[1]Изобретение относится к устройствам для исследования характеристик крови и ее компонентов, в частности их свертываемости, и может быть использовано в биологии и медицине для исследования параметров свертывания крови и ее компонентов как животных, так и человека; в клинической диагностике заболеваний, а также при проведении экспериментальных исследованиях крови и ее составных частей.
[2]Исследования свертывания крови представляют практический интерес, поскольку не только позволяют диагностировать отдельные заболевания, но и оценивать активность препаратов, влияющих на параметры свертывания крови.
[3]Известны кюветы для исследования динамики свертывания плазмы крови в пространстве. Это, как правило, небольшие прозрачные пластмассовые контейнеры, выполненные в виде плоской чашечки с верхней крышкой. Известно, что при исследовании пространственного свертывания плазмы крови и ее компонентов в пробе должны отсутствовать любые, даже очень слабые потоки, включая и потоки, возникающие за счет температурной конвекции из-за температурных градиентов, возникающих в пробе. Кюветы для таких исследований выполняются с крышкой, обеспечивающей герметичное закрытие чашечки с пробой плазмы, с последующим погружением этой закрытой чашечки в прозрачную термостатируемую жидкость.
[4]Наиболее близкой к предлагаемому устройству является кювета, выполненная в виде разовой пластмассовой чашечки Петри (патент на ПМ № 64705), снабженной специальным кожухом для ее герметичного закрывания. Такая конструкция позволяет поместить в чашечку исследуемую плазму крови или ее компоненты, поместить в эту пробу активатор свертывания, например маленький стеклянный шарик (вокруг которого и будет образовываться фибриновый тромб), поместить чашечку в специальный кожух, герметично закрыть ее, зафиксировать и опустить всю эту конструкцию в камеру водяного термостата и только после этого начать исследование процесса роста тромба во времени и пространстве.
[5]Описанные кюветы обладают целым рядом недостатков.
[6]Тромб растет вокруг шарика на дне горизонтально расположенной чашечки. Такое (горизонтальное) расположение чашечки, через дно которой ведется съемка растущего тромба, не исключает появление в жидкости термостата под ее дном пузырьков воздуха, что искажает результаты исследования.
[7]Известная конструкция кюветы позволяет поместить активатор свертывания только до начала регистрации процесса свертывания, а не после того, как плазма в чашечке прогреется равномерно и конвекционные потоки за счет градиента температур прекратятся. Это тоже приводит к искажению картины пространственного свертывания.
[8]В известной кювете возможно одновременно проводить эксперимент лишь с одной пробой плазмы. Для проведения следующего эксперимента берется новая чашечка и вся процедура повторяется, что снижает производительность подобных исследований.
[9]В качестве активатора свертывания в такой конструкции кюветы используется стеклянный шарик, так как стекло является высокотромбогенным материалом, но величина этой тромбогенности (степень инициации плазмы к свертыванию) может варьироваться в широких пределах, что снижает воспроизводимость исследований.
[10]Технической задачей настоящего изобретения является повышение точности и достоверности пространственного определения свертываемости крови или ее компонентов.
[11]Технический результат, достигаемый при использовании настоящего изобретения, заключается в предотвращении возникновения конвективных потоков и попадания посторонних частиц в кювету, что искажает реальную картину роста тромба.
[12]Вышеуказанная техническая задача решается посредством выполнения кюветы для исследования свертывания крови и ее компонентов в виде не менее одной секции для помещения исследуемых образцов, представляющей собой вертикальную тонкостенную емкость с продольным каналом, в котором размещен активатор свертывания.
[13]Предпочтительно выполнение сечения вертикальной тонкостенной емкости прямоугольным.
[14]Другим вариантом является выполнение сечения вертикальной тонкостенной емкости круглым.
[15]Предпочтительно выполнять активатор свертывания в виде продольной вставки с нанесенным на ее торцевую поверхность тромбогенным веществом.
[16]Предпочтительно использовать в качестве тромбогенного вещества тромбопластин, иммобилизованный на торцевую поверхность вставки активатора.
[17]Одним из вариантов выполнения кюветы является вариант, при котором секции для помещения исследуемых образцов установлены в ряд, а активаторы свертывания представляют собой гребенку, каждый из выступов которой содержит на торце тромбогенное вещество и опущен в соответствующую емкость.
[18]При этом в качестве тромбогенного вещества используют тромбопластин, иммобилизованный на торце выступов гребенки.
[19]Положительный эффект предлагаемого изобретения достигается тем, что кювета выполнена в виде вертикальной, тонкостенной емкости с каналом, т.е. узкой и высокой. Это не дает образующимся пузырькам воздуха задерживаться в поле зрения и искажать картину свертывания, так как они быстро поднимаются в образце исследования вверх.
[20]Кроме того, такая конструкция кюветы позволяет погрузить ее большую часть в водяной термостат, который необходим для поддержания температуры в кювете на заданном уровне. При этом рабочая часть кюветы (там, где находится образец плазмы) будет полностью находиться в термостатируемой жидкости, а верхний открытый край кюветы будет находиться за пределами водяного термостата. Это позволяет вводить в плазму активатор свертывания с нанесенным на его торец тромбогенным веществом уже после того, как все конвекционные потоки в прогревающейся плазме полностью прекратятся, что повышает качество проведения эксперимента.
[21]Предлагаемую кювету можно выполнить многосекционной. Это дает возможность в каждую из секций поместить свой образец плазмы и проводить несколько экспериментов одновременно, что позволяет не только поднять производительность всего метода, но и повысить сравнительную достоверность результатов исследования, так как все эксперименты выполняются одновременно и в одних и тех же условиях.
[22]Активатор свертывания в такой конструкции выполняют в виде тонкой пленки или слоя специального тромбогенного вещества, нанесенного на торцы гребней плоской гребенки, Применение для инициализации тромба определенного вещества, например иммобилизованного тромбопластина, в строго заданной концентрации повышает воспроизводимость экспериментов. А сама конструкция кюветы и вставки активатора дает возможность одновременно запускать процесс свертывания во всех исследуемых образцах за счет одномоментного контакта тромбогенного вещества сразу со всеми образцами плазмы, помещенной в разные секции кюветы, что также повышает воспроизводимость исследований.
[23]Предлагаемое устройство представлено на чертежах, где на фиг.1 показано устройство для исследования динамики свертывания крови и ее компонентов в пространстве с предлагаемой односекционной кюветой, на фиг.2 - вид сбоку, а на фиг.3 - устройство для исследования динамики свертывания крови и ее компонентов в пространстве с предлагаемой многосекционной кюветой, на фиг.4 - вид сбоку.
[24]На фиг.1 и 2 изображен электронный водяной термостат 1 устройства для исследования динамики свертывания крови и ее компонентов в пространстве, заполненный прозрачной жидкостью 2, в которую помещена предлагаемая односекционная кювета 3. Испытуемый образец плазмы крови 4 расположен в нижней части кюветы 3 таким образом, что при вдвижении в ее канал 5 вставки активатора 6 до ее упора 9 тромбогенное вещество 7, нанесенное на торец вставки, оказывается в контакте с поверхностью испытуемой плазмы.
[25]На фиг.3 и 4 изображен один из вариантов предлагаемой многосекционной кюветы, в которой имеется несколько каналов 5, а в нижней части активатора 6 сформирована гребенка 8, каждый из гребней которой с нанесенным на их торцы тромбогенным веществом 7 при введении вставки до упора 9 попадает в соответствующий ему канал кюветы 3 и контактирует своим торцом лишь с конкретным образцом плазмы крови, помещенным в полости каналов 5.
[26]Устройство работает следующим образом.
[27]За счет работы электронного водяного термостата 1 температура прозрачной жидкости 2 в нем поддерживается на заданном уровне, и жидкость равномерно обогревает кювету 3, в которую помещают исследуемый образец, например тестируемую плазму крови 4. Поскольку кювета 3 имеет для размещения плазмы длинный и узкий канал 5, а площадь поверхности раздела плазма-воздух после введения в кювету вставки активатора 6 с нанесенным на ее торец тромбогенным веществом 7 минимальна, то и попадание в плазму посторонних частиц из воздуха также минимально.
[28]В случае использования многосекционной кюветы устройство работает следующим образом. В каждый из каналов 5 многосекционной кюветы 3 (фиг.2) дозированно помещают исследуемый образец плазмы 4, которая заполняет лишь нижнюю часть полости отсеков кюветы. При этом в каждый из отсеков можно помещать разные образцы плазмы. Кювета устанавливается в соответствующее ей гнездо устройства для исследования пространственного свертывания плазмы крови, в состав которого входит и термостат 1. При этом нижняя часть кюветы - там, где находятся образцы плазмы, оказывается полностью погруженной в термостатируемую жидкость 2 термостата. Когда температура жидкости термостата и температура образцов плазмы в кювете уравняются, а связанные с этим конвекционные потоки плазмы прекратятся, в кювету медленно (чтобы снова не создать движения плазмы) вдвигают вставку активатора 6, нижняя часть которой выполнена в форме гребенки 8, на торцах гребней которой предварительно нанесено тромбогенное вещество 7. После опускания вставки до упора 9 нанесенное на торцы гребней гребенки 8 тромбогенное вещество касается верхнего слоя всех образцов плазм, помещенных в каналах отсеков 5 кюветы 3, в результате чего процесс тромбообразования начинается одновременно во всех испытуемых образцах, что непрерывно регистрируется заранее включенной CCD камерой, входящей в состав устройства для исследования пространственного свертывания плазмы крови.
