[2]Настоящее изобретение относится к области медицины и фармацевтики, более конкретно, к вагинальному суппозиторию для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний влагалища, связанные с избыточным ростом инфекционных грибковых патогенов, включая Candida spp. и другие, и к способу изготовления такого суппозитория.
[4]Инфекционно-воспалительные заболевания влагалища, представляют собой широко распространенную проблему. Среди инфекционно-воспалительных заболеваний влагалища важное клиническое значение имеют кандидозы, в т.ч., вагинальные и вульвовагинальные кандидозы, вызываемые Candida spp. - дрожжеподобным грибком, обитающим в полости рта, в тонком кишечнике, на слизистой половых органов, мочевыделительных структурах, пищеводе и гортани, в норме не вызывающим у человека патологических состояний, но при снижении иммунитета становящимся причиной кандидозов, в частности, вагинальных кандидозов. В настоящее время отмечается тенденция к возрастанию встречаемости длительно текущих, рецидивирующих форм вагинального и вульвовагинального кандидоза. Показано, что большинство женщин на определенном этапе жизни инфицируются Candida spp., при этом 20% женщин являются бессимптомными носителями Candida spp., а в 5-10% случаев развивается хронический кандидоз (Конгуров Н.В., Герасимова Н.М., Вишневская И.Ф. Актуальные проблемы лечения урогенитального кандидоза. // "Акушерство и гинекология", 2005, №4, стр. 50-53; Прилепская В.Н., Байрамова Г.П. Вагинальный кандидоз: этиология, клиника, диагностика, принципы терапии. // "Контрацепция и здоровье", 2002, №1, С. 3-8). Имеющим наибольшее клиническое значение патогеном является Candida albicans (далее также указывается как C. albicans или просто "гриб"), однако к возникновению вагинального кандидоза может приводить также инфицирование и другими видами Candida, например, Candida glabrata, Candida tropicans, Candida pseudotropicans, Candida krusei, Candida parakrusei, Candida parapsilosis и Candida guillermondi. Для C. albicans, среди всех перечисленных видов Candida, характерна наиболее выраженная ферментативная активность, что проявляется способностью C. albicans продуцировать протеолитические и липолитические ферменты. Это обеспечивает высокую адгезивную способность C. albicans и глубокую его пенетрацию в клетки слизистой оболочки влагалища (Прилепская В.Н., Байрамова Г.П. Вагинальный кандидоз: этиология, клиника, диагностика, принципы терапии. // "Контрацепция и здоровье", 2002, №1, стр. 3-8).
[5]Одним из средств, используемых для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний влагалища, таких как вагинальные кандидозы, вагиниты и вульвовагиниты, в частности, вагиниты и вульвовагиниты, связанные с избыточным ростом Candida, является тетраборат натрия (Na2B4O7) - натриевая соль борной кислоты, хорошо растворимая в глицерине, обычно используемая в форме пентагидрата (Na2B4O7·5H20) или декагидрата (Na2B4O7·10H20) (далее все три формы для краткости обозначаются как "тетраборат натрия"). Тетраборат натрия представляет собой антисептическое средство, обладающее бактериостатической и фунгистатической активностью, эффективное при кандидозе слизистых оболочек.
[6]Из уровня техники хорошо известен раствор тетрабората натрия в глицерине ("Натрия тетраборат. Раствор для местного применения 20%" - "Регистр лекарственных средств России", 13.11.2013, URL: https://www.rlsnet.ru/tn_index_id_4830.htm), используемый для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний влагалища, связанных с избыточным ростом грибов Candida, в том числе, для лечения вагинальных кандидозов. Раствор тетрабората натрия в глицерине применяют местно путем смачивания указанным раствором ватного тампона с последующей обработкой указанным ватным тампоном пораженных областей слизистой оболочки вульвы и влагалища. Раствор тетрабората натрия, применяемый таким образом, удаляет мицелий гриба со слизистых оболочек, нарушает процесс прикрепления гриба к слизистым оболочкам и тормозит его размножение.
[7]Раствор тетрабората натрия, как и растворы других антисептических средств, применяемых местно для лечения вагинального кандидоза, быстро элиминируется с поверхности слизистой оболочки, в результате общее время взаимодействия лекарственного препарата со слизистой влагалища уменьшается. Кроме того, среди недостатков раствора тетрабората натрия следует отметить невысокую точность дозирования активного вещества, а также неравномерность его распределения по слизистой оболочке влагалища ввиду наличия труднодоступных для обработки ватным тампоном участков, находящихся в криптах слизистой оболочки влагалища. Наличие таких труднодоступных участков слизистой делает необходимой многократную обработку пораженных участков, при этом, предпочтительно, такая обработка должна проводиться медицинским персоналом, а не самой пациенткой, что может создавать дополнительные препятствия к регулярному использованию данного средства. В противном случае мицелий гриба может сохраняться в криптах слизистой оболочки влагалища, что впоследствии приводит к рецидиву заболевания.
[8]В связи с этим, является актуальной задача обеспечения средств местного применения для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний вульвы и влагалища, в первую очередь, для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний вульвы и влагалища, связанных с избыточным ростом Candida, которые обеспечивали бы равномерное распределение лекарственного средства по слизистой оболочке влагалища и высокую биодоступность активного вещества суппозиториев.
[9]Указанная задача принципиально может быть решена при помощи такой лекарственной формы для местного применения, как вагинальные суппозитории (Тихонов А.И., Ярных Т.Г. "Технология лекарств" (учебник для студентов фармацевтических вузов и факультетов; перевод с украинского), под редакцией академика АН ТК Украины А.И. Тихонова, издательство НФАУ, "Золотые страницы", 2002 г., стр. 408-410; далее указывается как Тихонов А.И., Ярных Т.Г., 2002). По определению, суппозитории представляют собой твердую при комнатной температуре дозированную лекарственную форму, содержащую одно или более действующих веществ, растворенных или диспергированных в подходящей основе, предназначенную для введения в полости тела и расплавляющуюся (растворяющуюся, распадающуюся) при температуре тела при введении в полости тела (Государственная Фармакопея Российской Федерации XIII издания (далее указываемой как ГФ РФ XIII), ОФС 1.4.1.0013.15 "Суппозитории").
[10]Из уровня техники известно выпускаемое компанией "Vakos X.T." (Чехия) средство для местного применения для лечения заболеваний влагалища, связанных с избыточным ростом влагалищной микрофлоры - грибов Candida, выполненное в виде вагинальных шариков (глобул), представляющих собой разновидность вагинальных суппозиториев (см.: Тихонов А.И., Ярных Т.Г., 2002, стр. 408), предназначенных для местного (вагинального) применения и содержащих в качестве активного начала натрия тетрабората декагидрат в количестве 600 мг ("GLOBULUS CUM NATRIO TETRABORICO 0,6 CSC. Příbalová informace: informace pro uživatele", 09.02.2015, URL: www.sukl.cz/modules/medication/download.php?file=PI84981.pdf&type=pil). Способ изготовления указанных глобул производителем не раскрывается. Время полной деформации глобул при их применении, профиль высвобождения тетрабората натрия из глобул и биодоступность тетрабората натрия в указанных глобулах также неизвестны.
[11]Указанные глобулы изготовлены с использованием желатиново-глицериновой основы и содержат, помимо указанной основы и активного компонента, консерванты - метилпарабен и пропилпарабен, а также очищенную воду.
[12]Хотя желатиново-глицериновые суппозиторные основы ввиду присущей им механической пластичности часто используются для изготовления вагинальных суппозиториев, таким основам присущи многочисленные недостатки, среди которых, в первую очередь, следует отметить низкую микробиологическую стабильность и высокую подверженность такой желатиново-глицериновой суппозиторной основы микробной контаминации (см., например: Зюбр Т.И., Васильев И.Б. Мягкие лекарственные формы: учебно-методическое пособие. - ГОУ ВПО ИГМУ Росздрава, Иркутск, 2008, стр. 44).
[13]Кроме того, желатиново-глицериновые суппозиторные основы сравнительно быстро высыхают, разжижаются и расслаиваются (см. там же). Эти факторы дополнительно ограничивают возможность использования таких основ для изготовления вагинальных суппозиториев.
[14]Ввиду низкой микробиологической стабильности желатиново-глицериновой основы, в составе вышеупомянутых глобул, выпускаемых компанией "Vakos X.T.", используются консерванты - парабены (производные пара-гидроксибензойной кислоты), включая метилпарабен и пропилпарабен. Парабены широко используются как в косметической, так и в фармацевтической промышленности в качестве консервантов, однако в литературе показано, что они способны индуцировать системные аллергические реакции (реакции гиперчувствительности немедленного типа). См., например, работу Nagel J.E., Fuscaldo J.T., Fireman P. Paraben allergy. // "Journal of the American Medical Association", 237: 1594-1595, April 1977. Кроме того, некоторыми авторами были высказаны обоснованные сомнения в том, что профиль безопасности и кумулятивные эффекты парабенов, мóгущие иметь место при регулярном местном применении парабенсодержащих средств, в достаточной степени изучены. См., например, работу Karpuzoglu E., Holladay S.D., et al. Parabens: potential impact of low-affinity estrogen receptor binding chemicals on human health. // "Journal of Toxicology and Environmental Health. Part B", 16: 321-335, 2013.
[15]Следует также отметить, что суппозитории, изготовленные с использованием желатиново-глицериновой основы, входя в контакт со слизистой оболочкой влагалища, абсорбируют из нее воду и, таким образом, обезвоживают слизистую, в результате раздражение слизистой только усиливается. Наконец, следует отметить, что вышеупомянутые желатиново-глицериновые глобулы с тетраборатом натрия доступны лишь на европейском рынке лекарственных препаратов, тогда как на российском рынке они отсутствуют. В связи с этим, сохраняется актуальность задачи расширения арсенала вагинальных суппозиториев для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний влагалища, таких как вагинальные кандидозы, вагиниты и вульвовагиниты, в частности, вагиниты и вульвовагиниты, связанные с избыточным ростом Candida, в первую очередь, Candida albicans, эффективных и безопасных в применении и стабильных при хранении.
[16]Показано, что выбор суппозиторной основы играет очень важную роль в получении суппозиториев, обладающих заданными свойствами, например, заданной скоростью и полнотой высвобождения активного вещества из суппозитория и заданной биодоступностью активного вещества (Демина Н.Б. Современные аспекты производства лекарственной формы суппозитории. // "Разработка и регистрация лекарственных средств" - "Фармконтракт", 2016 г., №2 (15), стр. 60-69; далее - Демина Н.Б., 2016).
[17]Важную альтернативу суппозиториям, изготовленным с использованием желатиново-глицериновой основы, представляют собой суппозитории, изготовленные с использованием в качестве основы твердого жира, например, смеси триглицеридов, диглицеридов и моноглицеридов среднецепочечных жирных кислот С16-С18. Указанные смеси выпускаются различными производителями вспомогательных компонентов для нужд фармацевтической промышленности, например, компанией «Dynamit Nobel GmbH» (Германия) под торговым наименованием "Witepsol" (далее также указывается как витепсол). Направленная этерификация указанных триглицеридов, диглицеридов и моноглицеридов, осуществляемая при получении витепсола, позволяет получить целый ряд суппозиторных основ с заданными свойствами (см.: Loyd V. Allen Jr. Suppositories. // "Pharmaceutical Press", London, Great Britain, 2008, p. 31).
[18]Среди указанных коммерчески доступных смесей следует отметить как наиболее предпочтительную в качестве суппозиторной основы для вагинального суппозитория по изобретению смесь триглицеридов (65-80%), диглицеридов (10-35%) и моноглицеридов (1-5%) среднецепочечных жирных кислот С16-С18 с гидроксильным числом, составляющим от 40 до 50 мг KOH/г. Указанная смесь выпускается под торговым наименованием "Witepsol W35" (далее также указывается как витепсол W35).
[19]Витепсол W35 широко используется в качестве основы для суппозиториев (далее также указываемой как "суппозиторная основа"), поскольку, благодаря высокому гидроксильному числу триглицеридов, диглицеридов и моноглицеридов, входящих в состав витепсола W35, витепсол W35 обеспечивает высокую биодоступность активного вещества суппозиториев. Кроме того, входящие в состав витепсола W35 моно- и диглицериды замедляют осаждение твердых частиц активного вещества, способствуют смачиванию слизистых оболочек и улучшают биодоступность активного вещества суппозитория. Наконец, к числу важных преимуществ витепсола W35 относится то, что для него характерен существенный разрыв между температурой плавления и температурой кристаллизации (33,5-35,5°С и 27,0-30,0°С соответственно), в связи с чем витепсол W35 более эластичен в условиях резкого охлаждения и медленнее затвердевает, по сравнению с другими суппозиторными основами, что также делает витепсол W35 привлекательным для использования в вагинальных суппозиториях в качестве суппозиторной основы, например, при создании суппозиториев суспензионного типа.
[20]Из статьи Блиновой О.А., Кондратьевой Н.А., Рюминой Т.Е. и Коростелева С.А. Биофармацевтические исследования суппозиториев для лечения вагинального кандидоза. // "Фармация", 2009 г., №4, стр. 31-34 (далее - Блинова О.А. и соавт., 2009) известны предлагаемые в качестве ближайшего аналога заявляемого изобретения вагинальные суппозитории для лечения вагинального кандидоза, содержащие в качестве активных веществ тетраборат натрия и, необязательно, растительный экстракт "Неомикон", включающий экстракты календулы, ромашки, чистотела, фиалки и манжетки обыкновенной, описанный в предшествующем уровне техники в работе Кондратьевой Н.А., Блиновой О.А., Смирновой М.М. и др. Разработка состава сбора для лечения вагинального кандидоза. - "Медицина и здоровье" - Материалы II международной выставки "Фармация и здоровье" (9-12 ноября 2005 г.), Пермь, 2005 г., стр. 34-35 (далее - Блинова О.А. и соавт., 2009). Вагинальные суппозитории согласно Блиновой О.А. и соавт., 2009 изготавливали с использованием витепсола W35 или витепсола W35 в сочетании с глицерином в качестве суппозиторной основы, либо с использованием желатиново-глицериновой основы, аналогичной основе глобул, выпускаемых компанией "Vakos X.T." (Чехия). Количественное содержание тетрабората натрия и основы в вагинальных суппозиториях, как и технология получения таких суппозиториев, согласно статье Блиновой О.А. и соавт., 2009 не раскрывается.
[21]Согласно Блиновой О.А. и соавт., 2009, для улучшения диспергирования тетрабората натрия в суппозиторной основе и для получения стабильной дисперсной системы использовали эмульгатор T-2. Вопросы, связанные с безопасностью использования эмульгатора Т-2 в составе лекарственных препаратов, изучены плохо, и в большинстве стран он не разрешен для использования в составе лекарственных препаратов. Правильный выбор эмульгатора, обеспечивающего равномерное распределение активного вещества суппозитория по суппозиторной массе, однако, является очень важным для получения суппозиториев с заранее заданными свойствами (Демина Н.Б., 2016). Кроме того, работа Блиновой О.А. и соавт., 2009 не рассматривает проблемы, связанные с возможным осаждением активного вещества суппозиториев и с возможным растрескиванием готовых суппозиториев.
[22]Наконец, Блинова О.А. и соавт., 2009 не раскрывают оптимальное количественное соотношение тетрабората натрия и основы, а также оптимальное количественное соотношение основы и эмульгатора, тогда как количественное соотношение активного вещества и основы может существенно влиять на свойства суппозиториев, в частности, на высвобождение активного вещества и на его биодоступность. Таким образом, указанные факторы препятствуют внедрению предложенных Блиновой О.А. и соавт., 2009 суппозиториев в клиническую практику.
[23]Задачей настоящего изобретения является, таким образом, создание эффективных и удобных вагинальных суппозиториев, безопасных в применении и стабильных при хранении, предназначенных для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний влагалища, в особенности, для лечения вагинальных и вульвовагинальных кандидозов, содержащих в качестве активного вещества тетраборат натрия, обеспечивающих, при их медицинском применении, равномерное распределение активного вещества по слизистой оболочке влагалища и высокую биодоступность активного вещества.
[24]С указанной задачей тесно связана также и другая задача настоящего изобретения - задача разработки простого и экономичного способа изготовления таких вагинальных суппозиториев, позволяющего получить стабильные при хранении вагинальные суппозитории, содержащие в качестве активного вещества тетраборат натрия, обеспечивающие высокую биодоступность активного вещества.
[25]Технические результаты изобретения заключаются в обеспечении лекарственного средства в форме вагинальных суппозиториев с тетраборатом натрия, предназначенных для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний вульвы и влагалища, характеризующихся высокой микробиологической стабильностью, несмотря на отсутствие консервантов, и в обеспечении более равномерного распределения и высокой биодоступности активного вещества - тетрабората натрия - по слизистой оболочке влагалища при местном (вагинальном) применении указанных суппозиториев, а также в расширении арсенала средств для местного применения, предназначенных для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний влагалища, в особенности, таких как вагинальные кандидозы, вагиниты и вульвовагиниты, в частности (без ограничения), вагиниты и вульвовагиниты, связанные с избыточным ростом грибов Candida.
[26]Задача изобретения решается, а технические результаты - достигаются благодаря использованию в вагинальном суппозитории согласно изобретению твердой жировой основы (далее также указываемой как твердый жир), причем в качестве указанной твердого жира используют смесь триглицеридов, диглицеридов и моноглицеридов среднецепочечных (С16-С18) жирных кислот с гидроксильным числом, составляющим от 40 до 50 мг KOH/г, а также благодаря включению в состав указанных вагинальных суппозиториев дистиллированных моноглицеридов в качестве добавки, предотвращающей снижение температуры плавления и времени полной деформации суппозитория, и полиоксиэтилен (20) сорбитана моноолеата, далее также указываемого как полисорбат 80 или Tween® 80, - в качестве эмульгатора. Использование моноглицеридов дистиллированных в дополнение к эмульгатору - полисорбату 80 - дополнительно способствует улучшению технологических свойств суппозиториев, в частности, позволяет предотвратить растрескивание суппозиториев и осаждение активного вещества суппозиториев.
[27]Задача изобретения, относящегося к способу изготовления вагинального суппозитория, решается, а технические результаты - достигаются благодаря тому, что, в соответствии с указанным способом, выполняют следующую последовательность действий:
[28]а) растворяют навеску тетрабората натрия в глицерине, предварительно нагретом до температуры +50-60°C с последующим перемешиванием полученной смеси вплоть до получения прозрачного раствора, с последующей фильтрацией полученного раствора;
[29]б) совместно расплавляют навески твердого жира и моноглицеридов дистиллированных при температуре +75-80°С и при постоянном перемешивании, с последующей фильтрацией полученного расплава;
[30]в) добавляют к полученному на этапе (б) расплаву навеску полиоксиэтилен (20) сорбитана моноолеата с последующим перемешиванием, таким образом получая смесь;
[31]г) охлаждают полученную на этапе (в) смесь до температуры +55-60°С;
[32]д) объединяют указанную охлажденную смесь с полученным на этапе (а) раствором с последующим их перемешиванием при температуре +55-60°С вплоть до получения однородной суппозиторной массы;
[33]е) охлаждают полученную на этапе (д) суппозиторную массу до температуры +42-45°С при постоянном перемешивании;
[34]ж) выливают охлажденную на этапе (е) суппозиторную массу в формы с последующим охлаждением указанной суппозиторной массы вплоть до ее затвердевания, с получением вагинальных суппозиториев.
[35]После этапа (ж), по необходимости, наносят на готовые вагинальные суппозитории маркировку (включая, без ограничения, логотип компании-производителя, дозировку, номер серии и дату окончания срока годности суппозиториев), а затем последовательно фасуют их вначале в первичную, а затем - во вторичную упаковку.
[36]Благодаря предложенному способу изготовления вагинального суппозитория, обеспечивается простая, экономичная и эффективная технология способа изготовления вагинальных суппозиториев с тетраборатом натрия, при этом указанный способ изготовления обеспечивает стабильность суппозиториев при их изготовлении и последующем хранении.
[37]Предпочтительные варианты осуществления изобретения
[38]Согласно предпочтительным (неограничивающим) вариантам осуществления изобретения, инфекционно-воспалительные заболевания вульвы или влагалища представляют собой инфекционно-воспалительные заболевания вульвы или влагалища, вызванные избыточным ростом грибов Candida. Более предпочтительно (без ограничения), инфекционно-воспалительные заболевания вульвы или влагалища представляют собой инфекционно-воспалительные заболевания вульвы или влагалища, вызванные избыточным ростом одного или нескольких из следующих видов Candida: Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicans, Candida pseudotropicans, Candida krusei, Candida parakrusei, Candida parapsilosis и Candida guillermondi. Предпочтительно (без ограничения), заболевание может представлять собой вагинальный или вульвовагинальный кандидоз, вызванный избыточным ростом одного или нескольких из вышеуказанных видов Candida.
[39]Согласно предпочтительным (неограничивающим) вариантам осуществления изобретения, в качестве основы - смеси триглицеридов, диглицеридов и моноглицеридов насыщенных среднецепочечных (С16-С18) жирных кислот с гидроксильным числом, составляющим от 40 до 50 мг КОН/г, - используют Witepsol W. Согласно наиболее предпочтительным (неограничивающим) воплощениям изобретения, в качестве основы используют Witepsol W35.
[40]Предпочтительно, но без ограничения указанными предпочтительными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат от 0,25 г до 0,55 г активного компонента на 1 г массы суппозитория. Наиболее предпочтительно, однако также без ограничения указанными наиболее предпочтительными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат 0,268 г или 0,536 г активного компонента на 1 г массы суппозитория.
[41]Также предпочтительно, но без ограничения указанными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат от 0,005 г до 0,025 г моноглицеридов дистиллированных на 1 г массы суппозитория. В более предпочтительных воплощениях изобретения, однако без ограничения указанными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат от 0,01 г до 0,015 г моноглицеридов дистиллированных на 1 г массы суппозитория. Наиболее предпочтительно, но без ограничения указанными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат 0,01 г, или 0,0125 г, или 0,015 г моноглицеридов дистиллированных на 1 г массы суппозитория.
[42]Также в предпочтительных воплощениях изобретения, однако без ограничения указанными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат от 0,01 г до 0,06 г полиоксиэтилен (20) сорбитана моноолеата (Tween 80) на 1 г массы суппозитория. В более предпочтительных воплощениях изобретения, однако без ограничения указанными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат от 0,01 г до 0,04 г полиоксиэтилен (20) сорбитана моноолеата на 1 г массы суппозитория. Наиболее предпочтительно, но без ограничения указанными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат 0,025 г полиоксиэтилен (20) сорбитана моноолеата на 1 г массы суппозитория.
[43]Наконец, в предпочтительных воплощениях изобретения, однако без ограничения указанными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат от 0,40 до 0,70 г основы на 1 г массы суппозитория. В более предпочтительных воплощениях изобретения, однако без ограничения указанными более предпочтительными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат от 0,424 г до 0,697 г основы на 1 г массы суппозитория. Наиболее предпочтительно, но без ограничения указанными воплощениями, вагинальные суппозитории согласно изобретению содержат 0,424 г или 0,697 г основы на 1 г массы суппозитория.
[44]Ниже приводятся примеры осуществления настоящего изобретения, предназначенные лишь для иллюстрации изобретения, но не для ограничения объема притязаний.
[46]Приготавливали 2,68 кг 40% раствора тетрабората натрия в глицерине, предварительно нагретом до температуры +50-60°С, с последующим непрерывным перемешиванием вплоть до получения прозрачного раствора. Полученный раствор отфильтровывали в емкость. Навески витепсола W35 (2,12 кг) и моноглицеридов дистиллированных (0,075 кг) помещали в реактор, затем, установив температурный режим (+76-77°С), расплавляли их при непрерывном перемешивании. Полученный расплав отфильтровывали в емкость (емкость II) и переносили в реактор, затем добавляли к полученному фильтрату навеску полисорбата 80 (0,125 кг) при непрерывном перемешивании на протяжении 15 минут. Полученную смесь охлаждали до температуры +57°С, затем добавляли к данной охлажденной смеси полученный 40% раствор тетрабората натрия в глицерине, непрерывно перемешивали в течение 1 часа при температуре +57°С, получая при этом 5 кг однородной суппозиторной массы. Полученную однородную суппозиторную массу охлаждали до температуры +43°С при непрерывном перемешивании, затем выливали в суппозиторные формы для получения отдельных вагинальных суппозиториев, и оставляли остывать вплоть до достижения комнатной температуры, что приводило к затвердеванию суппозиторной массы.
[47]На полученные таким образом вагинальные суппозитории по изобретению (1786 шт.) наносили маркировку, указывая логотип производителя и дозировку, и затем последовательно расфасовывали указанные вагинальные суппозитории вначале в первичную упаковку (блистеры), а затем - во вторичную упаковку.
[49]Повторяли все действия аналогично примеру 1, используя при этом 1,34 кг 40% раствора тетрабората натрия в глицерине, 3,485 кг витепсола W35, 0,125 кг полисорбата 80 и 0,05 кг моноглицеридов дистиллированных, получая вагинальные суппозитории по изобретению (1786 шт.).
[50]Наносили на полученные вагинальные суппозитории маркировку, указывая логотип производителя и дозировку, и затем последовательно расфасовывали указанные вагинальные суппозитории вначале в первичную упаковку (блистеры), а затем - во вторичную упаковку.
[52]Повторяли все действия аналогично примерам 1 и 2, используя при этом 2,68 кг 40% раствора тетрабората натрия в глицерине, 2,133 витепсола W35, 0,125 кг полисорбата 80 и 0,063 кг моноглицеридов дистиллированных, получая вагинальные суппозитории по изобретению (1786 шт.).
[53]Наносили на полученные вагинальные суппозитории маркировку, указывая логотип производителя и дозировку, и затем последовательно расфасовывали указанные вагинальные суппозитории вначале в первичную упаковку (блистеры), а затем - во вторичную упаковку.
[55]Исследовали внешний вид, органолептические (запах) и физико-химические свойства суппозиториев, полученных согласно примерам 1-3, включая консистенцию суппозитория, отсутствие или наличие размягчения суппозиториев при комнатной температуре, отсутствие или наличие подпотевания поверхности суппозиториев, а также средний вес суппозиториев (норма - 2,66-2,94 г/суппозиторий), температуру плавления суппозиториев (норма - не более +37°С) и время полной деформации суппозиториев (норма - не более 15 минут). Данные представлены ниже в таблице 1 и на фигуре 1 (панель А - суппозитории согласно примеру 2, панель Б - суппозитории согласно примеру 1, панель В - суппозитории согласно примеру 3).
[56]Таблица 1. Результаты исследования внешнего вида и физико-химических свойств суппозиториев
[57] | Состав по примеру 1 | Состав по примеру 2 | Состав по примеру 3 |
| Внешний вид суппозиториев | Суппозитории белого цвета со слегка желтоватым оттенком, без запаха, гигроскопичные, торпедообразной формы. Наблюдается незначительное размягчение поверхностного слоя суппозиториев и подпотевание поверхности суппозиториев. |
| Время полной деформации, минут | 8-9 | 8-9 | 9-10 |
| Температура плавления, °С | 37 | 36 | 37 |
| Средний вес, г | 2,804 | 2,676 | 2,723 |
[58]Таким образом, составы вагинальных суппозиториев по изобретению, полученные согласно примерам 1-3, соответствовали требованиям, предъявляемым, согласно ОФС.1.4.1.0013.15 "Суппозитории" Государственной фармакопеи РФ XIII издания к лекарственной форме "суппозитории вагинальные" в отношении внешнего вида и остальных показателей качества суппозиториев, включая вес суппозиториев, а также температуру плавления и время полной деформации суппозиториев.
[60]Исследовали согласно п.3.3 ОФС.1.2.4.0002.15 "Микробиологическая чистота" Государственной Фармакопеи РФ XIII издания микробиологическую чистоту суппозиториев, полученных согласно примеру 1, осуществляя последовательные разведения (1:10, 1:50, 1:100, 1:500 и 1:1000) суппозиториев согласно примеру 1 в буферном растворе, содержащем 5% полисорбата 80, внося по 1,0 мл каждого разведения испытуемого препарата в 6 чашек Петри, причем в 2 чашки Петри добавляли 0,2 мл взвеси Bacillus cereus, штамм АТСС 10702 (далее также указывается как B. cereus), в 2 чашки Петри - 0,2 мл взвеси Candida albicans, штамм АТСС 10231, и еще в 2 чашки Петри - 0,2 мл взвеси Aspergillus brasiliensis, штамм АТСС 9642 (далее также указывается как Asp. brasiliensis). Чашки с Bacillus cereus заливали 10-15 мл расплавленного и охлажденного соево-казеинового агара, чашки с культурами Candida albicans и Aspergillus brasiliensis - тем же количеством агара Сабуро. Одновременно в пробирки, наполненные 10 мл жидкой питательной среды - бульона Мосселя или соево-казеинового бульона, в зависимости от потребностей соответствующего микроорганизма, - вносили по отдельности по 1,0 мл взвеси Pseudomonas aeruginosa, штамм АТСС 9027 (далее также указывается как Ps. aeruginosa), и Staphylococcus aureus, штамм АТСС 6538-Р (далее также указывается как St. aureus). В контрольные чашки и пробирки вместо разведений препарата вносили такое же количество растворителя. Посевы инкубировали в стандартных условиях в течение 48 часов для бактерий (Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus) и в течение 5 суток - для грибов (Aspergillus brasiliensis и Candida albicans). (Все указанные микроорганизмы в совокупности далее указываются как "тест-микроорганизмы" или просто "микроорганизмы".)
[61]После окончания времени инкубации просматривали посевы, отмечая появление типичного роста тест-микроорганизмов в контрольных чашках и пробирках, не содержащих препарата, и испытуемых (с различными разведениями препарата). Наличие в испытуемых чашках и пробирках роста тест микроорганизмов, аналогичного контрольным, обозначают знáком «+», отсутствие роста - знáком «-», незначительный рост - знáком «-». В случае, если на средах с препаратом наблюдали уменьшение количества колоний на чашках или отсутствие роста тест-микроорганизмов, делали вывод о наличии у препарата антимикробного действия.
[62]Для количественного определения аэробных тест-микроорганизмов использовали чашечный агаровый метод (модифицированный глубинный метод). Отбор проб осуществляли из исследуемой серии суппозиториев из 5 разных блистеров (в каждом по 5 суппозиториев). Образец (10 г) помещали в стерильную колбу, содержащую 100 мл буферного раствора и стерильные стеклянные бусы диаметром 5-6 мм. Смесь нагревали на водяной бане до температуры не выше 40°С и энергично встряхивали до получения гомогенной эмульсии, а затем отбирали из этой эмульсии 1 мл, вносили в стерильную чашку Петри, добавляли 7-10 мл расплавленной и охлажденной питательной среды и быстро перемешивали вращательными движениями. После застывания агара чашки переворачивали и инкубировали.
[63]Подсчет колоний тест-микроорганизмов осуществляли, во-первых, спустя 48-72 часа инкубирования и, во-вторых, спустя 5 суток инкубирования. Число микроорганизмов в 1 г или 1 мл среды подсчитывали по формуле:
[64]
,
[65]где N - число микроорганизмов в 1 г или 1 мл среды,
[66]с - количество колоний во всех чашках Петри,
[67]n - число чашек Петри,
[68]d - коэффициент разведения образца,
[69]10 - коэффициент пересчета при проведении высева на чашку Петри в объеме 0,1 мл.
[70]Полученный результат, измеряемый в КОЕ (колониеобразующих единицах), округляли до 2 значащих цифр. Результаты для составов по примерам 1, 2 и 3 представлены в таблицах 2, 3 и 4 соответственно.
[71]Таблица 2. Результат определения антимикробного действия разведений состава суппозиториев по примеру 1.
[72]| Разведение препарата | Тест-микроорганизмы |
| B. cereus ATCC 10702 | St. aureus ATCC 6538-P | Ps. aeruginosa ATCC 9027 | C. albicans ATCC 10231 | Asp. brasiliensis ATCC 9642 |
| 1:10 | - | - | - | - | - |
| 1:50 | - | ± | - | - | - |
| 1:80 | ± | ± | ± | ± | ± |
| 1:100 | ± | ± | ± | ± | ± |
| Контроль роста микроорганизма | + | + | + | + | + |
[73]Таблица 3. Результат определения антимикробного действия разведений состава суппозиториев по примеру 2.
[74]| Разведение препарата | Тест-микроорганизмы |
| B. cereus ATCC 10702 | St. aureus ATCC 6538-P | Ps. aeruginosa ATCC 9027 | C. albicans ATCC 10231 | Asp. brasiliensis ATCC 9642 |
| 1:10 | - | - | - | - | - |
| 1:50 | - | - | ± | - | - |
| 1:80 | ± | ± | ± | ± | ± |
| 1:100 | ± | ± | ± | ± | ± |
| Контроль роста микроорганизма | + | + | + | + | + |
[75]Таблица 4. Результат определения антимикробного действия разведений состава суппозиториев по примеру 3.
[76]| Разведение препарата | Тест-микроорганизмы |
| B. cereus ATCC 10702 | St. aureus ATCC 6538-P | Ps. aeruginosa ATCC 9027 | C. albicans ATCC 10231 | Asp. brasiliensis ATCC 9642 |
| 1:10 | - | - | - | - | - |
| 1:50 | - | ± | - | - | - |
| 1:80 | ± | ± | ± | ± | ± |
| 1:100 | ± | ± | ± | ± | ± |
| Контроль роста микроорганизма | + | + | + | + | + |
[77]Таким образом, полученные в рамках настоящего изобретения вагинальные суппозитории с тетраборатом натрия соответствуют требованиям ОФС 1.4.1.0013.15 "Суппозитории", расширяют собой арсенал средств для местного применения, пригодных для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний вульвы и влагалища, включая, без ограничения, вагинальные кандидозы, обладают микробиологической стабильностью и обеспечивают при их медицинском применении равномерное распределение активного вещества по слизистой и высокую биодоступность активного вещества суппозиториев.
