[1]Изобретение относится к области фармацевтики и может быть использовано в ветеринарии для подавления признаков половой охоты у мелких домашних животных, преимущественно у кошек и собак. Предлагается ветеринарная композиция на основе комбинации мегестрола ацетата (МА) с эстрогеном (Э), представленная в таблетированной форме или в виде жидкой формы (капель) для приема per os, которая характеризуется содержанием МА от 0,01 до 0,09% и соотношением МА/Э от 5:1 до 500:1. Новая пероральная форма является эффективным средством данного назначения с повышенным уровнем безопасности в сравнении с аналогами, предусматривающими топикальный способ применения.
[3]Существуют два основных подхода к решению проблемы контрацепции мелких домашних животных: хирургический и консервативный. При этом каждый из них имеет свои достоинства и недостатки.
[4]Что касается оперативного способа контрацепции, то к числу его основных недостатков следует отнести инвазивный характер, необратимый результат хирургического вмешательства, риск осложнений и летального исхода. Консервативные способы контрацепции, которые предполагают использование фармакологических средств, представленных, главным образом, гестаген-содержащими гормональными препаратами, вызывают у некоторых специалистов претензии, связанные преимущественно с последствиями сдвига гормонального статуса, выражающимися в возникновении характерных для некоторых прогестинов побочных эффектов.
[5]Существенным шагом вперед в решении проблемы безопасности и эффективности средств, предназначенных для гормональной регуляции половой охоты мелких домашних животных, стало применение для этой цели т.н. бигормональных композиций, а именно препаратов, представляющих собой комбинацию гестагенного и эстрогенного гормонов.
[7]Моногормональные контрацептивные препараты в ветеринарии мелких домашних животных применяются уже несколько десятилетий. Наиболее изученным действующим веществом (ДВ) таких препаратов, получившим широкое применение в ветеринарии для предотвращения течки или ее прерывания, является мегестрола ацетат (МА).
[8]Мегестрола ацетат - производное природного метаболита прогестерона - 17α-гидроксипрогестерона. Он обладает высоким уровнем гестагенной активности и относится к числу наиболее изученных в физиологическом отношении прогестинов, в том числе в плане возможных побочных эффектов. Установлено, что при пероральном применении МА в рекомендуемых дозах не оказывает мутагенного, тератогенного, сенсибилизирующего и гепатотоксического действия (Инструкции по применению препарата «СексКонтроль К», «Стоп-Интим» и др.), а риск развития побочных явлений оценивается специалистами как незначительный (Симпсон Дж. и др. Руководство по репродукции и неотологии собак и кошек. 2005, М.: Софинон, 229-230).
[9]Известно, что МА легко адсорбируется в кишечнике, биотрансформируется в печени и в виде метаболитов полностью выводится из организма с мочой и фекалиями. Гормон действует на гипоталамо-гипофизарную систему, блокируя секрецию гонадотропных гормонов (ФСГ и ЛГ). При использовании до начала течки он предотвращает овуляцию, а при применении в начале фолликулярной фазы приводит к ее прекращению. Существенно, что снижение половой активности животного сопровождается устранением и связанных с ней поведенческих проблем, включающих мечение территории, возбужденное поведение, агрессивность и т.п.
[10]В настоящее время на территории России зарегистрированы и разрешены для применения в ветеринарной практике следующие пероральные препараты на основе МА: таблетки «СексКонтроль К» и «СексКонтроль капли» (ЗАО «НПФ «Экопром»), суспензия (капли) и таблетки для кошек «Стоп-Интим» (ООО НПО "Апи-Сан"), таблетки «ЭКС-5Т», суспензия «ЭКС-5» и «ЭКС-7,5», таблетки и капли (эмульсия) «Четыре с хвостиком» (ООО "НВЦ Агроветзащита С-П.") и др. Общим недостатком известных моногормональных средств с МА является необходимость использования для достижения супрессивного эффекта значительных разовых и суммарных (курсовых) доз гестагена.
[11]В последние годы проблема снижения содержания гестагена в составе гормональных контрацептивов и, соответственно, повышения эффективности и безопасности препарата достаточно успешно решается путем использования гестагена в комбинации с эстрогеном, т.е. создания бигормональных композиций. Сегодня пероральные бигормональные средства для подавления половой охоты у мелких домашних животных предложены для целого ряда различных комбинаций гестаген/эстроген (патенты РФ 2248795 С2, 27.03.2005; 2295345 С1, 20.03.2007; 2456991 С1, 27.07.20012; 2456992, 27.07.2012; 2455005 С1, 10.07.2012, 2455006 С1, 10.07.2012 и др.).
[12]Недавно патентом РФ №2545745 С1, 10.04.2015 защищена бигормональная композиция, которая содержит в качестве активного начала комбинацию мегестрола ацетата с этинилэстрадиолом (ЭЭ). Данная разработка может рассматриваться как ближайший аналог (прототип) настоящего изобретения, поскольку в состав раскрытой в названном патенте композиции входит та же комбинация ДВ, что и в настоящем изобретении, - МА/ЭЭ.
[13]Прототип представляет средство для регуляции половой охоты у кошек и собак, содержащее мегестрола ацетат в концентрации 0,5-2,5%, этинилэстрадиол в концентрации 0,01-0,02%, D,L-α-токоферол в концентрации 0,005% и ментол в концентрации 0,01%. Предлагаемое средство представлено в форме капель для нанесения на холку, где растворителем (массовая доля в составе более 97%) является моноэтиловый эфир диэтиленгликоля (ДЭМЭ). При этом сообщается, что в результате применения препарата согласно предлагаемой авторами схеме течка не наступала ни у одной из исследованных кошек, прерывание течки наблюдалось у всех экспериментальных животных в сроки от 3 до 6 дней, а нормальный половой цикл восстанавливался через 2,5-3 месяца после прекращения его использования. Как следует из формулы изобретения (зависимый п.2), предпочтительными формами реализации изобретения являются препараты с максимальным содержанием мегестрола (2,5%). Это подтверждается и составом появившегося позднее на базе данного патента коммерческого препарата Секс-Контроль spot on (Инструкция по применению препарата СексКонтроль спот-он, организация-разработчик НПФ «Экопром»), в котором МА использован в концентрации 2,5%.
[14]При очевидном преимуществе, состоящем в простоте нанесения препарата, нельзя не обратить внимания на то, что, несмотря на достаточно длительный период ведения разработок, относящихся к контрацептивам на основе гестагенов, лекарственная форма spot on для них никем из производителей до настоящего времени не использовалась. Это обстоятельство представляется не случайным, если принять во внимание большое число недостатков, связанных с данной лекарственной формой, которые хорошо известны специалистам. К основным недостаткам средств, представленных в виде капель на холку, и особенно прототипа, содержащего ДВ гормональной природы, следует отнести следующие.
[15]а) Топикальное применение препаратов значительно повышает вероятность ошибок в плане достижения, поддержания и воспроизведения необходимых терапевтических доз (точности дозирования) в сравнении с пероральным, поскольку невозможно в каждом отдельном случае оценить величину потерь ДВ во внешней среде и при проникновении в кровоток после нанесения лекарственного средства.
[16]б) После использования средств типа spot on возникает необходимость во временном (во многих случаях длительном) изолировании животного, т.к. без этого велика возможность переноса компонентов препарата на кожу людей (в том числе детей) либо непосредственно, либо через загрязненные животным предметы обихода.
[17]в) В результате необходимости ограничения контактов с владельцами (особенно детьми) животное на тот или иной, часто достаточно длительный, срок лишается необходимого ухода (расчесывания, мытья и т.п.) и привычного для него общения с хозяевами.
[18]г) Как правило, рассматриваемая форма препарата включает значительные количества органических растворителей, большинство из которых являются токсичными соединениями, и может оказывать неблагоприятное воздействие на волосяной покров и кожу животного, а при случайном попадании в рот - вызывать симптомы отравления.
[19]д) Топикальный способ нанесения препарата в расчете на потери во внешней среде и при проникновении через кожный покров традиционно предполагает использование составов с более высокими концентрациями ДВ, чем в аналогах, предназначенных для орального применения. Так, например, в препарате «Празицид суспензия Плюс» (НПО «Апи-Сан») для орального применения собакам концентрация ДВ (празиквантела) составляет 15 мг/мл, а в его аналоге «Празицид-комплекс» для нанесения на холку - 102 мг/мл; в препаратах «Диронет суспензия» для кошек и «Диронет» спот-он для кошек (НВЦ «Агроветзащита») эта разница 17-кратная: 5 мг/мл против 85 мг/мл. (Инструкции по применению препаратов на сайте www.veterinarka.ru/vetmedicaments). Есть все основания считать (подробно см. далее), что именно эта особенность не позволила разработчикам препарата СексКонтроль spot on (прототипа) реализовать известное преимущество бигормональных композиций над моногормональными аналогами, заключающееся в возможности значительно снизить содержание гестагена в составе лекарственного средства. Так, для запатентованной формы spot on согласно схеме применения, предлагаемой в описании к патенту, курсовая доза МА для прерывания течки у кошек весом 5 кг (при исходной концентрации МА 2,5%) составляет 35 мг МА/ гол, тогда как расход МА в составе моногормонального препарата (Секс-Контроль, капли) на тот же курс и при той же исходной концентрации гестагена равен 17,5 мг/гол.
[20]С учетом вышеизложенного, задачей настоящего изобретения было создание пероральной формы бигормонального препарата на основе комбинации «мегестрола ацетат/эстроген», предназначенной для подавления признаков половой охоты у мелких домашних животных, которая демонстрировала бы высокую эффективность при существенно более низких, чем в прототипе, терапевтически эффективных дозах МА, обеспечивала отсутствующие у препарата СексКонтроль (spot on) возможности точного дозирования и была бы более безопасной для здоровья животного, а также - для окружающей среды (технические результаты).
[21]Раскрытие изобретения
[22]Поставленная задача была решена путем разработки низкодозированных (с концентрацией гестагена 0,01-0,09%) бигормональных композиций на основе комбинации МА/эстроген, предназначенных для мелких домашних животных и проявляющих свое действие при приеме per os.
[23]Сведений о пероральных формах бигормональных препаратов для регуляции половой охоты у кошек и собак, включающих в качестве ДВ мегестрола ацетат с эстрогеном, в общедоступных источниках на сегодняшний день не имеется. Вместе с тем, в уровне техники представлена информация, позволяющая провести предварительную теоретическую оценку возможности разработки эффективной пероральной формы, содержащей МА в комбинации с эстрогеном, а также достаточных для проявления активности доз МА в ее составе.
[24]Во-первых, это результаты исследований на крысах, показавшие, что МА, наряду с некоторыми эфирами ацетата мепрегенола (АМОЛА), в частности бутиратом и гемисукцинатом, демонстрирует многократное повышение контрацептивной активности в случае использования в комбинации с эстрогенами, в частности с этинилэстрадиолом (Зейналов О.А. и др., 2012, Химико-фармацевтический журнал, 46, №4, 7-10). Так, при ежедневном пероральном применении комбинации МА/ЭЭ в течение 14 дней в разовых дозах, соответственно, 0,8 мг и 0,04 мг на кг веса животного достигался 100%-ный контрацептивный эффект, тогда как при использовании в тех же условиях только МА его контрацептивная активность составляла лишь 23%.
[25]Во-вторых, это сведения о запатентованных разработках последних лет, связанных с получением оральных бигормональных препаратов для подавления половой охоты у кошек и собак на основе комбинации эстрогена с эфирами АМОЛА (патенты РФ №2455005, 10.07.2012; 2455006, 10.07.2012; 2456991, 10.07.2012; 2456992, 10.07.2012; 2295345, 20.03.2007), сравнимыми по уровню контрацептивной активности с МА (Зейналов О.А., 2012), а также информация о практике применения известных коммерческих препаратов СексБарьер и КонтрСекс Neo (ООО "НВП "Астрафарм", РФ), содержащих в качестве ДВ, соответственно, бутират и гемисукцинат АМОЛА.
[26]На первом этапе нами был проведен анализ концентраций ДВ, схем применения, разовых, суточных и курсовых доз бигормональных препаратов СексБарьер и КонтСекс Neo (ООО "НВП"Астрафарм", РФ). Результаты анализа капельных форм названных коммерческих препаратов для перорального применения приведены в таблице 1.
[27]
[28]Примечание: при расчете использовали данные для животных одной и той же весовой группы (до 5 кг) и максимальные сроки курса; объем 1 капли раствора принимали за 0,025 мл; ГГ-гестаген.
[29]В таблице 2 представлены концентрации, схемы применения, суточные и курсовые дозы для средства-прототипа (по данным описания к патенту РФ №2545745 С1).
[30]
[31]Примечание: при расчете использовали данные для животных одной и той же весовой группы (до 5 кг), минимальную и максимальную концентрации гестагена и максимальные сроки курса.
[32]Из сравнения показателей для известных бигормональных композиции (капли для приема per os) и капельных форм spot on по прототипу с очевидностью следует, что исходные концентрации (0,1-0,6%) и суточные дозы (0,1-0,6 мг/гол) гестагена для препаратов «СексБарьер» и «КонтрСекс Neo» располагаются в области существенно меньших значений в сравнении с используемыми в прототипе, где концентрации гестагена составляют 0,5-2,5%, а суточные дозы 0,5-1,0 мг/гол при минимальной и 2,5-5,0 мг/гол - при максимальной концентрации. Терапевтически эффективная (курсовая) доза обоих коммерческих пероральных препаратов во всех случаях также многократно ниже, чем в средстве-аналоге: для самок она составляет 0,5-1,4 мг/гол против 6,5-7,5 мг/гол (при концентрации МА 0,5%) и против 32,5-37,5 мг /гол (при концентрации 2,5%) в прототипе; для самцов она равна 2-4,2 мг/гол против 14 мг/гол (при концентрации 0,5%) и против 70 мг /гол (при концентрации 2,5%) в прототипе. Сравнительный анализ этих показателей прототипа и таблетированных препаратов «КонтрСекс Neo» и «СексБарьер» дал аналогичные результаты.
[33]На втором этапе исследований описанные выше теоретические предпосылки принципиальной возможности снижения (в сравнении с прототипом) терапевтически эффективных доз средства для регуляции половой охоты были проверены в широком интервале исходных концентраций МА (от 0,1 до 2,5%), включающем, помимо области, общей с прототипом (0,5-2,5%), и область значительно меньших концентраций (0,1-0,49%), являющуюся «рабочей» для бигормональных препаратов того же назначения с бутиратом или гемисукцинатом АМОЛа. При этом было установлено, что применение и таблеток, и суспензий per os с меньшими, чем в прототипе, концентрациями МА (от 0,1 до 0,49%) и интервалом соотношений ЭЭ/МА от 5:1 до 500:1 обеспечивало подавление признаков половой охоты у 100% собак и кошек обоих полов в течение 4-7 дней (в зависимости от дозы ДВ). Полученные данные свидетельствовали о том, что переход на использование более низких концентраций МА (0,1-0,49%) без потери эффективности препарата обеспечивается в данном случае сменой лекарственной формы с топикальной на пероральную. Результаты этого этапа включены нами в заявку №2016149541, дата подачи 16.12.2016.
[34]Третий этап испытаний предусматривал постановку экспериментов для проверки гипотезы о возможности использования комбинации МА/Э для подавления признаков половой охоты у кошек и собак в составе препаратов для перорального применения, где концентрация ДВ (по гестагену) составляла бы менее 0,1%. Предположение о возможности разработки такого низкодозированного контрацептивного препарата, который обладал бы при этом необходимым уровнем активности, основывалось на известном из уровня техники факте, что МА демонстрирует значительно более высокие уровни гестагенной активности, чем бутират и гемисукцинат АМОЛа: относительная гестагенная активность МА в несколько раз выше, чем у названных эфиров. Существенным моментом при разработке низкодозированного перорального средства по изобретению было также и то, что МА, будучи использован в столь низких концентрациях, практически полностью растворяется в приемлемых для применения per os растворителях, что устраняет чисто технические препятствия, обычно возникающие при создании и применении пероральных форм со слабо растворимыми ДВ.
[35]В результате проведенных на этом этапе испытаний были разработаны два основных состава, представляющие собой жидкую (капли per os) и таблетированную формы бигормональной композиции на основе комбинации МА/Э, концентрация гестагена в которых составляет 0,01-0,09%, а соотношение с эстрогеном 5-500:1. Оба варианта перорального средства обеспечивали эффективное подавление признаков половой охоты у кошек и собак при использовании в десятки раз более низких курсовых доз, чем в случае применения ближайшего аналога. При этом, кроме многократного снижения (в сравнении с прототипом) содержания гестагенного компонента и, соответственно, уменьшения возможности возникновения побочных эффектов (опасности для здоровья животного), предлагаемые композиции лишены таких существенных недостатков прототипа (формы spot on), как невозможность точного дозирования ДВ; необходимость ограничения контактов животного с окружающими людьми и предметами обихода и/или постоянного контроля за поведением питомца после применения препарата. Перечисленное подтверждает достижение всех технических результатов, запланированных при постановке задачи (см. выше).
[36]Осуществление изобретения
[37]Ниже приведены примеры, подтверждающие возможность реализации настоящего изобретения с достижением указанных технических результатов, но не ограничивающие его объема.
[38]Пример 1. Получение составов
[39]Жидкие формы предлагаемого средства получали следующим образом. МА и ЭЭ предварительно микронизировали и из измельченных субстанций готовили навески, необходимые для получения нужной концентрации ДВ в изготавливаемом объеме препарата.
[40]Вариант 1. Требуемое количество оливкового масла помещали в стакан, нагревали до t≈40°С и перемешивали при этой температуре 5 минут, после чего нагревание прекращали. К нагретому маслу прибавляли расчетные количества предварительно микронизированного мегестрола ацетата и ЭЭ, интенсивно перемешивали еще в течение 30 минут. Наблюдали практически полное растворение навесок ДВ в масле и отсутствие помутнения или выпадения осадка в последующие несколько суток.
[41]Вариант 2. В стакан наливали смесь воды с глицерином (в соотношении примерно 1:1). При постоянном перемешивании к смеси прибавляли расчетные количества предварительно микронизированного мегестрола ацетата и этинилэстрадиола, после чего смесь гомогенизировали еще в течение 30 минут. Результаты растворения и наблюдения за последующим состоянием раствора были теми же, что и в первом варианте.
[42]Таким образом, получали препараты в 2 различных жидких фазах для суспендирования: масляной и водно-глицериновой. В последующих экспериментах использовали в основном масляные формы, а водно-глицериновую использовали далее, главным образом, для проведения сравнительных экспериментов.
[43]Для оценки влияния концентрации ДВ на эффективность подавления признаков половой охоты с помощью жидких форм использовали составы с различными концентрациями МА и ЭЭ (в масс %) и постоянным соотношением активных компонентов (50:1):
[44]№1: МА 0,01; ЭЭ 0,0002; масло оливковое до 100
[45]№2: МА 0,05; ЭЭ 0,001; масло оливковое до 100
[46]№3:МА 0,09; ЭЭ 0,0018; масло оливковое до 100
[47]№4: МА-0,09; ЭЭ 0,0018; вода/глицерин до 100
[48]Твердые формы (таблетки) предлагаемого средства получали одним из двух способов. Для производства основной части таблетированных форм применялся метод влажного гранулирования, описанный в патенте РФ 2456992. Другую часть таблеток формовали прямым прессованием с микроцеллюлозой. В экспериментах на животных применялись, главным образом, таблетки, приготовленные методом влажного гранулирования, в которых вспомогательные вещества были представлены комбинацией лактоза+крахмал+стеарат кальция (наполнитель для таблетирования 1), тогда как таблетки, полученные-прямым прессованием с микроцеллюлозой (наполнитель для таблетирования 2), использовали для оценки влияния состава вспомогательных веществ на активность препарата. Вес полученных таблеток в обоих случаях составлял 100 мг.
[49]Для исследования эффекта композиции МА+ЭЭ в таблетированной форме использовали составы (№5-8), по содержанию МА (0,01-0,09%) и соотношению ДВ (50:1) аналогичные жидким формам:
[50]№5: МА 0,01; ЭЭ 0,0002; наполнитель 1 до 100
[51]№6: МА 0, 05; ЭЭ 0,001; наполнитель 1 до 100
[52]№7: МА 0,09; ЭЭ 0,0018; наполнитель 1 до 100
[53]№8: МА 0,09; ЭЭ 0,0018; наполнитель 2 до 100
[54]Пример 2. Условия проведения испытаний.
[55]Испытания проводили в частных питомниках под наблюдением ветеринарных врачей. Для испытаний отбирали половозрелых, клинически здоровых, близких по весу (4-5 кг) и возрасту (с разницей в пределах 2 лет) кошек и собак. Из отобранных таким образом животных формировали опытные группы. В состав каждой группы включали по 6 животных.
[56]До введения препаратов животные содержались в вольерах на обычном рационе. Препараты задавали животным при появлении первых признаков половой охоты, но не позднее 2-х дней с момента их начала. У собак половое возбуждение внешне проявлялось беспокойством, у сук частым мочеиспусканием, облизыванием вульвы, выделениями из петли; кошки издавали пронзительные крики, катались по полу, изгибали спину, терлись головой и шеей о вольер; коты также издавали пронзительные крики и метили вольер.
[57]Капельные формы применяли путем закапывания в рот по 4 капли 1 раз в день для кошек и 2 раза в день для собак. Таблетированные составы задавали принудительно на корень языка по 1 таблетке 1 раз в день для кошек и 2 раза в день для собак. Прием препарата продолжали до исчезновения признаков половой охоты, фиксируя число дней, необходимых для полного успокоения животного. Весь этот период вели наблюдение за состоянием и поведением животных. В случае наличия в группе отдельных особей, которые в течение более 7 дней не давали адекватной реакции на препарат, фиксировали отрицательный результат, определяющий снижение общего показателя эффективности.
[58]Пример 3. Оценка эффективности действия препарата у кошек
[59]В эксперимент было включено 8 групп кошек (4 группы по 6 самцов и 4 группы по 6 самок), отбор и содержание которых проводились так, как это описано в примере 2. Животным обоих полов задавали препараты per os (см. пример 2) 1 раз в день, растворы - по 4 капли (0,1 мл), таблетированные формы - по 1 таблетке.
[60]Результаты испытаний представлены в таблицах 4 (суспензии) и 5 (таблетки).
[61]
[62]
[63]По результатам проведенных исследований были сделаны следующие выводы:
[64]1. При курсовых дозах МА более 0,07 мг/гол (до 5 кг) в сроки от 4 до 7 дней у всех опытных животных (кошек и котов) полностью исчезали признаки половой охоты. При этом отмечалась четкая дозозависимость, выражающаяся в увеличении времени, за которое в соответствующей опытной группе достигалось полное успокоение животных: при минимальной суточной дозе (0,01 мг/гол) оно составляло примерно 6-7 дней, при максимальной (0,09 мг/гол) - примерно 4-6 дней.
[65]2. При сравнении используемых доз установлено, что минимальные суточные дозы для кошек и котов (0,01 мг/гол), а также курсовые дозы для кошек (0,06-0,07 мг/гол) в 100 раз ниже, чем в прототипе, а минимальные терапевтически эффективные (курсовые) дозы для котов (0,07 мг/гол) удается снизить по сравнению с прототипом (14 мг/гол) в 200 раз.
[66]3. Составы с одинаковыми концентрациями и соотношениями ДВ (№3 и №4, а также №7 и №8) и различными вспомогательными веществами (жидкими фазами или наполнителями для таблетирования) демонстрировали сопоставимую эффективность, что свидетельствует о возможности выбора и применения различных вспомогательных компонентов из числа используемых в данной области средств этого назначения без негативного влияния на активность препарата.
[67]Пример 4. Оценка эффективности действия препарата у собак
[68]Испытания проводили на 8 группах собак (4 группы самцов и 4 группы самок по 6 особей в каждой), отбор и содержание которых проводились так, как это описано в примере 2. Препараты животным задавали 2 раза в день, растворы - по 4 капли (0,1 мл), а таблетированны формы - по 1 таблетке. Результаты испытаний представлены в таблицах 6 (растворы) и 7 (таблетки).
[69]
[70]
[71]По результатам проведенных исследований были сделаны следующие выводы:
[72]1. Признаки половой охоты полностью исчезали у опытных животных (сук и кобелей) в течение 4-7 дней. При этом наблюдалась выраженная зависимость времени, за которое в соответствующей опытной группе достигалось полное успокоение, от дозы ДВ: при минимальной суточной (МА 0,02 мг/гол) оно составляло примерно 6-7 дней, при максимальной (МА 0,18 мг/гол) - примерно 4-6 дней.
[73]2. Расчет минимальных суточных доз (по гестагену) показал, что они и у самцов, и у самок примерно в 40 раз ниже, чем в прототипе (0,02 мг/гол против примерно 0,75 мг/гол). Минимальные курсовые дозы при использовании составов по изобретению удается снизить (в сравнении с прототипом) у сук в 40 раз, у кобелей более чем в 100 раз.
[74]3. Как жидкие, так и твердые формы препаратов с одинаковыми концентрациями и соотношением ДВ (№3 и 4; №7 и 8), несмотря на различия в использованных вспомогательных веществах, обладали одинаковой эффективностью.
[75]Пример 5. Определение зависимости эффективности препарата от соотношения МА/ЭЭ
[76]Исследования проводились на 4 группах кошек (самок), которых отбирали, обрабатывали и содержали согласно описанию, приведенному в примере 2. Для проведения испытаний использовали 4 жидких состава на оливковом масле с одной и той же концентрацией МА (0,05%) и различным соотношением ДВ (МА/ЭЭ от 5:1 до 500:1). Результаты наблюдений приведены в таблице 8.
[77]
[78]Полученные данные свидетельствуют о том, что предлагаемая бигормональная композиция МА/ЭЭ обладает 100%-ной эффективностью при всех использованных соотношениях ДВ, за исключением состава с минимальной концентрацией ЭЭ, где одно животное из 6 не проявляло признаков успокоения более чем 7 дней. При этом время достижения состояния полного успокоения варьирует незначительно (при оптимальных соотношениях 20-100:1 успокоение наступает раньше, но не более чем на 1 день). Это позволяет заключить, что в рамках указанного интервала соотношение концентраций ДВ значимого влияния на эффективность действия препарата не оказывает.
[79]Пример 6. Сравнение эффекта различных эстрогенов.
[80]Для изучения влияния вида используемого в бигормональной композиции эстрогена на ее эффективность в состав испытуемых препаратов (конкретно в жидкую форму с составом №3: МА 0,09%; ЭЭ 0,0018%; МА/ЭЭ=50:1) вместо этинилэстрадиола включали (в тех же количествах и соотношениях с МА) валерат эстрадиола или бензоат эстрадиола. Испытания проводили на трех группах кошек, отобранных и обработанных так, как описано в примере 2. При этом были получены следующие результаты.
[81]
[82]Из полученных данных может быть сделан вывод о том, что все три вида эстрогенов эффективны в качестве компонента бигормональной композиции с МА. Вместе с тем, очевидно, что действие валерата и бензоата эстрадиола оказывается менее выраженным, чем у этинилэстрадиола: при той же концентрации, в которой МА /ЭЭ демонстрирует 100%-ную эффективность и время успокоения 4-6 дней, эффективность комбинации МА/эстрадиола бензоат или валерат составляет, соответственно, 66,7 и 83,3%, а минимальное время подавления признаков половой охоты и для бензоата, и для валерата - 6 дней. Таким образом, можно заключить, что предпочтительным видом эстрогена в предлагаемом препарате следует считать этинилэстрадиол.
[83]Пример 6. Определение периода восстановления половой функции
[84]12 кошек из числа получавших препараты по изобретению (6 после применения жидких составов №1-3 и 6 после применения таблетированных форм №5-7) после окончания курса были оставлены для определения срока, необходимого животным для восстановления репродуктивной функции. Оценку нормализации половой активности кошек проводили по признакам возобновления половой охоты (см. пример 2). В результате было установлено, что у 11 из 12 кошек для восстановления репродуктивной функции потребовалось 2,5 месяца или менее: у 1 - один месяц, у 3 - 1,5 месяца, у 5 - 2 месяца, у 2 - 2,5 месяца. Только у одной кошки он составлял 3 месяца. При этом явной корреляции между введенной дозой препарата и сроком восстановления репродуктивной функции отмечено не было.
