[1]Изобретение относится к области медицины, в частности к вагинальным суппозиториям антимикробного действия, которые могут быть использованы для лечения заболеваний женской половой сферы.
[2]Профилактика и лечение гинекологических заболеваний является актуальной проблемой. Эти заболевания - бактериальный вагиноз, кандидозный выльвит и трихомонадный кольпит - требуют применения препаратов направленного действия. Часто инфекция является смешанной, что требует комбинированных препаратов или антисептиков широкого спектра действия.
[3]Известны суппозитории противоспалительного, антисептического и регенерационного действия, включающие в своем составе следующие компоненты, мас. %:
[4]| 1,3-Диэтилбензимидазолия трийодид | 1,5-3,0 |
| Поливинилпирролидон | 6-12 |
| Гидрофобная, липофильная основа | Остальное |
[5](Патент РФ №2246945, кл. A61K 9/02, 2005).
[6]К недостаткам известного средства относится раздражающее действие при его использовании и низкая терапевтическая активность.
[7]Наиболее близким по совокупности существенных признаков композицией того же назначения являются суппозитории по патенту Великобритании №2163649, 1984.
[8]Известный состав противогрибковых суппозиториев для лечения вагинальных инфекций содержит противогрибковое вещество, в частности, нистатин, гидроколлоид - натрия карбоксиметилцеллюлозу или гидроксипропилметилцеллюлозу и гидрофобную основу с низкой температурой плавления - смесь Витепсола W-35 - (31,2%) и Витепсола Н-15 (68,8%). При этом указанные компоненты взяты в следующем соотношении, мг/1 суппозиторий:
[9]| Нистатин (микропульверизированный) (5000 ЕД/мг) | 5-50 |
| Гидроколлоид (натрия карбоксиметилцеллюлоза или | |
| гидроксипропилметилцеллюлоза) | 10-50 |
[10]Основа с низкой температурой плавления
[11]| (Витепсол W-35 - (31,2%), Витепсол Н-15 (68,8%)) | 985-900 |
[12]Известные суппозитории после введения во влагалище легко расплавляются. При плавлении, происходящем за счет воздействия температуры тела, происходит высвобождение гидроколлоида (гидроксипропилметилцеллюлозы) и фунгицидного агента и благодаря улучшенной адгезии к слизистой влагалища происходит равномерное распределение противогрибкового вещества в месте инфекции. Однако введение, в частности, натрия карбоксиметилцеллюлозы в гидрофобную основу не обеспечивает равномерного распределения лекарственного вещества по всему объему суппозиторной массы, что ухудшает качество целевого продукта. Кроме того, нистатин легко разрушается в кислой и щелочной среде, термически нестоек и окисляется кислородом воздуха. Это приводит к ухудшению качества суппозиториев и сокращению срока их годности. Следует учитывать тот факт, что нистатин, являясь антибиотиком, способствует появлению аллергических реакций и привыканию организма к лечению антибиотиками.
[13]Задачей изобретения, которая определяет его назначение, является расширение спектра терапевтической активности и повышение потребительских зарактеристик.
[14]Для решения технической задачи в антимикробных суппозиториях, включающих антимикробный агент, гидроколлоидный агент и Витепсол, в качестве антимикробного агента используют хлорид поли-(4,9-диоксадодекангуанидина), в качестве гидроколлоидного агента используют гидроколлоид меди и дополнительно вводят масло какао, глицерин и полиэтиленгликоль при следующем соотношении компонентов в г на один суппозиторий массой 2,0 г:
[15]| Хлорид поли-(4,9-диоксадодекангуанидина) | 0,01-0,04 |
| Масло какао | 0,03-0,07 |
| Глицерин | 0,02-0,06 |
| Полиэтиленгликоль | 0,01-0,04 |
| Гидроколлоид меди | 0,004-0,1 |
| Витепсол | Остальное |
[16]Сущность изобретения можно пояснить следующим образом.
[17]Хлорид поли-(4,9-диоксадодекангуанидина) (хлорид ПДДГ) - вводят в состав в качестве антимикробного агента. Хлорид ПДДГ обладает широким спектром антимикробной активности и является биоцидом нового поколения. По своим характеристикам хлорид ПДДГ является малотоксичным соединением (IV кл. опасности) и не вызывает аллергии. Хлорид ПДДГ выпускается в виде субстанции под торговой маркой «ЭКОСЕПТ» Международным Институтом эколого-технологических проблем (ООО «МИЭТП», Россия).
[18]Действие хлорида ПДДГ на микроорганизмы можно представить следующим образом.
[19]- Гуанидиновые поликатионы адсорбируются на отрицательно заряженной поверхности бактериальной клетки и блокируют ее питание.
[20]- Макромолекулы хлорида ПДДГ диффундируют через стенку клетки и вызывают ее необратимые структурные повреждения.
[21]- Хлорид ПДДГ связывается с кислотными фосфолипидами, белками цитоплазматической мембраны, в результате чего происходит блокада гликолитических ферментов дыхательной системы, потеря патогенных свойств и гибель микробной клетки.
[22]Масло какао используют в суппозиториях для более эффективного транспортирования и резорбции активных лечебных компонентов суппозитория в слизистых оболочках.
[23]Масло какао - растительный жир плотной консистенции, получаемый из семян шоколадного дерева.
[24]Масло какао при комнатной температуре имеет светло-желтый цвет, слабый ароматный запах. В изобретении использовали масло какао производства Компании ICAM S.p.A (Италия).
[25]Масло какао содержит микроэлементы и витамины, противовоспалительные компоненты и действует как антиоксидант. Заживляющие и тонизирующие свойства масла какао обеспечиваются наличием в составе кофеина, танина и метилксантина.
[26]Глицерин вводят в состав суппозиториев в качестве диспергатора, обеспечивающего однородное распространение антимикробных агентов.
[27]Его применение позволяет получить оптимальный терапевтический эффект.
[28]Глицерин представляет собой прозрачную вязкую жидкость с содержанием основного вещества не менее 99 мас. % (ГОСТ6259-75).
[29]Полиэтиленгликоль представляет собой полимерные соединения этиленгликоля с различной степенью полимеризации.
[31]
[32]Полиэтиленгликоль в суппозиториях действует как диспергатор и пластификатор, способствует однородному распределению лекарственных веществ, способствует повышению стабильности состава суппозиториев, обеспечивает медленное высвобождение лекарственных веществ при применении.
[33]Используют полиэтиленгликоль марок ПЭГ-600, ПЭГ -1500, ПЭГ-6000 производства компании BASF товарной марки Macrogol (Германия).
[34]В качестве гидроколлоидного агента в состав суппозитория вводят гидроколлоид меди.
[35]Процесс синтеза гидроколлоида меди осуществили в ООО «ЮрДэкс-Эко».
[36]Сам процесс заключается в получении зародышевых клеток гидроколлоида и синтеза собственно гидроколлоида меди с заданным размером частиц.
[37]В качестве восстановителя может выступать борогидрид натрия, общая схема восстановления представлена ниже:
[38]
[39]В колбу объемом 250 мл вносят 67 мл дистиллированной воды и растворяют 0,4 г стабилизатора. В качестве стабилизатора может выступать поливиниловый спирт, поливинилпирролидон или полимерные производные гуанидина. В данном синтезе в качестве стабилизатора использовали хлорид поли-(4,9-диоксадодекангуанидина). Смесь перемешивают при нагревании до 40-45°C, после чего к полученному раствору добавляют раствор 0,3 г пятиводного сульфата меди в 23 мл дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения и приобретения раствором опалесцирующей голубоватой окраски.
[40]После полного растворения компонентов в колбу вносят раствор 0,04 г восстановителя в 10 мл дистиллированной воды. В качестве восстановителя можно использовать глюкозу или боргидрид натрия. В данном синтезе в качестве восстановителя использовали боргидрид натрия. Далее нагревают систему до 50-54°C и при перемешивании начинают добавлять сухой NaOH порциями по ~ 0,015 г, при этом pH системы должен сохраняться на уровне 10,8-11,2. Добавление порций едкого натра прекращают после приобретения раствора желто-оранжевой окраски, постепенно переходящей в насыщенную красновато-оранжевую, после чего систему перемешивают 30-90 мин при медленном охлаждении.
[41]Гидроколлоид меди представляет собой коллоидный раствор от желтого до светло-коричневого цвета с концентрацией меди 0,007-0,016 мас. %, при этом средний размер частиц гидроколлоида меди, полученного данным методом, составляет 18-20 нм с максимумом поглощения 419 нм.
[42]Известно, что медь и ее соединения используют в медицине в качестве антисептического компонента, оказывающего противовоспалительное бактерицидное, антимикробное и вяжущее действие.
[43]В различных источниках показано, что частицы гидроколлоида меди, с одной стороны, обладают очень низкой токсичностью, с другой стороны, проявляют высокий антимикробный эффект по отношению к клеткам тест-культур грамположительных и грамотрицательных бактерий, что создает предпосылки для использования их в составе ранозаживляющих препаратов.
[44]Кроме того, медь и ее соединения принимают участие в репаративных процессах и процессах клеточного деления (Бабушкина И.В., Гладкова Е.В., Мамонова И.А., Норкин И.А., Пучиньян Д.М. Биологическая активность наночастиц меди в эксперименте // Российский научный мир №6, с. 1204-1207, 2014; Maqusood Ahamed, Hisham A. Alhadlaq, М.A. Majeed Khan, Ponmu-rugan Karuppiah and Naif A. Al-Dhabi. Synthesis, Characterization, and Antimicrobial Activity of Copper Oxide Nanoparticles // Volume 2014 (2014). Article ID 637858. 4 p).
[45]Совместный ввод гидроколлоида меди и хлорида поли-(4,9 диоксадодекангуанидина) в состав предложенных суппозиториев обеспечивает нарастающее антимикробное действие при одновременном отсутствии токсичности препарата в целом.
[46]Витепсол марки Н-15 и W-35 в качестве основы суппозитория способствует равномерному распределению активных компонентов и хорошей их биодоступности из основы.
[47]Основа, состоящая из Витепсола марки Н-15 и W-35, увеличивает сроки хранения суппозиториев, обеспечивает хорошую консистенцию и твердость, что улучшает их товарный вид и создает удобство при применении.
[48]Эта основа также способствует резкому переходу от твердого состояния к жидкому, минуя стадию размягчения. Используют Витепсол марки Н-15 и Витепсол марки W-35 компании Cremer Oleo GmbH & Со KG (Германия) или по ВТУ №3-95.
[49]Количество компонентов состава суппозитория является величиной оптимальной и выбрано на основании многочисленных экспериментов.
[50]Разработанное оптимальное сочетание компонентов приводит к однородной композиции, способной распределить лекарственное средство по всей полости после введения суппозитория.
[51]Содержание антибактериальных компонентов строго регламентировано.
[52]Доказательство оптимальности выбранных пределов содержания компонентов суппозитория приведены в таблице 1, в которой также приведены свойства суппозиториев, выполненных из компонентов, количество которых выходило за заявленные пределы содержания.
[53]Также подтверждение оптимального количества компонентов предлагаемого суппозитория в выбранных интервалах соотношения компонентов по сравнению с суппозиториями, выполненными из компонентов, содержание которых выходило за выбранные пределы, было подтверждено исследованиями по биодоступности активных компонентов суппозитория.
[54]Определение сравнительной биодоступности проводили по методике (Муравьев И.А. Технология лекарств. - М., 1980, т. 1). Установка для диффузного высвобождения представляет собой стеклянную трубку длиной 15 см, площадью сечения 10 см2, один конец которой с закрепленной мембраной опускают на глубину 2-3 см в раствор Рингера. После достижения температуры 37°C на мембрану помещали суппозиторий и с помощью пипетки через равные интервалы времени отбирали пробы. Анализ проб, взятых через каждые 15 мин, показал, что высвобождение действующих антимикробных компонентов из суппозиториев, полученных в предложенных интервалах содержания компонентов основы суппозитория, происходит быстрее и, следовательно, состав предлагаемых суппозиториев является оптимальным.
[55]Суппозитории получают следующим образом.
[56]На первой стадии готовят основу. Для этого в реактор с подогревом при перемешивании загружают расчетное количество Витепсола марки Н-15 и марки W-35 и расплавляют при температуре 60-65°C. В другой емкости отдельно плавят при температуре 55-60°C масло какао, далее насосом перекачивают в основной реактор, плавят при температуре 60-65°C и перемешивают до получения однородной массы. После остывания массы до 45-48°C в реактор при перемешивании добавляют последовательно полиэтиленгликоль, глицерин, хлорид поли-(4,9-диоксадодекангуанидина), гидроколлоид меди и все компоненты перемешивают до получения однородной массы. Если требуется, проводят дополнительное измельчение порошковых ингредиентов на шаровой мельнице. Температура в реакторе поддерживается вплоть до стадии выливания. Продукт в реакторе остается в расплавленном состоянии при постоянной температуре 45-48°C. Далее происходит подача расплавленной смеси на формовочную ленту и разлив в формовочные контейнеры. После формовки суппозитории поступают на охлаждающую установку. На последнем этапе после охлаждения необходимо провести запайку, нарезку и маркировку суппозиторных контейнеров.
[57]Следует отметить, что получаемые суппозитории могут иметь массу от 1,2 до 2,5 г в зависимости от технологических условий производства.
[58]Изобретение можно проиллюстрировать следующими примерами суппозиториев при соотношении компонентов в г на один суппозиторий массой 2,0 г:
[60]| Хлорид ПДДГ | 0,01 |
| Масло какао | 0,07 |
| Глицерин | 0,05 |
| Полиэтиленгликоль ПЭГ-600 | 0,03 |
| Гидроколлоид меди | 0,004 |
| Витепсол W-35 | 1,836 |
[62]| Хлорид ПДДГ | 0,03 |
| Масло какао | 0,05 |
| Глицерин | 0,02 |
| Полиэтиленгликоль ПЭГ-1500 | 0,04 |
| Гидроколлоид меди | 0,1 |
| Витепсол W-35 | 1,76 |
[64]| Хлорид ПДДГ | 0,04 |
| Масло какао | 0,03 |
| Глицерин | 0,06 |
| Полиэтиленгликоль ПЭГ-6000 | 0,01 |
| Гидроколлоид меди | 0,05 |
[65]Смесь Витепсол Н-15 и W-35 соответственно
[66]| Н-15 - 0,45 г, W-35 - 1,46 г | 1,91 |
[67]Остальные примеры сведены в таблице 1. Для сравнения с характеристиками по прототипу был изготовлен суппозиторий следующего состава в г на один суппозиторий массой 2,0 г:
[69]| Нистатин (5000ЕД/мг) | 0,04 |
| Гидроколлоид - натрия карбоксиметилцеллюлоза | 0,03 |
[70]Основа смесь Витепсол Н-15 и W-35 соответственно
[71]| Витепсол Н-15 - 1,33 г, Витепсол W-35 - 0,60 г, | 1,93 |
[72]Для приготовления суппозиториев известного состава основу нагревают до температуры не более 45°C пока основа полностью не расплавится. Затем температуру массы снижают до 40°C и при перемешивании вводят гидроколлоид, в частности натрия карбоксиметилцеллюлозу. После этого добавляют противогрибковое вещество, в частности нистатин, и продолжают перемешивание, пока не образуется относительно однородная суспензия. После этого размешивание заканчивают, массу разливают в формы, чтобы при охлаждении получить суппозитории.
[73]Терапевтическая эффективность известных вагинальных суппозиториев с нистатином достигается за счет введения в них гидроколлоида - натрия карбоксиметилцеллюлозы или гидроксипропилметилцеллюлозы.
[74]Суппозитории по изобретению прошли испытания на определение цитотоксичности на культуре фибробластов мыши NIH/3T3 в аккредитационном центре Института медико-биологических испытаний и технологий. Исследовались экстракты из представленных образцов свечей (по примерам 1, 2 и 3). Экстракты подвергали фильтрации через фильтр-насадку для шприца с диаметром пор 0,22 мкм. Время экстракции составляло 4 ч. В процессе экстракции свечи растворились. Вытяжка представляла собой непрозрачную жидкость с жировыми каплями.
[75]Проведенные испытания показали, что экстракты из представленных образцов свечей (по примерам 1, 2 и 3) не оказывают цитотоксичность на культуру фибробластов мыши NIH/3T3.
[76]Проверку антимикробной активности проводили по Методическим Указаниям для препаратов, содержащих антимикробные компоненты по методу агаровых пластин.
[77]В качестве плотной питательной среды использовали агар Мюллера-Хинтона, который контаминировали микробной взвесью суточных тест-культур (в количестве 105КОЕ в 1 мл). В качестве тест-культур использовали основные клинические штаммы микроорганизмов: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Esherichia. Coli, Enterococcus spp., Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa и Bacillus subtilis.
[78]На поверхности контаминированного агара, разлитого в чашки Петри, делали лунку диаметром 0,8 см. В лунку помещали исследуемые образцы суппозиториев (по примерам 1, 2 и 3, а также образец суппозитория, выполненный по прототипу), после чего посевы инкубировали в термостате при температуре 37°C в течение 24 ч.
[79]Антимикробная активность испытуемого материала оценивалась степенью подавления роста микробов, а также величиной зоны задержки роста микроорганизмов от краев лунки, выраженной в миллиметрах. Результаты испытаний представлены в таблице 2.
[80]Согласно полученным результатам предлагаемые суппозитории обладали высокой антимикробной активностью по отношению к грамположительной микрофлоре (Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus и Enterococcus spp), грамположительной спорообразующей Bacillus subtilis, к кишечной палочке (Esherichia. Coli), по отношению к дрожжеподобным грибам рода Candida (Candida albicans), а также к грамотрицательной микрофлоре (Pseudomonas aeruginosa).
[81]Зона задержки роста микрофлоры Staphylococcus epidermidis и Staphylococcus aureus для суппозиториев (по примерам 1, 2 и 3) составляла соответсвенно 24-28 мм и 18-20 мм, что говорит о высокой антимикробной активности суппозиториев, т.к. известно, что инфекции мочеполовой системы, вызванные Staphylococcus epidermidis и Staphylococcus aureus, могут быть самыми разнообразными, например воспалительные заболевания, цистит, пиелонефрит, вульвовагинит, уретрит. При восходящем проникновении возбудителя развиваются более тяжелые заболевания, такие как эндометрит, простатит, интерстициальный нефрит и т.д.
[82]Как известно, Enterococcus spp и Esherichia. Coli являются одними из возбудителей воспалительных болезней женской половой сферы.
[83]Зона задержки роста микрофлоры Enterococcus spp для суппозиториев (по примерам 1, 2 и 3) составляла 14-18 мм, а зона задержки роста микрофлоры Esherichia. Coli составляла 18-22 мм, что также является высокой оценкой антимикробной активности представленных образцов свечей.
[84]Известно, что Pseudomonas aeruginosa - возбудитель инфекций мочевыводящих путей, характеризуется значительной природной устойчивостью к большинству антимикробных препаратов, применяемых в клиниках, что обусловливает появление тяжелых осложнений после инфицирования мочеполовой системы.
[85]Испытания показали, что зона задержки роста микрофлоры по Pseudomonas aeruginosa для суппозиториев (по примерам 1, 2 и 3) составляла 14-16 мм.
[86]Зона задержки роста микрофлоры по Candida albicans для суппозиториев (по примерам 1, 2 и 3) составляла 16-22 мм. Известно, одной из основных мишеней поражения грибами Candida является слизистая влагалища, что является причиной, в том числе, урогенитального кандидоза, который в 80-90% вызывается Candida albicans.
[87]Суппозитории, выполненные по прототипу, показали более низкие показатели антимикробной активности (таблица 2).
[88]Предлагаемые суппозитории ввиду их высокой эффективности рекомендуются для широкого медицинского применения.
[89]К препарату не развивается устойчивость микроорганизмов. После применения суппозиториев быстро восстанавливается нормальная микрофлора влагалища. Кроме того, достигается пролонгированное действие лечебных компонентов по всей инфицированной поверхности.
[90]Суппозитории могут быть использованы для лечения вагинитов (неспецифических и смешанных инфекций) бактериального вагиноза, инфекций, вызываемых грибами рода Кандида, трихомониаза, а также для профилактики инфекционных осложнений при гинекологических и диагностических процедурах.
[91]Предлагаемые антимикробные суппозитории соответствуют требованиям, предъявляемым к суппозиториям, а именно:
[92]- обладают оптимальными реологическими показателями, соответствующими структурно-механическими свойствами и обеспечивают максимальный контакт между лекарственными веществами и слизистой оболочкой;
[93]- не обладают раздражающим действием;
[94]- сохраняют высокую антимикробную активность при длительном хранении;
[95]- легко высвобождают лекарственные вещества, способствуют проявлению фармакологического действия лекарственных веществ.
[96]
[97]
