[1]Изобретение относится к лекарственным средствам и способам их получения. Лекарственное средство предназначено для профилактики и лечения заболеваний сердца и сосудов, а также дислипидемий.
[2]Наиболее близким аналогом является биологически активная добавка (БАД) и способ ее получения (RU 2427284, опубл. 27.08.2011).
[3]Однако концентрации активных компонентов в организме, получаемые при использовании указанной БАД, существенно ниже терапевтических. Кроме того, технология приготовления, описанная в патенте RU 2427284, не позволяет достичь равномерного распределения действующих веществ в таблетке. В результате эффективность применения БАД снижается, а выраженный терапевтический эффект может быть достигнут только при длительном применении средства.
[4]Для смешивания активных фармацевтических субстанций и вспомогательных веществ (наполнителей), имеющих различные физико-химические свойства, применяются различные методы: предварительное растворение и нанесение на наполнитель, смешивание расплавленных АФИ и субстанции, карамелизация и др.
[5]Анализ показывает, что ни один из перечисленных методов в нашем случае не подходит, т.к. существуют ограничения по растворимости и температуре разложения активной фармацевтической субстанции натрия полипренилфосфата и вспомогательного вещества (наполнителя) сорбита.
[6]Предлагается сухое смешивание полипренилфосфатов и сорбита.
[7] Техническим результатом является получение стабильной таблетированной формы с максимально эффективной концентрацией активных компонентов, равномерно распределенных по всей массе таблетки и повышенной биодоступностью ингредиентов.
[8]Технический результат достигается способом получения лекарственного средства на основе полипренилфосфатов и бета-ситостерина, который отличается тем, что растирают полипренилфосфат и сорбит в ступке, размер которой соответствует суммарному объему смешиваемых веществ, до получения сухой смеси полипренилфосфата и сорбита, после чего осуществляют гомогенизацию сорбита, бета-ситостерина и сухой смеси полипренилфосфата и сорбита, при этом гомогенизация проводится в течение 10 минут в импульсном режиме.
[9]Технологический процесс смешивания состоит из двух основных этапов
[10]Предварительное смешивание осуществляют посредством растирания полипренилфосфатов в сорбите.
[11]Гомогенизация полученной смеси полипренилфосфатов в сорбите с использованием гомогенизатора.
[12]Предварительное смешивание полипренилфосфатов и сорбита производится в ступке, размер которой соответствует суммарному объему смешиваемых веществ.
[13]Оптимальное соотношение для смешивания растиранием: 20 г сорбита на 10 г полипренилфосфатов.
[14]Для подготовки процесса в ступку засыпают 20 г сорбита, размер гранул 80-120 меш. Полипренилфосфаты, общей массой 10 г, вводят небольшими частями 1-2 г. После каждого введения полипренилфосфаты растирают, смешивая с сорбитом до получения сухой смеси. Время растирания не должно быть слишком долгим, т.к. длительное растирание приводит к агрегации (слипанию) измельченных частиц.
[15]Полипренилфосфаты при диспергировании могут спрессовываться и прилипать к стенкам ступки, поэтому надо обращать внимание на то, чтобы между стенкой или дном ступки и вводимыми полипренилфосфатами находился слой сорбита.
[16]По мере образования комков полипренилфосфатов, которые при соединении с сорбитом теряют способность прилипать к стенкам ступки, добавляется 3-5 г сорбита и перемешивается для получения однородной смеси. Полученную смесь направляют на 2 стадию.
[17]Гомогенизация полученной смеси полипренилфосфатов в сорбите с использованием гомогенизатора.
[18]Полученную на 1 этапе смесь гомогенизируют с использованием универсального гомогенизатора для твердых образцов типа Universal Mixer GK.
[19]Для этого в гомогенизатор засыпают расчетное количество сорбита (но не более 1 кг) и смесь полипренилфосфатов в сорбите. Оптимальное соотношение полипренилфосфат: сорбит -1:8 (сорбит, введенный на 1 этапе, учитывается).
[20]Загрузка ингредиентов в гомогенизатор производится в следующем порядке:
[21]1-й слой - сорбит, 1/2 расчетного количества
[22]2-й слой - смесь полипренолов и сорбита
[23]3-й слой - сорбит, вторая половина расчетного количества.
[24]Гомогенизация производится в течение 10 минут в импульсном режиме. После каждой остановки процесса - интенсивное встряхивание чаши со смесью.
[25]Время и скорость вращения:
[26]4 мин - 500-700 об/мин, перерыв 20 мин.
[27]2 мин - 1000-1200 об/мин, перерыв 20 мин.
[28]4 мин - 500-600 об/мин - окончание процесса.
[29] Для проверки однородности смеси следует просеять полученный порошок через сито с размером ячейки 20 мкм. При появлении на поверхности сита отсева необходимо определить его вес и состав. Если вес отсева составляет менее 0,1% от массы загруженных ингредиентов, процесс гомогенизации заканчивается. Если вес отсева составляет более 0,2% от массы загруженных ингредиентов, а в отсеве просматриваются частицы полипренилфосфата, процесс гомогенизации продолжается на скорости вращения 1000-1200 об/мин в течение одной минуты. После этого производится повторное просеивание и определение веса отсева. Если отсев соответствует названным ранее условиям, процесс прекращается.
[30]Визуальная оценка производится путем просматривания поверхности полученного порошка: невооруженным глазом на расстоянии 25 см не должно наблюдаться отдельных частиц, блесток или вкраплений желтого или желтоватого цвета.
[31]При приготовлении смеси для получения таблетированной формы лекарственного средства на основе полипренилфосфатов и бета-ситостерина на этапе гомогенизации вместе с сорбитом добавляют также бета-ситостерин.
[32]Оптимизированное соотношение активных фармацевтических субстанций (полипренилфосфатов и бета-ситостерина) и наполнителя (сорбита) для качественного прессования таблеток, исключения подлипания, разрушения формы таблетки массой 250 мг составляет 8 мг полипренилфосфатов и 10 мг бета-ситостерина. Снижение массы таблетки за счет уменьшения ввода сорбита не позволяет осуществлять прямое таблетирование таблетмассы. В то же время увеличение массы вводимых субстанций >10 мг для бета-ситостерина и, в особенности, >8 мг для полипренилфосфата приводит к разрушению формы таблетки и подлипанию.
[33]Таким образом, предельное содержание полипренилфосфатов в одной таблетке составляет 8 мг, а бета-ситостерина - 10 мг.
[34] Для определения оптимального содержания бета-ситостерина в препарате готовят 3 образца смеси, содержащих субстанцию бета-ситостерина (БСС) в количестве: 0,0 мг (контроль); 6,0 мг (образец 1) и 10,0 мг (образец 2) и наполнитель - сорбит.
[35]У всех участвующих в опыте животных вызывают выраженную гиперлипидемию внутрибрюшинным введением полоксамера 407 в дозе 7,5 мг/мышь. Указанную дозу полоксамера вводят четырехкратно, через сутки, в утренние часы (с 10 до 11 часов утра). Для исследования влияния препаратов на уровень холестерина и триглицеридов в сыворотке крови гиперлипидемичных мышей формируют следующие группы экспериментальных животных (по 7 мышей в каждой группе):
[36]1. Контрольная группа - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь пищевого сорбита в 0,5 мл растворителя (среда RPMI-1640).
[37]2. Опытная группа I - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №1 в 0,5 мл растворителя.
[38]3. Опытная группа II - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №2 в 0,5 мл растворителя.
[39]Все исследуемые препараты вводят ежедневно, начиная со следующего дня после первого введения полоксамера, в утренние часы, через желудочный зонд. Растворы и взвеси препаратов в растворителе готовят непосредственно перед введением животным.
[40]Пробы крови берут у животных из хвостовых вен (мышам надрезают кончик хвоста и в пластиковый капилляр забирают 20-30 мкл крови), трехкратно, через день, при этом первую пробу забирают через сутки после второй инъекции полоксамера (то есть после двух введений исследуемого препарата).
[41]Полученные данные представлены на фиг. 1. Образец №2, содержащий максимально возможную дозу БСС, достоверно снижает уровень холестерина.
[42] Фиг. 1. Показывает влияние бета-ситостерина на уровень холестерина в сыворотке гиперлипидемичных мышей.
[43]Специфические свойства полученной смеси можно проиллюстрировать следующими примерами.
[45]Готовят 6 образцов лекарственной формы, содержащей по 10 мг БСС и разные дозы полипренилфосфатов (ППФ).
[46]В таблице 1 приведены номера образцов и соответствующее им содержание БСС в лекарственном средстве.
[47]Таблица 1. Образцы смеси и соответствующие им лекарственные формы.
[48]
[49]У всех участвующих в опыте животных вызывают выраженную гиперлипидемию внутрибрюшинным введением полоксамера 407 в дозе 7,5 мг/мышь. Указанную дозу полоксамера вводят четырехкратно, через сутки, в утренние часы (с 10 до 11 часов утра). Для исследования влияния препаратов на уровень холестерина и триглицеридов в сыворотке крови гиперлипидемичных мышей формируют следующие группы экспериментальных животных (по 7 мышей в каждой группе):
[50] 1. Контрольная группа I - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №1 в 0,5 мл растворителя.
[51]2. Опытная группа I - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №2 в 0,5 мл растворителя.
[52]3. Опытная группа II - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №3 в 0,5 мл растворителя.
[53]4. Опытная группа III - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №4 в 0,5 мл растворителя.
[54]5. Опытная группа IV - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №5 в 0,5 мл растворителя.
[55]6. Опытная группа V - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят 50 мг/мышь образца №6 в 0,5 мл растворителя.
[56]Все исследуемые препараты вводят ежедневно, начиная со следующего дня после первого введения полоксамера, в утренние часы, через желудочный зонд. Растворы и взвеси препаратов в растворителе готовят непосредственно перед введением животным.
[57]Пробы крови берут у животных из хвостовых вен (мышам надрезают кончик хвоста и в пластиковый капилляр забирают 20-30 мкл крови), трехкратно, через день, при этом первую пробу забирают через сутки после второй инъекции полоксамера (то есть после двух введений исследуемого препарата).
[58]Полученные данные представлены на фиг. 2. Добавление ППФ дозозависимо усиливает действие БСС и приводит к дополнительному снижению уровня холестерина, причем максимальный эффект наблюдается при максимально возможном содержании ППФ в таблетке (8 мг).
[59]Фиг. 2. Показывает влияние полипренилфосфата на содержание холестерина в сыворотке крови.
[60]Таким образом, максимальный терапевтический эффект, определяемый по уровню снижения холестерина, достигается при предельном содержании полипренилфосфатов (8 мг), а бета-ситостерина (10 мг) в одной таблетке.
[62]На основе описанной выше смеси, содержащей 8 мг полипренилфосфатов и 10 мг бета-ситостерина, готовят таблетки массой 250 мг с сорбитом в качестве наполнителя - готовая лекарственная форма (ГЛФ).
[63]У мышей гибридов первого поколения (C57Bl/6xDBA/2)F1 или мышей С57 В1/6 самок, в возрасте 2-х месяцев вызывают выраженную гиперлипидемию внутрибрюшинным введением полоксамера 407 в дозе 7,5 мг/мышь. Указанную дозу полоксамера вводят двух-четырехкратно, через сутки, в утренние часы (с 10 до 11 часов утра). Формируют следующие группы экспериментальных животных:
[64]1. Контрольная группа I - мыши с гиперлипидемией, которым внутрижелудочно вводят растворитель (среду RPMI-1640 - 0,5 мл) - группа плацебо.
[65]2. Контрольная группа II - мыши с гиперлипидемией.
[66]3. Опытная группа III - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 0,2 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя.(6,25 мг ГЛФ).
[67]4. Опытная группа IV - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 0,8 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя (25 мг ГЛФ).
[68]5. Опытная группа V - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 1,6 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя (50 мг ГЛФ).
[69]6. Опытная группа VI - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 2,4 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя (75 мг ГЛФ).
[70]7. Опытная группа VII - мыши с гиперлипидемией, которым перорально вводят 3,2 мг/мышь полипренилфосфата натрия в 0,5 мл растворителя (100 мг ГЛФ).
[71]Все исследуемые препараты вводят ежедневно, начиная со следующего дня после первого введения полоксамера, в утренние часы. Растворы и взвеси препаратов в растворителе готовят непосредственно перед введением животным.
[72]Количество животных в группе формируют, исходя из необходимости трехкратного взятия крови. Пробы крови берут у животных из группы после декапитации, трехкратно, через день, при этом первую пробу забирают через сутки после второй инъекции полоксамера (то есть после двух введений исследуемого препарата).
[73]Определение общего холестерина, триглицеридов, холестерина ЛПНП, холестерина ЛПВП проводят на биохимическом анализаторе Olympus 640 (Япония) с использованием коммерческих наборов фирмы Olympus (кат. №OSR6516, OSR6133, OSR6283, OSR6587, соответственно).
[74]У мышей группы I показатели холестерина и триглицеридов (фиг. 3) достоверно (Р>0,05) не отличаются от соответствующих показателей мышей группы II.
[75]Фиг. 3 показывает сравнение групп I (плацебо) и II (контроль) по уровню холестерина и триглицеридов.
[76]Сравнение групп животных III-VII, получивших разные ГЛФ, с контрольной группой II позволяет определить эффективные дозы по исследованным параметрам.
[77]Фиг. 4 показывает влияние ГЛФ на уровень холестерина в крови гиперлипидемичных мышей.
[78]Уровень холестерина в крови гиперлипидемичных животных (фиг. 4) в наибольшей степени снижается в группе IV после введения 25 мг ГЛФ (0,8 мг полипренилфосфата натрия), что соответствует 1,25 г/кг. Дозы 75 и 100 мг достоверного влияния на уровень холестерина не оказывали.
[79]Похожая картина наблюдается при исследовании уровня триглицеридов в крови (фиг. 5): максимальный эффект отмечается при введении 25 мг препарата. Дозы 50-75 мг оказывают чуть меньший, но достоверный эффект (Р<0,05) снижения уровня триглицеридов.
[80]Фиг. 5 показывает влияние ГЛФ на уровень триглицеридов в крови гиперлипидемичных мышей.
[81]Фиг. 6 - влияние ГЛФ на уровень ЛПВП в крови гиперлипидемичных мышей.
[82]Фиг. 7 - влияние ГЛФ на уровень ЛПНП в крови гиперлипидемичных мышей.
[83]Достоверное влияние ГЛФ на уровень ЛПВП (фиг. 6) и ЛПНП (фиг. 7) наблюдается в более широком диапазоне доз - от 6,25 до 100 мг. При этом наблюдается повышение уровня ЛПВП и снижение ЛПНП.
