетом особенностей жизненного цикла хламидии, как было описано ранее. Спустя 48 ч из лунок отбирали надосадок и планшет помещали на 30 мин при -70°С, для того чтобы лизировать инфицированные клетки. В получившийся лизат добавляли 100 мкл транспортной среды и готовили разведения материала 1:10-1:1000. Заражали суточный монослой клеток с последующим центрифугированием при 3000 об/мин 30 мин при 25°С. После 48 ч инкубирования в ранее указанных условиях, клетки фиксировали и окрашивали меченными ФИТЦ (флюоресцеинизотиоцианит) моноклональными антителами для последующего учета результатов методом иммунофлюоресцентной микроскопии.

3. Методы прямой иммунофлюоресценции.

Методы иммунофлюоресценции направлены на выявление объектов, содержащих некоторый антиген, и основаны на обработке препаратов соответствующими антителами, меченными флюорохромом, с последующей микроскопией в ультрафиолетовом луче.

В данной работе использован метод прямой иммунофлюоресценции (стандартная методика), позволяющий проводить полуколичественный учет развития хламидийной инфекции. Для этого использован коммерческие наборы ЗАО "НИАРМЕДИК плюс" при НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи РАМН (ФС 42-359598 и регистрационное удостоверение Минздрава России 93/270/9) "Хламоноскрин" для определения моноклональных антител к родоспецифическому липополисахаридному антигену Chlamydia и "Хламоноскрин-2" для определения моноклональных антител к видоспецифическому белковому антигену C.trachomatis.

Работу проводили на клеточных линиях McCoy В и HL, инфицированных С.trachomatis серовар L2 в формате 96-луночных планшетов или 24-луночных со стеклами. Для этого суточный монослой заражали для получения 80-90% инфицированных клеток и одновременно с внесением инфекции добавляли разные дозы исследуемых химических соединений. Планшет центрифугировали при 3000 об/мин 30 мин при 25°С и инкубировали клетки в течение 48 ч в СО₂ инкубаторе при 37°С. Через 48 ч из лунок отбирали надосадок и фиксировали клетки. При работе с 96-луночными планшетами фиксацию осуществляли ледяным 72° этанолом с последующим помещением планшета на 30-40 мин на -20°С. При работе с 24-луночными планшетами стекла промывали в 0,1 моль/л растворе ФСБ и высушивали. После этого клетки фиксировали ацетоном в течение 15 мин при комнатной температуре. На фиксированные клетки наносили 30-50 мкл моноклональные, меченные ФИТЦ антитела к белковым антигенам всех серотипов C.trachomatis (ХлаМоноСкрин-2, ООО «НИАРМЕДИК ПЛЮС») и инкубировали в течение 30 мин во влажной камере при 37°С. После инкубации клетки промывались 2 раза раствором ФСБ. Препарат полностью высушивали. В формате 24-луночных планшетов, подготовленные таким образом стекла монтировали на предметное стекло при помощи монтирующей жидкости (забуференный глицерин). Готовые препараты исследовали в люминесцентном микроскопе.

Для определения токсичности производных гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот были использованы следующие методы:

4. Методы определения цитотоксического эффекта производных гидразонов тиогидразидов оксаминовых кислот.

А) Для эукариотической клетки использовали метод окрашивания клеток метиленовым синим (стандартная методика) с последующим спектрометрическим учетом результатов. Работу проводили в формате 96-луночных планшетов.

В суточном монослое клеток McCoy В (гибридная линия синовиальных клеток человека и мышиных фибробластов) и HL (эпителиальные клетки легкого человека) заменяли среду культивирования на полную СК с циклогексимидом и вносили разные дозы исследуемых химических соединений. Клетки инкубировали в течение 24 и 48 часов в СО₂ инкубаторе при 37°С. Спустя 24/48 ч из лунок отбирали надосадок и отмывали клетки 0,1 моль/л раствором фосфатно-солевого буфера (ФСБ). Клетки фиксировали охлажденным метанолом (20 мкл) в течение 15 мин при 4°С. К фиксированным клеткам добавляли 40 мкл 0,5% метиленового синего и инкубировали 20 мин при комнатной температуре. После инкубации метиленовую синь отбирали из лунок и отмывали клетки ФСБ 4 раза. В лунки добавляли 100 мкл додецилсульфата натрия (SDS) в ФСБ и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре до полного лизиса клеток. Количество живых клеток определяли спектрометрически при длине волны 540 нм на флуориметре MuktiscanEX.

Б) Метод, направленный на определение метаболической активности клетки - МТТ-тест (Niks M., Otto M. Toward sanoptimized МТТ assay. // J Immunol. - 1900. - V.130, №1, - p.149-151), основанный на восстановлении бесцветной соли тетразолия (3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромид, МТТ) митохондриальными и цитоплазматическими дегидрогеназами живых метаболически активных клеток с образованием голубых кристаллов формазана, количество которого измеряется спектрометрически.

Метод проводили в формате 96-луночного культурального планшета. В суточном монослое клеток McCoy В и HL заменяли среду культивирования на полную СК без циклогексемида и вносили разные дозы исследуемых химических соединений. Клетки инкубировали в течение 48 часов в СО₂ инкубаторе при 37°С. За 4 часа до окончания эксперимента вносили 1:10 от объема культуральной среды 10х раствора МТТ (5 мг/мл). Инкубировали 4 часа при 37°С 5% СО₂. Отбирали среду, отмывали однократно ФСБ. Добавляли в каждую лунку 100 мкл изопропанола (пропанола-2). Инкубировали при комнатной температуре 30 минут. Оценивали оптическую плотность при длине волны 540 нм на флуориметре Muktiscan EX. Субстратное поглощение оценивали при 405 нм.

Пример 18.

Определение биологической активности.

Соединение LHC 764 (получено по примеру №2)

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(4-фторфенил)-2-тиоксоацетамид

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Анализ токсичности LHC 764 в условиях in vitro (при добавлении 50 мМ раствора в среду культивирования эукариотических клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании в течение 48 часов при 37°С), проведенный методами 4. А-Б, выявил отсутствие токсического эффекта в дозе 12,5 и 25 мкМ. В дозе 50 мкМ токсический эффект составил в среднем 40%. Максимальные показатели токсичности отмечены в дозе 75 мкМ и составили 75-80%.

Способность данного соединения подавлять внутриклеточный жизненный цикл хламидии в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 1-3. Наилучший эффект соединение LHC 764 проявляет в дозе 50 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивированием в течение 48 часов. Показано, что в данных условиях количество инфицированных клеток составляет 15% по сравнению с аналогичными показателями контроля (инфицированные клетки, культивируемые без добавления исследуемого химического соединения).

Таким образом, данное соединение характеризуется антибактериальным эффектом в дозе 50 мкМ при допустимом уровне токсичности данной дозы для эукариотических клеток.

Пример 19.

Соединение LHC 765 (получено по примеру №7)

2-[2-(3-этокси-2-гидроксибензил)гидразино]-N-(2-(трифторметил)фенил)-2-тиоксоацетамид

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Анализ токсичности LHC 765 в условиях in vitro (при добавлении 50 мМ раствора в среду культивирования эукариотических клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании в течение 48 часов при 37°С), проведенный методами 4. А-Б, выявил отсутствие токсического эффекта в дозе 12,5 и 25 мкМ. В дозе 50 мкМ токсический эффект составил в среднем 32%. Максимальные показатели токсичности отмечены в дозе 75 мкМ и составили 75-80%.

Способность данного соединения подавлять внутриклеточный жизненный цикл хламидии в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 1-3. Наилучший эффект соединение LHC 765 проявляет в дозе 50 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивированием в течение 48 часов. Показано, что в данных условиях количество инфицированных клеток составляет 20% по сравнению с аналогичными показателями контроля (инфицированные клетки, культивируемые без добавления исследуемого химического соединения).

Таким образом, данное соединение характеризуется антибактериальным эффектом в дозе 50 мкМ при допустимом уровне токсичности данной дозы для эукариотических клеток.

Пример 20.

Соединение LHC 723 (получено по примеру №17)

2-[N′-(2-Гидроксибензил)-гидразино]-N-пиридин-2-ил-2-тиоксоацетамид

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Анализ токсичности LHC 723 в условиях in vitro (при добавлении 50 мМ раствора в среду культивирования эукариотических клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании в течение 48 часов при 37°С), проведенный методами 4. А-Б, выявил отсутствие токсического эффекта в дозе 12,5 и 25 мкМ. В дозе 50 мкМ токсический эффект составил в среднем 25%. Максимальные показатели токсичности отмечены в дозе 75 мкМ и составили 65-70%.

Способность данного соединения подавлять внутриклеточный жизненный цикл хламидии в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 1-3. Наилучший эффект соединение LHC 723 проявляет в дозе 50 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивированием в течение 48 часов. Показано, что в данных условиях количество инфицированных клеток составляет 5-10% по сравнению с аналогичными показателями контроля (инфицированные клетки, культивируемые без добавления исследуемого химического соединения).

Таким образом, данное соединение характеризуется антибактериальным эффектом в дозе 50 мкМ при допустимом уровне токсичности данной дозы для эукариотических клеток.

Пример 21.

Соединение LHC 683 (получено по примеру №12)

5-этил-2-{[1-(2-гидроксибензил)-гидразино]-2-тиоксо-N-[амино}-тиофен-3-этилкарбоксилат]ацетамид

Соединение характеризуется высокой степенью растворимости в ДМФ, не образует осадка в процессе хранения и при переведении в транспортную среду.

Анализ токсичности LHC 683 в условиях in vitro (при добавлении 50 мкМ раствора в среду культивирования эукариотических клеток в дозах 12.5, 25, 50 и 75 мкМ и последующем инкубировании в течение 48 часов при 37°С), проведенный методами 4. А-Б, выявил отсутствие токсического эффекта в дозе 12,5 и 25 мкМ. В дозе 50 мкМ токсический эффект составил в среднем 30%. Максимальные показатели токсичности отмечены в дозе 75 мкМ и составили 90-95%.

Способность данного соединения подавлять внутриклеточный жизненный цикл хламидии в условиях in vitro оценивалась при помощи методов 1-3. Наилучший эффект соединение LHC 683 проявляет в дозе 50 мкМ при добавлении в СК клеток HL одновременно с инфекционным материалом (штамм C.trachomatis L2) и последующем культивированием в течение 48 часов. Показано, что в данных условиях количество инфицированных клеток составляет 5-10% по сравнению с аналогичными показателями контроля (инфицированные клетки, культивируемые без добавления исследуемого химического соединения).

Таким образом, данное соединение характеризуется антибактериальным эффектом в дозе 50 мкМ при допустимом уровне токсичности данной дозы для эукариотических клеток.

Технический результат, достигаемый заявленной группы изобретений, заключается в получении новых соединений - N-замещенных производных тиогидразидов оксаминовых кислот с хорошим выходом, обладающих антибактериальной активностью в отношении патогенных бактерий, в том числе и хламидии. При этом полученные соединения хорошо растворимы в органических растворителях, обладают стабильностью и приемлемой токсичностью для нормальной микрофлоры и клеток хозяина, в частности для эукариотических клеток.