[1]Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для получения средства для стимуляции выработки соматотропного гормона гипофизом.
[2]Средства для стимуляции выработки соматотропного гормона гипофизом в доступных авторам источниках информации не обнаружены.
[3]Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в получении средства для стимуляции выработки соматотропного гормона гипофизом.
[4]Указанный технический результат достигается тем, что средство для стимуляции выработки соматотропного гормона гипофизом содержит лиозольную составляющую диспергированной плаценты (например, плаценты денатурированной эмульгированной) человека или животного.
[5]Указанный технический результат достигается также тем, что средство для стимуляции получают путем замораживания смеси диспергированной плаценты с растворителем (водным раствором соли, изотоничным плазме крови), ее последующего размораживания и выделения из размороженной смеси лиозольной составляющей.
[6]Средство получают следующим образом.
[7]К диспергированной плаценте, например, денатурированной эмульгированной (ПДЭ) добавляют растворитель - водный раствор соли, например, физиологический раствор (стерильный 0,9% раствор хлористого натрия), в результате чего снижается концентрация дисперсной фазы смеси, что приводит к уменьшению коагуляционных контактов между частицами и прекращению гелеобразования. Затем смесь замораживают, что приводит к формированию золь-гель перехода. Затем смесь размораживают, в результате чего она преобразуется в смесь твердой и лиозольной составляющих, из которой фильтрованием выделяют лиозольную составляющую.
[8]Полученная лиозольная составляющая (ПДЭ-М) содержит основные белки плаценты (трофобластный бета1-гликопротеин и хорионический гонадотропин) в более высоких концентрациях, чем исходный препарат (таблицы 1 и 2). В результате получается растворимая в воде субстанция с высокой концентрацией активных компонентов плаценты, которая может быть стерилизована путем последующего мембранного фильтрования. Это позволяет использовать ПДЭ-М в инъекционных лекарственных препаратах. Сохранение в ПДЭ-М активных компонентов ПДЭ доказывается способностью ПДЭ-М стимулировать продукцию соматотропного гормона (таблица 3).
[9]Ниже приведен конкретный пример получения средства для стимуляции выработки соматотропного гормона гипофизом.
[10]Смешали 100 мл ПДЭ (ТУ 9358-001-48552915-07) со 150 мл 0,9% физиологического раствора в пластиковом флаконе. Флакон разместили на магнитной мешалке и перемешивали его содержимое со скоростью 100 об/мин в течение 5 мин. Полученную смесь поместили в холодильник и выдерживали в нем при температуре -20°С в течение 24 часов. Затем оттаяли смесь при комнатной температуре и отфильтровали с помощью лавсановой фильтровальной ткани (ФЛ-4, ГОСТ 26095-84). Хранение полученного средства при температуре -20°С обеспечивает его пригодность для использования в течение 1 года.
[11]Сравнение ПДЭ и ПДЭ-М по содержанию трофобластического бета1-гликопротеина (ТБГ).
[12]Трофобластический бета1-гликопротеин (ТБГ) - специфический белок беременности. В зарубежной научной литературе ТБГ чаще обозначается как SP-1 (Schwangerschaft Protein 1) или PSG (pregnancy specific glycoprotein). Трофобластический β-1-гликопротеин (ТБГ) представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 75 кДа. ТБГ является специфическим маркером беременности. ТБГ продуцируется клетками синцитиотрофобласта, начиная с их дифференциации из клеток ворсинчатого цитотрофобласта. ТБГ включает в себя группу протеинов, синтезируемых преимущественно в плаценте.
[13]Определение концентрации ТБГ производят с помощью набора реагентов «ТБГ-ИФА-БЕСТ», предназначенного для иммуноферментного исследования ТБГ в сыворотке крови человека, согласно инструкции производителя. Минимальная концентрация ТБГ, достоверно определяемая набором составляет 1,5 нг/мл.
[14]Результаты исследования 5 серий ПДЭ до модификации и после модификации (ПДЭ-М) представлены в таблице 1. ПДЭ-М содержит в пересчете на 1 мл в 1,5 раза больше ТБГ (разница достоверна, р<0,05).
[15]
[16]Сравнение ПДЭ и ПДЭ-М по содержанию хорионического гонадотропина человека (ХГЧ).
[17]Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) представляет собой гликопротеин с молекулярной массой 36700 Да, состоящей из альфа и бета-субъединиц. ХГЧ является одним из важнейших маркеров беременности, а также опухолевым маркером.
[18]Определение концентрации ХГЧ проводят с помощью набора реагентов «ХГЧ-ИФА-БЕСТ», предназначенного для иммуноферментного определения ХГЧ в сыворотке крови человека. Минимальная концентрация ХГЧ, достоверно определяемая набором составляет 2 МЕ/л.
[19]Результаты исследования 5 серий ПДЭ до модификации и после модификации (ПДЭ-М) представлены в таблице 2. ПДЭ-М содержит в пересчете на 1 мл в 2,2 раза больше ХГЧ (разница достоверна, р<0,05).
[20]
[21]Использование ПДЭ-М в препарате Гамавит для повышения продукции соматотропного гормона и увеличения живой массы у поросят.
[22]В опыте используют препарат Гамавит, в состав которого входят: нуклеинат натрия - 0,002%, ПДЭ-М - 0,05%, среда 199 (10-ти кратная) - 10%, вода для инъекций - до 100%.
[23]Гамавит вводят поросятам породы Ландрас в возрасте от 0 до 7 дней. Аспирацию крови выполняют через 3 часа после введения препарата, на 2, 3, 4, 6 сутки эксперимента.
[24]Исследования были проведены по следующей схеме.
[25]15 поросятам 1 группы (опытной) вводят Гамавит в дозе 0,5 мл/кг ж.м., внутримышечно, на 1, 2, 3, 5 сутки эксперимента.
[26]15 поросятам 2 группы (контрольная) вводят физиологический раствор NaCl в дозе 0,5 мл/кг ж.м., внутримышечно, на 1, 2, 3, 5 сутки эксперимента.
[27]Для определения соматотропного гормона в сыворотке крови (плазме) использовали набор реагентов для иммуноферментного анализа «ГР-ИФА», (ООО «Сhemа»).
[28]Результаты представлены на рис. 1. Концентрация СТГ в крови опытных поросят на всех сроках исследования выше, чем у контрольных животных. Следствием этого были более высокие показатели привесов в опытной группе (таблица 3).
[29]
