Способы получения происходящих из мышц клеток

1. Способ получения клеток, происходящих из скелетных мышц (SMDC), включающий стадии:

(а) охлаждения образца, полученного из ткани скелетных мышц, в буфере;

(б) обработки и охлаждения образца;

(в) ресуспендирования образца со стадии (б) в среде с сывороткой, содержащей по меньшей мере один фермент, и нагревания до 38°С в течение 1-20 часов; осаждения образца центрифугированием и

(г) ресуспендирования осадка образца со стадии (в) для получения суспензии одиночных клеток из образца со стадии (в) с получением таким образом SMDC.

2. Способ по п. 1, где стадию (а) выполняют при температуре ниже 16°С, предпочтительно в интервале температур от 1 до 16°С, предпочтительно от 4 до 10°С, особенно предпочтительно при 7°С; и в течение периода времени вплоть до 96 часов.

3. Способ по п. 1, где стадия (б) включает использование ножниц, скальпеля, пинцета, фильтра или шаровой мельницы.

4. Способ по п. 1, где охлаждение на стадии (б) выполняют при температуре в интервале от 1 до 16°С, предпочтительно от 4 до 8°С, особенно предпочтительно при 4°С и в течение периода времени от 2 ч до 48 ч.

5. Способ по п. 1, где стадия (в) включает проведение ферментативной обработки раствором, содержащим один или более ферментов, выбранных из группы, состоящей из трипсина, папаина, эластазы, гиалуронидазы, коллагеназы, дезоксирибонуклеазы и ДНКазы.

6. Способ по п. 1, где стадию (в) выполняют при температуре в интервале от 25 до 38°С, предпочтительно от 36 до 38°С, особенно предпочтительно при 37°С.

7. Способ по п. 1, где стадия (г) предпочтительно включает метод, выбранный из по меньшей мере одного из сортировки FACS (сортировка флуоресцентно-активированных клеток), центрифугирования, электрокинетической сортировки, сортировки посредством акустофореза, сортировки клеток с помощью микросфер и оптической сортировки.

8. Способ по п. 1, где после стадии (г) выполняют дополнительную возможную стадию (д), включающую инкубацию одноклеточной суспензии, полученной на стадии (г), где инкубацию на стадии (д) предпочтительно выполняют при температуре в интервале от 25 до 38°С, предпочтительно от 36 до 38°С, особенно предпочтительно при 37°С, получая таким образом прикрепленные SMDC.

9. Способ по п. 1, где после стадии (д) возможно выполняют дополнительную стадию (е), включающую удаление клеток, неприкрепленных на стадии (д), где стадию (е) предпочтительно выполняют через промежуток времени от по меньшей мере 6 часов до 4 суток.

10. Способ по п. 1, где после стадии (е) возможно выполняют дополнительную стадию (ж) размножения клеток, прикрепленных на стадии (д), при этом размножение на стадии (з) включает культивирование прикрепленных клеток в течение 1-5 пассажей до 70-80% конфлюентности.

11. SMDC (клетки, происходящие из скелетных мышц), где SMDC содержат по меньшей мере 60% CD56-позитивных и 60% А2В5-позитивных клеток.

12. SMDC (клетка, происходящая из скелетных мышц), полученная способом по любому из пп. 1-10.

13. SMDC по п. 11 или 12, где SMDC характеризуются экспрессией определенной комбинации маркеров, выбранной из положительной экспрессии по меньшей мере одного или более маркеров, выбранных из CD56, А2В5, CD105, Myf5 и Рах7, и негативной экспрессии по меньшей мере одного или более маркеров, выбранных из CD34 и MyoD.

14. SMDC по любому из пп. 11-13 для использования в качестве фармацевтической композиции.

15. SMDC по любому из пп. 11-13 для использования в способе предупреждения и/или лечения нейромиопатий и/или миопатий; предпочтительно, SMDC для использования в способе предупреждения и/или лечения нейромиопатий и/или миопатий, таких как недержание кала и/или недержание мочи.

16. SMDC по любому из пп. 11-13 для использования в способе лечения мышечной дисфункции, где мышечная дисфункция представляет собой недержание, в частности недержание мочи и/или анальное недержание или недержание кала.