Способ определения активности ферментов в сыворотке крови

Изобретение относится к медидане, а имен но к ферментной ди гностике заболеваний. Известен способ определения активности ферментов в сыворотке крови путем разведения пробы, инкубирования ее с ферментным субстратом, внесения индикатора с последующим (|ютометрическим измерением полученного окрашенного комплекса t. Однако известный способ не обеспечивает высокой точности. Цель изобретения - повышеине точности способа. Цель достигается тем, что при осуществлении способа определения активности ферменто в сыворотке крови путем разведения пробы, инкубирования ее с ферментным субстратом, внесения индикатора с последующим фотометрическим измерением полученного окрашенного комплекса отличительной особенностью является то, что пробу разводят 2-5 М растворо хлористого натрия или 0,2-0,5%-ным растворо желатины. Пример 1. Получив очень высокие экстинкшш при определении активности трансаминаз в сыворотке крови, повторяют определение с разбавленной в несколько раз сывороткой . Сыворотку разводят в 10 раз 0,2%- .ным раствором желатина и дальнейшую рабЬ« ту проводят так же как и при полной пробе по методу Reitman S. и Frankel S. В пробирке: контрольную , со стандартным раствором, и опытную напивают по 0,5 мл субстратного раствора, содержащего для ,определения аланин-аминотрансферазы 1 мкМ а-кетоглутаровой кнслоты и 50 мкМ L-аланина , для определения аспартат-аминотрансферазы1 мкМ а-катоглутаровой кислоты и 50 мкМ L-аспарагиновой кнслоты (рН 7,4) и нагревают 15 мин при 37С. После прогревания в контрольную пробу приливают 0,1 мл дистиллированной воды, в пробирку со стандартом 0,1 мл раствора стандарта (0,20 мкМ пирувата натрия при определении аланин-аминотрансферазы или 0,20 мкМ шавелево : уксусной кислоты при определении аспартат-амипотрансферазы ), в опытные пробирки добавляют по О,Г мл разведенной 1:10 исслсдуемой сыворотки. Пробы инкубируют при 60 мин. После инкубации во все пробы прибавляют по 0,5 мл раствора динитрофенилгидра: ина (19,8 мг 2,4-динитрофенилп1Дразина в 100 мл 1 н, HCt), выдерживают 15 мин, при комнатной температуре и добавляют 5,0 0,4 н. раствора NaOH. Через 20 мин колориметрируют против контроля в 1,0 см кюветах при сине-зеленом светофильтре (). При расчете активности трансаминаз по- , лученную активность умножают на степень разведения сыворотки и получают линейную зависимость активности фермента от разведени Пример 2. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сывороткой . Сыворотку разводят в 10-20 раз 0,4%-ным раствором желатина. Определение активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1. Пример 3. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сывороткой . Сыворотку разводят в 10-20 раз 0 %-ным раствором желатина. Определение . активности и ее расчет проводят, как описан в примере 1. Пример 4. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови по вторяют определение с разбавленной сывороткой . Сьторотку разводят в 10-20 раз 2М раствором хлористого натрия. Определение активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1. Пример 5. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови повторяют определение с разбавленной сывороткой . Сыворотку разводят в 10-20 раз 4М 4 pacTfeopOM хлористого натрия. Определение активности и ее расчет проводят, как описано в примере 1. . Пример 6. При получении высокой активности трансаминаз в сыворотке крови Повторяют определение с -разбавленной сывороткой . Сыворотку разводят в 10-20 раз 5М раствором хлористого натрия. Определение активности и ее расчет проводят, как описано примере 1. Предлагаемый способ позволяет исключить йёпропорциональное возрастание удельной активности ферментов при разведении сыворотки ., т. а. делает возможным определить истинную активность ферментов, когда необходимо разведение сыворотки из-за высокой активности ферментов, наблюдающейся при многих патологических процессах и превышаю.щей нормальные значения в 10-50 и более раз. Способ не требует дополнительных количеств крови изменений условий постановки опытов и дополнительных материальных затрат. Формула изобретения Способ определения активности ферментов в сыворотке крови путем разведения пробы, инкубирования ее с ферментным субстратом, внесения индикатора с последующим фотометрическим измерением полученного окрашенного комплекса, отличающ,ийся тем, что, с целью повышения точности способа, пробу разводят 2-5 М раствором хлористого натрия или 0,2-0,5%-ным раствором желатины. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Асатиани. В. С. Ферментные методы анаиза . М., Медицина, 1969, с. 574-608.

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ В СЫЮРОТКЕ КРОВИ