БЕЛКОВЫЕ КОМПОЗИЦИИ ПРОТИВ VEGF И СПОСОБЫ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ

Авторы:

ДЖОНСОН, Эми (US) КЕЙЗИ, Меган (US) ВАНГ, Шунхай (US)

Все (6)

Правообладатель:

РИДЖЕНЕРОН ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)

Номер заявки

2022102357

Дата подачи заявки

18.08.2020

Опубликовано

17.08.2022

Страна

Дата приоритета

15.12.2025

Номер приоритета

Страна приоритета

Как управлять
интеллектуальной собственностью

Подробнее

Чертежи

Реферат

[4379]

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу получения афлиберцепта из клетки-хозяина, культивированной в химически определенной среде (ХОС). Предложенный способ, включающий культивирование клетки-хозяина в ХОС в подходящих условиях, причем кумулятивная концентрация никеля в ХОС составляет не более 0,4 мкмоль, кумулятивная концентрация железа составляет не более 55,0 мкмоль, кумулятивная концентрация меди составляет не более 0,8 мкмоль, кумулятивная концентрация цинка составляет не более 56,0 мкмоль, кумулятивная концентрация цистеина составляет не более 10,0 мкмоль, а кумулятивная концентрация антиоксиданта составляет от 0,001 ммоль до 10,0 ммоль, позволяет получать афлиберцепт с повышенной производительностью. 3 н. и 13 з.п. ф-лы, 59 ил., 9 табл., 9 пр.

Формула изобретения

1. Способ получения афлиберцепта, собранного из клетки-хозяина, культивированной в химически определенной среде (ХОС), включающий

(a) обеспечение клетки-хозяина, генетически сконструированной для экспрессии афлиберцепта;

(b) культивирование указанной клетки-хозяина в указанной ХОС в подходящих условиях, в которых указанная клетка-хозяин экспрессирует указанный афлиберцепт, причем кумулятивная концентрация никеля в указанной ХОС составляет не более 0,4 мкмоль или около 0,4 мкмоль и одно или более из следующих:

i. кумулятивная концентрация железа в указанной ХОС составляет не более около 55,0 мкмоль;

ii. кумулятивная концентрация меди в указанной ХОС составляет не более 0,8 мкмоль;

iii. кумулятивная концентрация цинка в указанной ХОС составляет не более 56,0 мкмоль;

iv. кумулятивная концентрация цистеина в указанной ХОС составляет не более около 10,0 мкмоль; и

v. указанная ХОС содержит антиоксиданты, причем кумулятивная концентрация антиоксиданта составляет от около 0,001 ммоль до около 10,0 ммоль для любого одного антиоксиданта; и

2. Способ по п. 1, в котором указанный сбор имеет цвет, не более желто-коричневый, чем европейский эталон цвета BY2, причем концентрация афлиберцепта составляет 5,0 г/л.

3. Способ по п. 2, в котором указанные антиоксиданты представляют собой таурин, гипотаурин, глицин, тиоктовую кислоту, глутатион, холин, гидрокортизон, витамин C, витамин E или их комбинации.

4. Способ по п. 2, в котором указанная кумулятивная концентрация антиоксиданта в указанной ХОС составляет от около 0,001 ммоль до около 10,0 ммоль для одного антиоксиданта, и кумулятивная концентрация всех антиоксидантов составляет около 30,0 ммоль или менее 30,0 ммоль.

5. Способ по п. 1, в котором титр афлиберцепта, концентрация жизнеспособных клеток, жизнеспособность, аммиак или осмоляльность по существу не изменены.

6. Способ по п. 1, в котором указанная клетка-хозяин выбрана из группы, состоящей из CHO, NS0, Sp2/0, эмбриональной клетки почки и BHK.

7. Способ по п. 1, в котором указанный сбор содержит один или более вариантов афлиберцепта, причем указанные варианты имеют по меньшей мере один окисленный аминокислотный остаток.

8. Способ по п. 7, в котором указанный окисленный аминокислотный остаток выбран из группы, состоящей из метионина, триптофана, гистидина, фенилаланина, тирозина и их комбинации.

9. Способ по п. 8, в котором указанный окисленный аминокислотный остаток представляет собой гистидин.

10. Способ по п. 8, в котором указанный окисленный аминокислотный остаток представляет собой триптофан.

11. Способ по п. 7, в котором указанный вариант афлиберцепта содержит полипептид с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID NO.: 17, SEQ ID NO.: 18, SEQ ID NO.: 19, SEQ ID NO.: 20, SEQ ID NO.: 21, SEQ ID NO.: 22, SEQ ID NO.: 23, SEQ ID NO.: 62, SEQ ID NO.: 63, SEQ ID NO.: 64, SEQ ID NO.: 65, SEQ ID NO.: 66, SEQ ID NO.: 67, SEQ ID NO.: 68, SEQ ID NO.: 69, SEQ ID NO.: 70, SEQ ID NO.: 71 и их комбинации.

12. Способ по п. 1, в котором указанные антиоксиданты представляют собой таурин, гипотаурин, глицин, тиоктовую кислоту, глутатион, холин, гидрокортизон, витамин C, витамин E или их комбинации.

13. Способ по п. 1, в котором сбор имеет цвет, который:

a. не более желто-коричневый, чем европейский эталон цвета BY2;

b. не более желто-коричневый, чем европейский эталон цвета BY3;

c. не более желто-коричневый, чем европейский эталон цвета BY4;

d. не более желто-коричневый, чем европейский эталон цвета BY5;

e. между значениями европейского эталона цвета BY2 и BY3; или

f. между значениями европейского эталона цвета BY2 и BY4, и

причем концентрация афлиберцепта в сборе составляет 5,0 г/л.

14. Способ по п. 13, в котором цвет сбора характеризован в цветовом пространстве CIE L*, a*, b*, где L* составляет от около 70 до около 99, a* составляет около 0 и b* составляет около 20 или менее 20, если концентрация афлиберцепта составляет 5,0 г/л.

15. Способ получения афлиберцепта, собранного из клетки-хозяина, культивированной в химически определенной среде (ХОС), включающий