СРЕДСТВО, ОБЛАДАЮЩЕЕ ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Предложено: средство, обладающее гиполипидемической активностью. Средство представляет собой хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты, ранее известный как препарат для лечения язвенной болезни. Изобретение обеспечивает снижение уровней холестерина и триглицеридов в сыворотке крови, в печени и аорте, и блокирование липо-лиза. Вещество корректирует дислипопротеинемию и может использоваться для лечения и профилактики атеросклероза. 5 табл.

Применение хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)амино-этансульфокислоты в качестве гиполипидемического средства.

Изобретение касается расширения арсенала гиполипидемических средств, влияющих на содержания холестерина и триглицеридов крови при лечении сердечно-сосудистых заболеваний, связанных с нарушениями обменных процессов, таких как гиперлипидемия и атеросклероз, путем использования для этой цели хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты.

Ранее этот препарат описан в качестве средства для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки [Патент РФ №2179439, БИ №5 от 20.02.2002]. Проведенный фармакологический анализ показал, что хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты влияет на содержание холестерина и триглицеридов в крови и печени, поэтому может быть использован в качестве гиполипидемического средства.

Под гиперлипидемией подразумевают состояния, при которых в крови повышено содержание липопротеидов - носителей холестерина (ХС) и триглицеридов (ТГ). По общепринятым представлениям, повышение содержания этих липопротеидов способствует развитию атеросклероза.

В настоящее время гиполипидемическая лекарственная терапия признается главным способом снижения развития атеросклероза и его осложнений.

В крови человека липиды находятся в комплексе со специфическими белками - в виде липопротеидов (ЛП), из которых два класса: липопротеиды очень низкой плотности (ЛПОНП) и липопротеиды низкой плотности (ЛПНП) являются высоко атерогенными. Относительно неатерогенны - хиломикроны, выполняющие транспортную функцию, перенося из стенки кишечника триглицериды пищевого происхождения. Липопротеиды высокой плотности (ЛПВП) являются неатерогенными, проявляя антиатеросклеротическое действие в отношении сосудистой стенки.

Гиполипидемические средства необходимы при таких заболеваниях, как сахарный диабет, гипотиреоз, острый инфаркт миокарда, стенокардия, артериальная гипертензия, при трансплантации органов и коронарном шунтировании. В этих случаях развивается дислипопротеидемия (ДЛП) атерогенного характера, которая утяжеляет течение заболевания и послеоперационного периода, а при сахарном диабете она является одной из причин большой смертности от осложнений атеросклероза.

Известен для лечения гиперлипидемии клофибрат, вызывающий понижение содержания ХС и ТГ в крови, ТГ в липопротеидах очень низкой плотности (ЛПОНП) и ХС в липопротеидах низкой плотности (ЛПНП). Однако при применении препарата может развиться внутрипеченочный холестаз, обостриться желчнокаменная болезнь, гепатомегалия [J.Atherosclerosis, 1983, 49: 255-266].

Другой препарат Гемфиброзил снижает содержание ЛПОНП в крови больных с гипертриглицеридемией, не реагирующих на лечение другими гиполипидемическими препаратами. Кроме того, он повышает концентрацию антиатерогенных липопротеидов высокой плотности (ЛПВП). При применении гемфиброзила возможны желудочно-кишечные расстройства, анемия, лейкопения. В связи с этим требуется индивидуальный подбор гиполипидемических средств при лечении дислипопротеидемии и атеросклероза.

Актуальность поиска новых гиполипидемических средств состоит в том, что эти препараты должны регулировать соотношения между липопротеидами атерогенного и неатерогенного характера, устранять метаболические нарушения в артериальной стенке, таким образом, оказывая антиатеросклеротическое действие.

Хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты проявляет гиполипидемическую активность на различных гиперлипидемических моделях, обладает низкой токсичностью.

Проведенный фармакологический анализ показал, что хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты влияет на содержания ХС и ТГ в крови и является гиполипидемическим средством.

Доклинические испытания препарата позволяют рекомендовать его в качестве гиполипидемического средства при лечении гиперлипидемии и сердечно-сосудистых заболеваний.

Доклиническое изучение гиполипидемического действия хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты проводили в соответствии с требованиями Фармкомитета МЗ РФ [Руководство по экспериментальному доклиническому изучению новых фармакологических веществ (под ред. В.П.Фисенко), 2000. С.224-227].

Сущностью данного изобретения является то, что хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты эффективно снижает уровень ХС и ТГ, а также атерогенных липопротеидов на моделях гиперлипидемии у разных видов животных. Препарат увеличивает уровень антиатерогенных липопротеидов и препятствует развитию экспериментального атеросклероза. По выраженности гиполипидемического эффекта хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты не уступает клофибрату и приближается по своей активности к гемфиброзилу.

Препарат высокоэффективен как при парентеральном, так и при пероральном введении, лишен центрального действия и побочных эффектов, может использоваться в качестве гиполипидемического средства или в комбинации с традиционной терапией для профилактики и лечения атеросклероза.

Аналогов в России и за рубежом препарат не имеет.

Изучение гиполипидемической активности хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты проводили в условиях экспериментальной гиперлипидемии на крысах и морских свинках. На основании результатов биохимических исследований аорты, печени, сыворотки крови судили о гиполипидемической активности хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты.

Определение холестерина (ХС) в сыворотке крови. Уровень ХС в сыворотке крови крыс и морских свинок определяли колориметрическим ферментативным методом (CHOD-PAP) с применением набора реагентов фирмы "Vital Diagnostics".

Определение холестерина, липопротеидов высокой плотности или α-холестерина (α-ХС) в сыворотке крови. Изучение содержания α-ХС в сыворотке крови крыс проводили описанным выше методом с применением реактивов фирмы "Vital Diagnostics" при длине волны 546 нм на СФ-26 после предварительного осаждения липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) гепарином в присутствии ионов Mn [Лаб. дело 1979, №1: 36-41].

Определение триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови. Определение ТГ в сыворотке крови крыс и морских свинок осуществляли с помощью набора реактивов фирмы "Vital Diagnostics" фотометрически [In: Methods of Enzymatic Analysis Acad. Press, N.Y. 1974: P.1831].

Определение содержания холестерина (ХС) в печени крыс и морских свинок осуществляли колориметрически, используя реакцию Либермана-Бурхарда после экстракции навески печени хлороформ-метанольной смесью [In: Lipids and Steroid Hormones in Clinical Medicine. Ph. 1960: 6-10].

Определение содержания триглицеридов (ТГ) в печени. Содержание ТГ в печени крыс и морских свинок определяли по методу Нэри и Фрингс [Clin. Chem. 1973, v.19, №10: р.1201-1202].

Определение содержания общего ХС в аорте крыс и морских свинок осуществляли колориметрически, используя реакцию Либермана-Бурхарда после экстракции навески аорты хлороформ-метанольной смесью.

Определение уровня неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке крови крыс. НЭЖК определяли в образце сыворотки крови после экстракции хлороформом, используя цветную реакцию с диэтилдитиокарбаматом [J.Lipid Res. 1965, v.6, №1: 16-20].

Результаты экспериментов обрабатывали статистически, используя t-критерий Стьюдента.

Влияние хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты на уровень липидов сыворотки крови на модели тритоновой гиперлипидемии у крыс

Гиперлипидемию у крыс вызывали введением детергента тритона WR-1339 (225 мг/кг, однократно, внутрибрюшинно, "Serva", Швейцария). Данная модель характеризуется развитием мощной, стойкой гиперлипидемии у крыс-самцов массой 250-300 г [Lipids 1972, v.7, №1: 68-74]. При этом происходит увеличение уровня ХС в 5-6 раз, а ТГ в 10-20 раз по сравнению с содержанием этих показателей у нормолипидемических животных. Хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты вводили крысам внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг двукратно (до и вместе с введением тритона). Степень гиперлипидемии оценивали по уровню липидов: ХС и ТГ в сыворотке крови крыс.В качестве препарата сравнения применяли Клофибрат ("Хиноин", Венгрия) внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг.

В группе животных с гиперлипидемией, вызванной тритоном, наблюдали значительное повышение содержания ХС и ТГ в сыворотке крови (таблица 1).

Под влиянием хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты отмечали достоверное снижение уровня холестерина (ХС) и триглицеридов (ТГ) на 36% и 41% соответственно по сравнению с группой животных с гиперлипидемией. Внутрибрюшинное введение клофибрата в дозе 100 мг/кг вызывало снижение содержания ХС и ТГ на 59% и 42% соответственно (таблица 1).

Таким образом, по гиполипидемическому действию хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты сопоставим с клофибратом, однако его эффективная доза меньше, чем у клофибрата 4 раза.

Влияние хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты на развитие экспериментальной гипертриглицеридемии у крыс, вызванной введением этанола в течение 3-х дней

У крыс массой 220-250 г воспроизводили модифицированным методом Войцицки модель алкогольной гипертриглицеридемии [J.Arzneimittel - Forsch 1976, v.26, №11: 2047-2048]. Крысам-самцам трехкратно перорально вводили 50% раствор этанола в дозе 6 г/кг, который вызывал у них увеличение содержания ТГ в сыворотке крови и в печени. Хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты предварительно вводили перорально в течение пяти дней в дозе 50 мг/кг, последнее введение за 30 минут до введения этанола. В качестве препарата сравнения использовали гемфиброзил фирмы "Lechiva" (Чехия) в дозе 50 мг/кг.

Проведенные исследования показали, что у крыс, с гипертриглицеридемией, вызванной трехдневным введением этанола, наблюдается увеличение уровня ТГ в сыворотке крови в 3 раза, в печени в 4,5 раза по сравнению с интактными животными (таблица 2).

Введение хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты вызывало достоверное снижение концентрации ТГ в сыворотке крови на 29%, и в печени - на 24%. Препарат сравнения гемфиброзил снижал уровень ТГ сыворотки крови на 49% и в печени на 29%.

Таким образом, на модели алкогольной гипертриглицеридемии хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты оказал выраженное гипотриглицеридемическое действие, сравнимое с эффектом гемфиброзила.

Влияние хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты на уровень неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК), триглицеридов (ТГ) в условиях липолиза у крыс

Известно, что липолиз и липогенез в жировой ткани играют важную роль в липидном обмене. Определение концентрации неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке крови отражает интенсивность липолиза в жировой ткани. Угнетение липолиза является существенным в механизме некоторых известных гиполипидемических препаратов.

Модель липолиза, стимулированного адреналином, воспроизводили в опытах на крысах-самцах массой 220-240 г. Для стимуляции липолиза в жировой ткани животным вводили адреналин внутрибрюшинно, однократно в дозе 1,5 мг/кг. Через 30 минут после инъекции адреналина определяли уровень НЭЖК и ТГ в сыворотке крови. Хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты вводили в течение пяти дней в дозе 25 мг/кг внутрибрюшинно; последний раз - за 1 час до начала опыта или за 30 минут до стимуляции адреналином. В качестве препарата сравнения использовали никотиновую кислоту в дозе 250 мг/кг внутрибрюшинно.

В условиях липолиза, вызванного адреналином, в сыворотке крови крыс опытной группы происходило увеличение в 2,5 раза концентрации НЭЖК и 2 раза содержания ТГ (таблица 3).

Введение хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты в дозе 25 мг/кг в течение 5 дней снижало повышенный под влиянием адреналина уровень НЭЖК в 1,2 раза и ТГ в 2 раза. Аналогия картина наблюдалась при применении известного гиполиполитического препарата никотиновой кислоты, которую вводили в дозе 250 мг/кг в течение 5 дней (таблица 3).

Таким образом, по своему липолитическому и гиполипидемическому действию хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты сопоставим с никотиновой кислотой, однако его эффективная доза в 10 раз меньше, чем у препарата сравнения никотиновой кислоты.

Влияние хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты на развитие экспериментальной дислипопротеидемии у крыс, вызванной атерогенной диетой

Липидный и липопротеидный спектры крови экспериментальных животных разных видов значительно различаются: у морских свинок почти весь ХС содержится в атерогенных ЛП (ЛПНП и ЛПОНП), у крыс много ХС находится в антиатерогенной фракции ЛП - ЛПВП. В связи с этим крысы более устойчивы к индукции экспериментальной гиперлипидемии [J. Exp. Med. 1959, v.109, №3: 293-309].

Опыты проведены на крысах-самцах массой 230-250 г в условиях экспериментальной дислипопротеидемии (ДЛП), которая характеризуется повышеннным содержанием липидов и ЛП сыворотки и печени и сниженным содержанием α-ХС ЛП высокой плотности (ЛПВП). Эти нарушения вызывали с помощью модифицированной диеты, содержащей 7,5% ХС, 500000 ЕД витамина D₂ и 30% смеси животных жиров и прогретого подсолнечного масла [Хим.-фарм. Ж. 1999, №11: 14-16]. Длительность применения этой специальной диеты составляла 21 день. Особенностями данной диеты является то, что на ее фоне можно изучить не только гиполипидемические эффекты новых соединений, но и показать возможность их влияния на уровень ХС антиатерогенной фракции ЛП - ЛПВП, а по содержанию общего ХС в аорте судить о потенциальном антиатеросклеротическом их действии.

Хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты вводили в дозе 50 мг/кг перорально. В качестве препаратов сравнения использовали перорально клофибрат в дозе 100 мг/кг и гемфиброзил в дозе 50 мг/кг массы тела опытных крыс.В сыворотке крови животных определяли уровни общего ХС, ТГ и α-ХС. В печени определяли содержание ХС и ТГ, в аорте - содержание общего ХС.

Результаты исследований показали, что в группе животных, получавших атерогенную диету в течение 21 дня, наблюдалось значительное повышение содержания липидов сыворотки крови и печени по сравнению с интактными крысами (таблица 4).

Применение хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты в дозе 50 мг/кг снижало уровень общего ХС, ТГ в сыворотке крови в 1,6 раза по сравнению с животными, получавшими только атерогенную диету. Под влиянием хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты в сыворотке крови животных отмечено повышение уровня α-ХС в антиатерогенных ЛП и значительное уменьшение липидов в печени ХС - в 4,3 раза, ТГ - в 2,3 раза. По своей гиполипидемической активности хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты сопоставим с действием клофибрата, однако его эффективная доза в 2 раза меньше, чем у клофибрата (таблица 4).

Под влиянием хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты в 1,5 раза снижалось повышенное содержание ХС в аорте крыс опытной группы, вызванное атерогенной диетой. Этот защитный эффект в отношении липоидоза аорты наблюдался и у препарата сравнения гемфиброзила.

Таким образом, хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты вызывал выраженное гиполипидемическое действие у экспериментальных животных, устойчивых к созданию дислипопротеидемии и липоидоза аорты.

Влияние хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты на развитие экспериментальной дислипопротеидемии у морских свинок, индуцированной атерогенной диетой, в течение 16 дней

Данный вид животных обладает высокой чувствительностью к индукции гиперлипидемии вследствие низкой концентрации в сыворотке крови антиатерогенных ЛПВП. Модель алиментарной ДЛП воспроизводили на морских свинках-самцах массой 450-500 г, индуцированной введением через зонд в желудок 2 мл смеси, содержащей ХС в дозе 0,5 г/кг вместе с жирами и прогретым растительным маслом, в течение 16 дней. Хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты вводили через зонд в желудок в дозе 50 мг/кг. Препараты сравнения вводили перорально: клофибрат в дозе 100 мг/кг, гемфиброзил в дозе 50 мг/кг.

Результаты исследований показали, что содержание ХС сыворотки крови морских свинок, получавших атерогенную диету, увеличилось в 6,6 раза, ТГ - в 7 раз, инфильтрация липидов печени возросла в 7 раз, а в аорте уровень общего ХС увеличился в 6 раз по сравнению с интактными животными (таблица 5).

В группе морских свинок, получавших хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты в дозе 50 мг/кг на фоне диеты, показано достоверное снижение уровней ХС и ТГ в сыворотке крови на 27% и 37%. В печени содержание липидов уменьшалось в 1,5 раза.

Введение хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты достоверно тормозило липоидоз аорты у морских свинок опытной группы (таблица 5). В то же время у морских свинок, получавших клофибрат в дозе 100 мг/кг, отмечался лишь гипотриглицеридемический эффект в отношении сыворотки крови и печени, а в аорте не обнаружено гипохолестеринемического действия.

Таким образом, исследования, проведенные на экспериментальной дислипопротеидемии у морских свинок, показали, что хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты по эффективности гиполипидемического действия приближается к гемфиброзилу и превосходит клофибрат по ряду показателей в 1,2-1,4 раза.

В серии опытов на крысах со стимулированным введением адреналина липолизом обнаружено свойство хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты снижать уровень неэстерифицированных жирных кислот сыворотки крови и блокировать липолиз.

Хлоргидрат N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты обладает выраженным гиполипидемическим действием. Он обладает способностью повышать сниженный уровень холестерина антиатерогенных липопротеидов высокой плотности.

Низкая токсичность хлоргидрата N-изопропиламид-2-(1-фенилэтил)аминоэтансульфокислоты и его эффективность при применении в небольшой дозе указывают на перспективность этого вещества в качестве средства профилактики и лечения атеросклероза, так как он существенно корректирует главный фактор развития последнего - атерогенную дислипопротеидемию.