[2]Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии и сельскому хозяйству, в частности, к кормовым добавкам для сельскохозяйственных животных и птиц. Кормовая добавка (коммерческое наименование «ЭкоПроБио») направлена на профилактику острых инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных, вызванных бактериями родов Klebsiella, Citrobacter,Aeromonas,Escherichia,Alcaligenes,Bacillus,Micrococcus,Staphylococcus,Bordetella,Pseudomonas, Serratia.
[4]Известны штаммы Bacillus licheniformis № 31 и Bacillus subtilis № 3, предложенные в качестве основы препарата биоспорин, предназначенного для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний. Однако описанные выше микроорганизмы не оказывают ингибирующего действия на бактерии родов Kbebsiella, Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia.
[5]Известен штамм Bacillus subtilis ВКПМ NsB-5225 (патент Штамм бактерий Bacillus subtilis - антагонист возбудителей клебсиеллезов) обладающий антагонистическими свойствами по отношению к бактериям рода Kbebsiella, но основным недостатком данного штамма является узкая специфичность подавляемых тест-культур, а также отсутствие достоверной информации о возможных антагонистических свойствах штамма в отношении бактерий Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia.
[6]Известен штамм бактерий Bacillus amyloliquefaciens OPS-32 для получения биопрепарата комплексного действия для защиты сельскохозяйственных растений от фитопатогенных грибов, стимуляции их роста и повышения урожайности, однако предельная температура роста и сохранения жизнеспособности клеток данного штамма до + 47°C, что делает невозможным его применение в качестве основы для пробиотических кормовых добавок. Другим существенным недостатком данного штамма является отсутствие антагонизма к бактериям родов Citrobacter, Aeromonas, Escherichia, Alcaligenes, Bacillus, Micrococcus, Bordetella, Pseudomonas, Serratia.
[7]Известен штамм бактерий-энтероккоков Enterococcus faecium L-3 ND-79 ВНИИСХМ, предназначенный для изготовления продуктов питания лечебно-профилактического назначения (патент РФ на изобретение №2220199 С1, кл. МПК C12N 1/20, A23C 9/12, A61K 35/74, опубл. 27.12.2003), а также способ стимулирования роста домашней птицы и препарат на основе пробиотика (патент РФ на изобретение №2093571 С1, кл. МПК C12N 1/20, A23K 1/18, C12R 1/465, опубл. 20.10.1997).
[8]Основным недостатком данного штамма относится его невысокая антибиотическая активность, а также наличие жирно-кислотных микросфер жизнеспособных бактерий штаммов Enterococcus faecium 301, АТСС N 55519, сформированных с помощью роторного диска.
[9]Также известен способ получения кормовой добавки к основному рациону кормления цыплят-бройлеров с использованием штаммов лактобактерий селекции НИИ биотехнологии Горского ГАУ. Для получения пробиотической добавки используется сухое обезжиренное коровье молоко ГОСТ 10970-87 и закваска, состоящая из штаммов молочнокислых микроорганизмов селекции НИИ биотехнологии Горского ГАУ Enterococcus hirae ВПКМ В-9069, Enterococcus faecium ВКПМ В-9070 и Enterococcus faecium ВКПМ В-9071.
[10]Недостатком данной кормовой добавки является использование сухого молока, которое необходимо восстанавливать с помощью добавления воды, что приводит к потере времени и определенным энергозатратам, так как молоко необходимо бывает подогреть и простерилизовать.
[11]Известен пробиотик, используемый для выращивания и откорма бройлерной птицы, содержащий несколько штаммов микроорганизмов бактерий Lactobacillus amylovorus БТ-24/88 (ВКПМ, В-6253) и Escherichia coli S 5/98 (ВКПМ, В-8564) (патент РФ на изобретение №2268925 С2, C12N 1/20, A61K 35/74, C12R 1/19, опубл. 27.01.2006 г.).
[12]Недостатком данного пробиотика является недостаточная эффективность в отношении повышения резистентности организма к неблагоприятным условиям внешней среды; низкая термоустойчивость. Кроме того, данный пробиотик используется для профилактики заболеваний ЖКТ только у птиц и не обладает антагонистической активностью к бактериям, вызывающим респираторные инфекционные заболевания.
[13]Известен пробиотик на основе штамма бактерий Bacillus subtilis MG-8 ВКПМ В-12476 (патент РФ на изобретение №2663720 C1, A61K 35/74, C12N 1/20, C12R 1/125, опубл. 08.08.2018 г.].
[14]Недостаток препарата: обладает общим антибактериальным воздействием, не способен к направленному воздействию на определенные виды патогенных микроорганизмов.
[15]Раскрытие изобретения
[16]Техническим результатом изобретения является повышение эффективности подавления патогенной микрофлоры за счет направленного воздействия на определенные виды патогенных микроорганизмов, а именно, бактерий родов Klebsiella, Citrobacter,Aeromonas,Escherichia,Alcaligenes,Bacillus,Micrococcus,Staphylococcus,Bordetella,Pseudomonas, Serratia. Также обеспечивается повышение пищевой ценности добавки, расширение области и вариантов ее использования, в том числе, в качестве основы для кормовых добавок, подвергающихся обработке паром перед включением в рацион животных.
[17]Указанный технический результат достигается тем, что кормовая добавка пробиотическая содержит комплекс живых штаммов пробиотических бактерий Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D, Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D , полученных при раздельном культивировании штаммов на жидких питательных средах и дальнейшем смешивании их в соотношении: Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D - 40%, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D - 40%, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D - 20%, а также компоненты питательной среды и воду, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
[18]- компоненты питательной среды - 0,03-0,04;
[20]- комплекс штаммов бактерий - остальное,
[22]при этом жидкая питательная среда имеет следующий состав: панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л, пептон ферментативный - 12 г/л, натрия хлорид - 6 г/л.
[23]Кормовая добавка пробиотическая в виде сухого порошка содержит комплекс лиофильно высушенных штаммов пробиотических бактерий в соотношении: Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D - 40%, Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D - 40%, Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D - 20%, а также компоненты питательной среды и лактозу, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
[24]- комплекс штаммов бактерий - 1,96-2,97;
[25]- компоненты питательной среды - 0,01-0,02;
[26]- лактоза - остальное,
[28]Осуществление изобретения
[29]Морфологические и культуральные свойства бактерий
[30]Идентификация штаммов на уровне видов была проведена на основе секвенирования гена 16S рРНК.
[31]Для идентификации штаммы Bacillus subtilis В2ВКМВ-3568Dи Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D выращивали аэробно при 30-37°C в течение 24-48 ч на твердой питательной среде следующего состава, г/л:
[32]ГРМ-бульон (панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л,
[33]пептон ферментативный - 12 г/л,
[34]натрия хлорид - 6 г/л, рН - 6,5-7,5.
[35]Стерилизация при 1 атм. (121°С) - 20 мин.
[36]Клетки штамма: Bacillus subtilis В2ВКМ В-3568D представляют собой грамположительные, аэробные, подвижные палочки (2-4 × 0,4-0,6 мкм), имеют жгутик. Споры овальные, не превышающие размер клетки, расположены центрально. Через 24 ч роста образуют сухие, мелкоморщинистые, бархатистые розовато-кремовые колонии с волнистым краем на агаре LB. Оптимальный рост происходит при 30-40°C и pH 6,5-7,5. Способны к росту при температуре до + 55°C.
[37]Клетки штамма Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D представляют собой грамположительные, аэробные, подвижные палочки (1,5-2 мкм), имеют жгутик. Характеризуются образованием эндоспор, не превышающих размер клетки. Через 24 ч роста образуют небольшие, сухие, белые колонии с неровным краем на агаре LB. Оптимальный рост происходит при 30-40°C и pH 6,5-7,5. Способны к росту при температуре + 55°C.
[38]Способ хранения штаммов: в стеклянных пробирках на скошенной агаризованной питательной среде МПА/ГРМ-агар при температуре +4-6°C или в лиофилизированном состоянии в ампулах. Частота пересева 2 раза в год.
[39]Штаммы обладают высокой антагонистической активностью (Таблица №1).
[40]Антагонистические свойства штаммов определяли следующим образом:
[41]Пример1. Культуры штаммов Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D культивировали в пробирках со стерильной питательной средой ГРМ-бульон (панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л, пептон ферментативный - 12 г/л, натрия хлорид - 6 г/л) в течении 24 часов. Суспензии тест-культур патогенных бактерий наносили на чашки в объеме 0,1 мл и тщательно растирали шпателем. Далее на засеянные тест-культурами чашки раскладывали стерильные диски из фильтровальной бумаги. На каждый диск наносили 10 мкл суспензии клеток штаммов Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D. Чашки инкубировали в термостате при температуре +30°C. Результаты фиксировали на 2-4 сутки путем измерения зоны ингибирования тест-культур.
[42]Таблица №1 Антагонистические свойства штаммов Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D в отношении бактерий родов Klebsiella, Citrobacter,Aeromonas,Escherichia,Alcaligenes,Bacillus,Micrococcus,Staphylococcus,Bordetella,Pseudomonas, Serratia
[43]| № | Штамм | Зона ингибирования патогена, мм | Заболевания |
| В-3567D | В-3568D |
| 1 | Aeromonas veronii | 18 | 19 | Диарея, сепсис крови |
| 2 | Alcaligenes faecalis | 10 | 16 | Сепсис крови |
| 3 | Escherichia coli | 15 | 16,5 | Дисбактериоз, пищевые отравления |
| 4 | Pseudomonas aeruginosa | 10 | 13 | Воспалительные процессы |
| 5 | Bacillus cereus GAST | 10 | 10 | Токсикоинфекции |
| 6 | Bacillus weihenstephanensis | 13 | 18 | Пищевые отравления |
| 7 | Micrococcus luteus | 18 | 21 | Абсцесс |
| 8 | Micrococcus roseus | 10 | 10 | Оппортунистические инфекции |
| 9 | Staphylococcus aureus | 8 | 15 | Инфекции кожи, пневмония |
| 10 | Bordetella sp. | 20 | 12 | Коклюш |
| 11 | Serratia marcescens | 10 | 10 | Сепсис, инфекции мочевыводящих путей, кожные инфекции, заболевания кровотока и дыхательных путей, а также глазные инфекции |
| 12 | Klebsiella pneumoniae | 11 | 12 | Конъюнктивиты, острые кишечные инфекции |
| 13 | Citrobakter sp. | 12 | 15 | Цитробактериоз |
[44]Антибиотикочувствительность штаммов
[45]Пример 2. Для определения антибиотикочувствительности штаммов, культуры клеток Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D культивировали в пробирках со стерильной питательной средой ГРМ-бульон (панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л, пептон ферментативный - 12 г/л, натрия хлорид - 6 г/л) в течении 24 часов при температуре +30°C. Полученную суспензию клеток (0,1 мл) наносили на чашки Петри с плотной питательной средой ГРМ-агар (панкреатический гидролизат рыбной муки - 12 г/л, пептон ферментативный - 12 г/л, натрия хлорид - 6 г/л, агар микробиологический - 10 г/л) и тщательно растирали стерильным шпателем. На засеянные таким образом чашки раскладывали стерильные диски с антибиотиками. Чашки инкубировали в термостате при температуре +30°C. Результаты фиксировали на 2-4 сутки путем измерения зоны ингибирования изучаемых культур вокруг дисков. При учете результатов штамм считали антибиотика чувствительным при зоне ингибирования роста не менее 5 мм.
[46]Полученные в ходе исследования результаты представлены в Таблице №2.
[47]Таблица №2. Антибиотикочувствительностьштаммов Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D
[48]| Антибиотик | Концентрация антибиотика, мкг | Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ
В-3567D, мм | Bacillus subtilis В2 ВКМ
В-3568D, мм |
| Азлоцилин | 75 | 5 | 10 |
| Амоскициллин/клавулановая кислота | 20/10 | 21 | 18 |
| Амоскициллин | 20 | 11 | 11 |
| Амфотерицин В | 40 | - | - |
| Ампициллин | 10 | 10 | 12 |
| Амикацин | 30 | 12 | 15 |
| Азтреонам | 30 | - | - |
| Бацитрацин | 10 ед | - | - |
| Бацитрацин | 0,04 ед | - | - |
| Ванкомицин | 30 | 10 | 10 |
| Гентамицин | 120 | 22 | 20 |
| Доксициклин | 30 | 10 | 9 |
| Желчь | 3 | - | - |
| Итраконазол | 10 | 10 | - |
| Имипенем | 10 | 15 | 17 |
| Канамицин | 30 | - | 5 |
| Карбенициллин | 25 | 10 | 10 |
| Карбеницилин | 100 | 14 | 11 |
| Кетоконазол | 20 | - | 12 |
| Клиндамицин | 2 | - | 11 |
| Клотримазол | 10 | - | 5 |
| Кларитромицин | 15 | 13 | 11 |
| Левомицитин | 30 | 10 | 15 |
| Линезолид | 30 | 15 | 16 |
| Линкомицин | 15 | - | 8 |
| Ломефлоксацин | 10 | - | 11 |
| Моксифлокацин | 5 | 17 | 12 |
| Меропенем | 10 | 21 | 18 |
| Новобиоцин | 5 | 5 | - |
| Неомицин | 30 | 15 | 12 |
| Нистатин | 80 ед | - | 12 |
| Норфлоксацин | 10 | 10 | 7 |
| Оксациллин | 1 | - | 7 |
| Олеандомицин | 15 | 13 | 15 |
| Оптохин | 6 | - | - |
| Офлоксацин | 5 | 13 | 14 |
| Пиперациллин | 100 | - | 12 |
| Рифампицин | 5 | - | 6 |
| Полимиксин | 300 ед | 8 | 5 |
| Рокситромицин | 30 | 15 | 20 |
| Сизомицин | 10 | 12 | 11 |
| Спарфлоксацин | 5 | 20 | 20 |
| Сапонин | 750 | - | - |
| Стрептомицин | 300 | 15 | 15 |
| Сульфаниламид | 300 | - | 11 |
| Тетрациклин | 30 | 5 | - |
| Тилозин | 30 | 13 | 10 |
| Тобрамицин | 10 | 11 | 17 |
| Триметоприм/сульфаметоксазол | 1,25/23,75 | 12 | 16 |
| Фурагин | 300 | 10 | 12 |
| Фурадонин | 300 | 7 | 8 |
| Флуконазол | 40 | 6 | 10 |
| Пефлоксацин | 5 | 10 | 10 |
| Фосфомицин | 200 | 6 | 12 |
| Фуразолидон | 300 | - | 10 |
| Фузидиевая кислота | 10 | 9 | 6 |
| Цефтазидим | 30 | 10 | 9 |
| Цефаклор | 30 | - | 6 |
| Цефазолин | 30 | 25 | 25 |
| Ципрофлоксацин | 5 | 15 | 15 |
| Цефуроксим | 30 | - | 5 |
| Цефокситин | 30 мкн | 12 | 10 |
| Цефепим | 30 | - | 7 |
| Цефоперазон/сульбактам | 50/50 | 11 | 15 |
| Цефотаксим | 30 | - | 10 |
| Цефалексин | 30 | 15 | 13 |
| Цефалотин | 30 | 22 | - |
| Энтрофлоксацин | 5 | 17 | 20 |
| Эритромицин | 15 | 12 | 13 |
| Эртапенем | 10 | 14 | 19 |
[49]На основании полученных в ходе исследования результатов можно заключить, что штаммы Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D обладают высокой антагонистической активностью в отношении бактерий родов Klebsiella, Citrobacter,Aeromonas,Escherichia,Alcaligenes,Bacillus,Micrococcus,Staphylococcus,Bordetella,Pseudomonas, Serratia и могут быть применены в качестве основы биопрепаратов для профилактики инфекционных заболеваний, вызванных бактериями вышеуказанных родов. На основании исследования на антибиотикочувствительность было также определено, что штаммы Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D являются чувствительными к 47 и 59 антибиотикам из 70 протестированных соответственно.
[50]Штаммы бактерий Bacillus amyloliquefaciens В1 ВКМ В-3567D и Bacillus subtilis В2 ВКМ В-3568D способны к росту при температуре +55°C, что обеспечивает возможность их применений в качестве основы для кормовых добавок, подвергающихся обработке паром перед включением в рацион животных.
[51]Кормовая добавка пробиотическая «ЭкоПроБио» предназначена для профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта и подавления действия патогенной и условно патогенной микрофлоры, а также для нормализации обмена веществ у сельскохозяйственных животных, в том числе птиц, на основе консорциума пробиотических штаммов Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens, Lactobacillus acidophilus с общим титром не менее 5 млрд. КОЕ/ мл для жидкой суспензии и не 2 млрд.КОЕ/ г для сухого порошка.
[52]Состав: В 1000 мл жидкой суспензии содержатся действующие вещества: комплекс живых штаммов пробиотических бактерий Bacillus subtilis не менее 2,5×109КОЕ/мл, Bacillus amyloliquefaciens не менее 2,49×109КОЕ/мл, Lactobacillus acidophilus не менее 1×107 КОЕ/мл, вспомогательные вещества: компоненты питательной среды, вода питьевая до 1000 мл.
[53]Сухой порошок - Лиофильно высушенные бактерии Bacillus subtilis не менее 10×108КОЕ/г, Bacillus amyloliquefaciens не менее 9,9×108КОЕ/г, Lactobacillus acidophilus не менее 1×107КОЕ/г, вспомогательное вещество (наполнитель): лактоза до 100 %.
[54]Бактерии, входящие в состав кормовой добавки «ЭкоПроБио»:
[55]- способствуют нормализации пищеварения путем конкуренции за питательные вещества с патогенами;
[56]- изменяют pH для создания неблагоприятной местной окружающей среды для патогенов;
[57]- конкурируют с патогенами за адгезию.
[58]Бациллы в процессе деления синтезируют амилазу, протеазу, липазу, гемицеллюлазу, регуляторные пептиды, за счет чего желудочный секрет дополнительно обогащается ферментами.
[59]Подавление патогенной микрофлоры также происходит за счет того, что штаммLactobacillus acidophilus вырабатывает молочную кислоту (максимум кислотообразования 320°Т за 24 ч культивирования), а кислая среда препятствует росту большинства патогенных бактерий и грибов. Уникальность данной кормовой добавки заключается в том, что введение ее в рацион животных (КРС, МРС и птиц) заменяет прием как минимум двух разносоставных кормовых добавок.
[60]Кроме того, высокая резистентность лактобацил к разрушающему действию желудочного сока, желчных кислот и панкреатических ферментов позволяет сохранять жизнеспособность в кислой среде желудка более 3 часов.
[61]Также в состав кормовой добавки в качестве наполнителя включена лактоза. Лактоза является природным пребиотиком, участвующим в обмене кальция, способствующего сохранению микрофлоры кишечника за счет избирательного стимулирования роста числа лактобактерий, предотвращающих развитие гнилостных процессов.
[62]Для идентификации штамм Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832D культивировали микроаэрофильно при температуре 37°C в течение 48 часов в жидкой питательной среде следующего состава:
[63]| Пептон, г | 5,0 |
| Лактоза, г | 10,0 |
| Глюкоза, г | 10,0 |
| Экстракт дрожжевой, г | 10,0 |
| Кальций углекислый, г | 5,0 |
| Агар | от 12 до 18,0 |
| Вода, см | 1000 |
[64]Клетки штамма Lactobacillus acidophilus LB-1 ВКМ B-3832Dпредставляют собой грамположительные, неподвижные палочки (1,5-2 мкм). Спор не образуют. Характеризуются микроаэрофильными условиями роста. Образуют чечевидные колонии бежевого цвета в толще плотной питательной среды Бликфельдта. Растет при рН 2-5. При температуре +37°C.
[65]Для определения активности кормовой добавки в отношении патогенных бактерий, тест-культуры бактерий переносили с помощью пипетки на агаризованную питательную среду (ГРМ-агар) в объеме 0,1 мл, тщательно растирали шпателем, далее не позже 15 мин на поверхность засеянных чашек раскладывали стерильные диски фильтровальной бумаги, на которые раскапывали суспензию кормовой добавки «ЭкоПроБио». Чашки инкубировали в течении 24-48 ч при температуре +37°C. Результаты фиксировали по наличию зоны ингибирования тест культур.
[66]Полученные результаты представлены в Таблице №3.
[67]Таблица № 3. Характеристика антагонистической активности кормовой добавки «ЭкоПроБио» в отношении штаммов патогенов
[68]| № | Штамм | Зона ингибирования патогена, мм | Заболевания |
| Жидкая суспензия | Сухая форма |
| 1 | Aeromonas veronii | 12 | 13 | Диарея, сепсис крови |
| 2 | Escherichia coli | 11 | 10 | Дисбактериоз, пищевые отравления |
| 3 | Pseudomonas aeruginosa | 15 | 17 | Воспалительные процессы |
| 4 | Bacillus cereus GAST | 16 | 12 | токсикоинфекции |
| 5 | Bacillus weihenstephanensis | 15 | 19 | Пищевые отравления |
| 6 | Staphylococcus aureus | 14 | 17 | Инфекции кожи, пневмония |
| 7 | Bordetella sp. | 11 | 10 | Коклюш |
| 8 | Serratia marcescens | 22 | 14 | Сепсис, инфекции мочевыводящих путей, кожные инфекции, заболевания кровотока и дыхательных путей, а также глазные инфекции |
| 9 | Klebsiella pneumoniae | 16 | 14 | Конъюнктивиты, острые кишечные инфекции |
| 10 | Proteus spp. | 7 | 12 | гастроэнтерит |
| 11 | Citrobakter sp. | 11 | 13 | Цитробактериоз |
| 12 | Salmonella spp. | 10 | 6 | Сальмонеллез |
[69]Кормовая добавка «ЭкоПроБио» была протестирована на сельскохозяйственных животных, в частности козах. Кормовую добавку включили в рацион по следующей схеме:
[70]Для МРС (мл / на голову 1 раз в день)
[71]- козлятам и ягнятам от 10 до 30 дней - 5,0;
[72]- козлятам и ягнятам старше 30 дней до 6 месяцев - 10,0;
[73]Взрослым животным - 12-15 мл на голову один раз в сутки.
[75]Для МРС (г / на голову 1 раз в день)
[76]- козлятам и ягнятам от 10 до 30 дней - 5,0;
[77]- козлятам и ягнятам старше 30 дней до 6 месяцев - 10,0;
[78]Кормовую добавку применяли в течение 10 дней.
[79]Благодаря введению в рацион кормовой добавки «ЭкоПроБио» повысилась резистентность испытуемых животных к инфекционных заболеваниям желудочно-кишечного тракта и респираторным инфекциям верхних дыхательных путей, что привело к полному исключению использования антибиотиков в тестовой группе животных.
[80]Таким образом, заявленная кормовая добавка имеет высокую эффективность подавления патогенной микрофлоры за счет направленного воздействия на определенные виды патогенных микроорганизмов, добавка является комплексной, имеет повышенную пищевую ценность и расширенную область использования.
[81]Сопоставительный анализ заявленного препарата показывает, что совокупность его существенных признаков неизвестна из уровня техники, а значит соответствует условию патентоспособности «Новизна».
[82]В уровне техники не было выявлено кормовых добавок, совпадающих с отличительными признаками заявленного добавки и влияющих на достижение заявленного технического результата, поэтому заявленное изобретение соответствует условию патентоспособности «Изобретательский уровень».
[83]Приведенные сведения подтверждают возможность применения заявленной кормовой добавки в микробиологии, биотехнологии и в сельском хозяйстве для подкормки сельскохозяйственных животных и птиц, и поэтому заявленное техническое решение соответствует условию патентоспособности «Промышленная применимость».
КОЕ/мл, где 
КОЕ/мл, 
КОЕ/мл, 
