патент
№ RU 2284831
МПК A61K39/02

ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ПРОТИВ ВИБРИОЗА РЫБ

Авторы:
Апалькин Виктор Александрович Шумилов Константин Васильевич Литвинов Олег Борисович
Все (8)
Номер заявки
2005111211/13
Дата подачи заявки
18.04.2005
Опубликовано
10.10.2006
Страна
RU
Как управлять
интеллектуальной собственностью
Реферат

[23]

Изобретение относится к области микробиологии. Вакцина содержит смесь суспензий микробных клеток штамма Vibrio anguillarum №2 и штамма Vibrio anguillarum VUR-19, взятых в равном соотношении с концентрацией 80-100 млрд микробных клеток в 1 см3 питательной среды. Вакцина обладает высокой профилактической и лечебной активностью. 1 табл.

Формула изобретения

Инактивированная вакцина против вибриоза рыб, содержащая инактивированную формалином смесь суспензий микробных клеток штаммов Vibrio anguillarum, отличающаяся тем, что содержит смесь суспензий микробных клеток штамма Vibrio anguillarum №2 и штамма Vibrio anguillarum VUR-19, взятых в равном соотношении с концентрацией 80-100 млрд микробных клеток в 1 см3 питательной среды.

Описание

[1]

Изобретение относится к микробиологии, в частности к ихтиопатологии, а именно к средствам профилактики вибриоза рыб, вызываемой бактерией Vibrio anguillarum.

[2]

Вибриоз рыб это опасное бактериальное заболевание. Встречается у 42 видов рыб и гидробионтов в 16 странах мира в солоноватой, морской и пресной воде. Клиническими признаками заболевания являются покраснение кожных покровов, ерошение чешуи, язвы на поверхности тела рыбы, воспаление анального отверстия. При патологоанатомическом вскрытии наблюдаются наличие гнойного эксудата в полости тела рыбы, увеличение и потемнение почек, точечные кровоизлияния в печени. Это заболевание имеет несколько форм течения, от хронического - с покраснением участков наружных покровов и образованием язв на поверхности тела, до острого септического - характеризующегося внезапной гибелью рыб без внешних признаков поражения. В настоящее время отсутствует специфическая профилактика заболевания, а борьба сводится к организационно-хозяйственным и ветеринарно-санитарным мероприятиям.

[3]

Технической задачей заявленного изобретения является получение высокоэффективного профилактического средства против вибриоза рыб.

[4]

Поставленная задача достигается тем, что бивалентная инактивированная вакцина против вибриоза рыб, содержит смесь суспензий микробных клеток культур штамма Vibrio anguillarum №2 и VUR-19, взятых в равном соотношении с концентрацией 80-100 млрд микробных клеток в 1 см3 питательной среды, инактивированных 0,5% раствором формалина.

[5]

Вакцина представляет собой гомогенную суспензию серовато-желтого цвета с рыхлым осадком, легко разбивающимся в гомогенную взвесь.

[6]

Производственные штаммы Vibrio anguillarum №2 и VUR-19 хранятся и поддерживаются в ВГНКИ ветпрепаратов и имеют регистрационные номера 78 и 7-25/1 и выделены в Балтийском и Черноморском регионах России соответственно.

[7]

Антигенная активность. Однократное подкожное введение вакцины 4 кроликам массой 2,5-3 кг в объеме 1 см3 должно вызывать образование у всех привитых животных агглютининов против Vibrio anguillarum №2 и VUR-19 в титре не ниже 1:100 с оценкой реакции 3-4 креста.

[8]

Срок годности вакцины 2 года при условии хранения в темном сухом помещении при температуре от 2 до 10°С.

[9]

Штамм Vibrio anguillarum №2 обладает генетически закрепленными культуральными морфологическими и биохимическими свойствами, характеризующимися следующими признаками. Величина клеток односуточной агаровой культуры (1,6-2,5)×(0,4-1,0) мкм. Слабоизогнутые палочки подвижны с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. По Граму не окрашивается. На мясо-пептонном агаре с 1,5% NaCL (pH 7,2-7,4) через 24 ч при 20°С образуются гладкие колонии, блестящие с ровными краями. На щелочном мясо-пептонном агаре (pH 8,0-8,2) через 24 ч мелкие, крупные, блестящие S колонии. Дифференциально-диагностический агар с пенициллином (pH 8, 0-8,2) через 24-48 ч на сине-зеленом фоне выпуклые, гладкие S колонии желтого цвета. Физико-биохимические признаки. Размножаются при 5-35°С pH 7,2-8,2.0птимальная концентрация NaCL в питательной среде 1,5%. Разжижает желатину, гидролизует крахмал, дает альфа-гемолиз на кровяном агаре. Реакция на оксидазу, каталазу, тест окисления - ферментации по Хью-Лейфсону, на ацетилметилкарбинол положительная. Восстанавливает нитраты до нитритов, сероводорода не образует, мочевину не расщепляет. Обладает специфическим антигеном. Агглютинируется диагностической сывороткой Vibrio anguillarum.

[10]

Штамм Vibrio anguillarum VUR-19 обладает стабильными, генетическими закрепленными культурально-морфологическими и физико-биохимическими свойствами, хорошей иммуногенностью со способностью вызывать образование антител, а также выраженной способностью к размножению и продукции бактериальной массы. Величина клеток односуточной агаровой культуры (1,6-2, 5)×(0,4-1,0) мкм. Это слабоизогнутые, подвижные палочки с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. По Граму не окрашивается. На мясопептонном агаре с добавлением 1,5% NaCL (pH 7,2-7,4) наблюдается хороший рост штамма через 24 ч при 20°С, колонии гладкие, блестящие с ровным краем, размером 2мм. На щелочном, мясопептонном агаре (pH 8,0-8,2) через 24 ч появляются мелкие, блестящие S колонии размером 4мм. На дифференциально-диагностический агар с пенициллином (pH 8,0-8,2) через 24-48 ч на сине-зеленом фоне образуются выпуклые гладкие S колонии желтого цвета размером 2-3 мм. Физико-биохимические признаки. Штамм галофильный, размножается при 5-35°С, оптимум роста при 18-25°С. Оптимальная концентрация NaCL в питательных средах 1, 5%, pH 7,2-8,2. Разжижает желатину, гидролизует крахмал, дает L-гемолиз на кровяном агаре. Восстанавливает нитраты до нитритов, сероводорода не образует, мочевину не расщеляет. Обладает специфическим антигеном и отличается от известных штаммов рода Vibrio по своим антигенным свойствам. Агглютинируется гомологичной диагностической сывороткой в реакции агглютинации (РА) в титре 1:3200. Штамм стабилен. Адаптирован на питательных средах.

[11]

Использование в вакцине только одного штамма не создает напряженного иммунитета против других серогрупп возбудителя. Штаммы Vibrio anguillarum №2 и VUR-19 отличаются друг от друга своей серологической активностью и набором поверхностно-оболочечных антигенов, что позволяет создать у рыб иммунитет против более широкого спектра циркулирующих в природе эпизоотических штаммов Vibrio anguillarum.

[12]

Для сравнения антигенной активности и специфичности штаммов, используемых в вакцине, проводят перекрестные серологические реакции с гомологичными и гетерологичными сыворотками, полученными на кроликах. При постановке реакции агглютинации на кроликах /РА/ кроличьи сыворотки с предельным титром /1:3200/ разводят формалинизированным раствором от 1:25 до 1:3200. Результаты испытания антигенов в РА были следующие: антиген из штамма Vibrio anguillarum №2 агглютинировался гомологичной сывороткой в титре 1:1600, а с гетерологичной, т.е. полученной на штамм VUR-19, в титре 1:200. Антиген из штамма VUR-19 агглютинировался гомологичной сывороткой в титре 1:800, а гетерологичной, т.е. полученной на штамм Vibrio anguillarum №2, агглютинировался в титре 1:100, что указывает на их определенную активность и специфичность по отношению друг к другу. Концентрацию антигена в РА использовали 1 млрд микробных клеток в 1 мл.

[13]

Пример 1. Бивалентную инактивированную вакцину против вибриоза рыб, содержащую смесь суспензий микробных клеток культур штамма Vibrio anguillarum №2 и ВУР-19, взятых в равном соотношении с концентрацией 80-100 млрд. микробных клеток в 1 см3 питательной среды, инактивированных 0,5% раствором формалина, готовят по технологической схеме табл.1. Готовую вакцину применяли в рыбоводном хозяйстве, неблагополучном по вибриозу форели, в целях профилактики. Иммунизации подверглась рыба массой более 1 г. Перед вакцинацией подготовили емкости, температура воды не ниже 8°С. Вакцину суспендируют в чистой воде с таким расчетом, чтобы ее конечная концентрация составляла 200 млн микробных клеток в 1 см3 и объем готовой суспензии не менее 10 л. Готовая суспензия вакцины должна быть использована в течение 3 ч. Рыбу отлавливают сачком из водоема и погружают в бассейн с суспензией вакцины, выдерживают в течение 20 секунд, после чего выпускают в подготовленные емкости. Температура воды должна быть идентична той, в которой рыба находилась до вакцинации. Иммунитет наступает у вакцинированных рыб через 14 дней, длительность иммунитета 12 месяцев.

[14]

Пример 2. Бивалентную инактивированную вакцину против вибриоза рыб, содержащую смесь суспензий микробных клеток культур штамма Vibrio anguillarum №2 и ВУР-19, взятых в равном соотношении с концентрацией 80-100 млрд микробных клеток в 1 см3 питательной среды, инактивированных 0,5% раствором формалина, готовят по технологической схеме табл.1. Готовую вакцину применяли в рыбоводном хозяйстве, неблагополучном по вибриозу форели, с лечебной целью. Иммунизацией подверглась рыба массой более 5 кг. Перед вакцинацией подготовили бассейн, температура воды не ниже 8°С. Вакцину суспендируют в чистой воде с таким расчетом, чтобы ее конечная концентрация составляла 200 млн микробных клеток в 1 см3 и объем готовой суспензии не менее 10 л. Готовая суспензия вакцины должна быть использована в течение 3 ч. Рыбу отлавливают сачком из водоема и погружают в емкость с суспензией вакцины, выдерживают в течении 30 секунд, после чего выпускают в подготовленные емкости. Температура воды должна быть идентична той, в которой рыба находилась до вакцинации. Лечебный эффект наступил через 2 суток, краснота покрова исчезла, гемморрагии в радужной оболчке глаз не увеличивались и не появлялись вновь, уменьшились очаги некроза на боковых поверхностях тела рыб. При этом иммунитет наступил у вакцинированных рыб через 14 дней и длился в течение 12 месяцев.

[15]

Технологическая схема производства бивалентной вакцины

[16]

[17]

[18]

[19]

[20]

[21]

[22]

Как компенсировать расходы
на инновационную разработку
Похожие патенты