[1]Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к применению вакцинных препаратов для одновременной специфической профилактики оспы овец (OO) и чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ).
[2]За рубежом для профилактики этих болезней применяют вакцины, изготовленные из штаммов Peregro, RM/65 и Romanian вируса оспы овец [1, 2], а также штаммы «pprv 75/1 L К6 ВК2 Vero 70» и «Nigeria 75/1» вируса чумы мелких жвачных (Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. PART 2. SECTION 2.1. Chapter 2.1.5. [Электронный ресурс] / OIE.. - www.oie.int/eng/normes/mmanual/A_0028htpn.
[3]В настоящее время для профилактики чумы мелких жвачных животных и оспы овец широко применяются культуральные моновакцины. Так, в России и странах СНГ для конструирования вакцины против оспы овец рекомендованы вакцинные штаммы НИСХИ, ВНИИЗЖ и Б/5-96 [3-5]. Для изготовления вирусвакцины против чумы мелких жвачных используют штамм «45G37/35-К» [6]. Указанные штаммы выращивают в первичных культурах клеток почки ягненка (ПЯ) и перевиваемых культурах клеток почки овцы (ПО) и гонады козы (ГК). С этой же целью используют вакцинный штамм 45G37/35-K вируса ЧМЖ, адаптированный к перевиваемой культуре клеток почки сайги («Науч. осн. произ. ветер, биолог. препар.», 2005, стр.167-170) [7].
[4]Вирусвакцины против оспы овец и чумы мелких жвачных безвредны для овец и коз, создают напряженный иммунитет на 7 и 21 сутки соответственно, продолжительностью не менее 12 месяцев. Прививная доза каждого штамма составляет не менее 1000 ТЦД50.
[5]Раздельное применение этих вакцин не может создать иммунитет у животных одновременно против двух болезней - оспы овец и чумы мелких жвачных, а также требует удвоенного количества материальных и трудовых затрат, оказывает дополнительное стрессовое воздействие на организм животных и, как следствие, снижение продуктивности.
[6]Цель изобретения - создание ассоциированной вакцины против оспы овец и чумы мелких жвачных животных, обладающая высокой иммуногенностью, ареактогенностью, безвредностью для овец и коз и стабильностью при хранении.
[7]Указанная цель достигается смешиванием культуральных вакцинных вирусов оспы овец (штамм Б/5-96) и чумы мелких жвачных животных (штамм 45G37/35-К), инфекционная активность которых составляет не менее 4,75 lg ТЦД50/см3, со стабилизатором со следующим содержанием компонентов в вакцине (об.%): культуральный вирус оспы овец - 22,0-27,0; чумы мелких жвачных животных - 22,0-27,0; лактозо-пептонный либо ГЛА-сахарозо-желатиновый стабилизатор - 40,0-44,0, дистиллированная вода - остальное.
[8]Вируссодержащий культуральный материал объединяют с лактозо-пептонным либо с ГЛА-сахарозо-желатиновым стабилизатором и лиофилизируют. Инфекционная активность каждого вируса в лиофилизированной ассоциированной вакцине составляет не менее 4,5 lg ТЦД50/см3, что соответствует 30 прививным дозам. В одной прививной дозе содержится не менее 3,0 lg ТЦД50/см3 вакцинного штамма каждого вируса. Расчет количества прививных доз проводят по вирусу, имеющего в ассоциированной вакцине наименьшую биологическую активность.
[9]Предлагаемая ассоциированная вакцина создает иммунитет у однократно привитых овец и коз на 21 сутки одновременно против оспы овец и чумы мелких жвачных, при этом по иммуногенности она аналогична моновакцинам, применяемым против этих болезней, и стабильна при хранении.
[10]Примеры конкретного выполнения
[12]К 22,0 мл культурального вируса оспы овец штамм Б/5-96 с активностью 4,75 lg ТЦД50/см3 добавляют 22,0 мл культурального вируса чумы жвачных штамм 45G37/35-K с активностью 5,0 lg ТЦД50/см3 и 40,0 мл лактозо-пептонного стабилизатора (лактоза - 4,0%, пептон - 20,0%) и 16,0 мл дистиллированной воды.
[13]Смесь перемешивают, фасуют в ампулы по 1,0 мл и лиофилизируют до содержания массовой доли влаги в пределах 2,0-4,0%. Отпайку ампул проводят под вакуумом.
[15]К 27,0 мл культурального вируса оспы овец штамм Б/5-96 с активностью 4,75 lg ТЦД50/см3 добавляют 27,0 мл культурального вируса чумы жвачных штамм 45G37/35-K с активностью 5,0 lg ТЦД50/см3 и 44,0 мл ГЛА-сахарозо-желатинового стабилизатора (сахароза - 10,0%, желатин - 2,0%) и 2,0 мл дистиллированной воды.
[16]Смесь перемешивают, фасуют в ампулы по 1,0 мл и лиофилизируют до содержания массовой доли влаги в пределах 2,0-4,0%.
[17]Биологические свойства и физико-химические показатели приготовленной таким образом 3-х серий ассоциированной вакцины представлены в табл.1.
[18]| Таблица 1 |
| Биологические и физико-химические показатели ассоциированной вакцины |
| Характеристика вакцины | Результаты определения биологических и физико-химических свойств вакцины по сериям |
| Серия №1 | Серия №2 | Серия №3 |
| Титр вируса OO, lg ТЦД50/см3 | 4,5 | 4,5 | 4,66 |
| Титр вируса ЧМЖ, lg ТЦД50/см3 | 4,83 | 4,75 | 4,75 |
| Массовая доля влаги, % | 2,7 | 3,2 | 3,0 |
| Количество доз в 1,0 см3 | 30 | 30 | 45 |
| Цвет и форма таблетки | Гомогенная таблетка светло-коричневого цвета | Гомогенная таблетка светло-коричневого цвета | Гомогенная таблетка светло-желтого цвета |
[19]Лиофилизированная вакцина представляет собой гомогенную пористую таблетку от светло-желтого до светло-коричневого цвета с массовой долей влаги от 2,7 до 3,2%. Титр вакцинного вируса оспы овец и чумы мелких жвачных составляет 4,5-4,75 lg ТЦД50/см3 и 4,75-4,83 lg ТЦД50/см3 соответственно.
[20]В 1,0 см3 (ампуле) ассоциированного препарата содержится от 30 (серия №1 и №2) до 45 (серия №3) прививных доз вакцины.
[22]В экспериментах на овцах показано, что ассоциированная вакцина по иммуногенности отвечает требованиям МЭБ к моновакцинам против оспы овец и чумы мелких жвачных животных. Иммуногенность вакцины оценивали по результатам контрольного заражения овец вирулентным вирусом ОО штамм «Монгольский» и по уровню ВН-антител к вирусам ЧМЖЖ и ОО.
[23]Результаты проверки иммуногенности ассоциированной вакцины серия 1 приведены в табл.2.
[24]| Таблица 2 |
| Иммуногенность ассоциированной и моновакцин против оспы овец и чумы мелких жвачных животных |
Группа и кол-во
животных | Кол-во доз вак-ны | Температурная реакция на прививку (°С) | Титр ВН-антител (14-21 сут) | Реакция на контрольное заражение |
| длит. темп. р-ии (сут) | макс. темп. (°С) | вирус OO | вирус ЧМЖЖ |
| Вирусвакцина против оспы овец сухая культуральная. ТУ 9384-014-00495549-98 |
| I (2 гол.) | 1 ПВД | - | - | 1:2-1:4 | - | Отсутствует |
| Вирусвакцина против чумы мелких жвачных животных сухая культуральная. ТУ 9384-06-00495549-04 |
| II (2 гол.) | 1 ПВД | 1 | 40.3 (5 сут) | - | 1:16-1:64 | Отсутствует |
| Ассоциированная вакцина против оспы и чумы мелких жвачных животных |
| III (4 гол.) | 1 ПВД | 2 | 40.4 | 1:2-1:4 | 1:32-1:128 | Отсутствует |
| IV (2 гол.) | 10 ПВД | 3 | 40.6 | 1:4-1:8 | 1:64 | На 4-6 сут у одного ягненка подъем t° тела до 40,5°С |
| V (2 гол.) | Контроль | | | | | Угнетение, анарексия, папулезно-пустулезные поражения на коже, кератит, t° на 4-12 сут до 41,6°С |
[25]Таким образом, испытуемая серия вакцины отвечала требованиям МЭБ, предъявляемым к монопрепаратам против этих болезней, индуцировала образование в защитных титрах ВН-антител к BOO и ВЧМЖ (1:64-128) и предохраняла животных от заражения вирулентным BOO штамм «Монгольский». Вакцина безвредна для овец в 10-кратной прививной дозе.
[27]В течение 12 месяцев хранения была изучена сохраняемость ассоциированной вакцины при различных температурных режимах. Результаты этих опытов приведены в табл.3.
[28]| Таблица 3 |
| Инфекционная активность штаммов в составе вакцины при различных температурных режимах хранения |
| Серия вакцины | Вакцинный вирус | Исходный титр, lg ТЦД50/см3 | Температура хранения (°С) | Активность при хранении |
| 3 мес | 6 мес | 12 мес |
| 1 | OO | 4,5 | 4,0±4,0 | 4,5 | 4,5 | 4,5 |
| 20,0±2,0 | 4,5 | 4,25 | 3,75 |
| ЧМЖЖ | 4,83 | 4,0±4,0 | 4,83 | 4,83 | 4,83 |
| 20,0±2,0 | 4,75 | 4,5 | 4,0 |
| 2 | OO | 4,5 | 4,0±4,0 | 4,5 | 4,5 | 4,5 |
| 20,0±2,0 | 4,5 | 3,75 | 3,75 |
| ЧМЖЖ | 4,75 | 4,0±4,0 | 4,75 | 4,75 | 4,75 |
| 20,0±2,0 | 4,5 | 4,0 | 3,5 |
[29]Как видно из табл.3, при рекомендуемой температуре хранения (4,0±4,0)°С вакцина, штаммы вируса оспы овец и чумы мелких жвачных животных сохраняют исходную активность в течение 12 мес. В то же время при хранении вакцины при (20,0±2,0)°С уже через 3 мес наблюдалось снижение ее активности.
[30]Иммунобиологические свойства вакцины подтверждены во внутриинститутских комиссионных испытаниях.
[32]1. Fassi - Fehri M Etude experimentale de 1 immunitete anticlavelense post-vaccinale / Ann. Rech. Vet. 1984, v.15, №1, p.59-64.
[33]2. Jadhan К. M., Pandey A.K., Radatin N.S. Field observation on sheep pox tissue culture vaccine. / Indian vet. J. 1989, v.66, №10, p.908-912.
[34]3. Иванющенков В.Н., Кореба О.В., Кекух В.Г., Уфимцева Т.Н., Уфимцев К.П., Зайцев В.А., Курченко Ф.П. Биологические свойства вакцинного штамма НИСХИ вируса оспы овец / Ветеринария, 1990, №8, с.22-24.
[35]4. Диев В.И. Оспа овец и ее профилактика вакциной из штамма ВНИИЗЖ / Современные аспекты патологии животных: докл. конф., посвящ. 40-лет. ВНИИЗЖ. - Владимир, 1988, с.111-124.
[36]5. Балышев В.М. и др. Вирусвакцина против оспы овец сухая культуральная, результаты разработки и производственных испытаний / Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животных. Сб. ст.: Материалы Международной науч.-практ. конф., посвященной 75-летию со дня рождения И.А.Бакулова / ГНУ ВНИИВВиМ. - Покров, 2000, с.131-133.
[37]6. Патент РФ №2284193 от 27.09.2006 г., авторы: Курченко Ф.П., Евсеев A.M., Балышев В.М., Жестерев В.И., Горшкова Т.Ф., Калантаенко Ю.Ф., Луницин А.В., Уфимцев К.П., Михалкин И.П.
[38]7. В.М. Балышев, Михалкин И.П., Т.Ф. Горшкова, А.Н. Жуков, Ф.А. Бадаев. Изучение иммунобиологических свойств аттенуированного штамма «45G37/36-K вируса чумы мелких жвачных, выращенных в перевиваемой культуре клеток почки сайги / Науч. основы произ. ветер.биолог.преп.: матер. Международной науч.-практ. конф., посвященной 35-летию ин-та. Щелково, 2005, с.167-170.
