Способ получения эритроцитарного диагностикума чумы

Изобретение относится к медицин ской микробиологии, в частности к спо собам получения эритроцитарных диагностикумов для индикации, идентификации возбудителей чумного микроба и серологической диагностики вызываемых ими заболеваний.

Известен способ приготовления анти генного эритроцитарного диагностикума, для получения которого в качестве сенситина для эритроцитов применяют фракцию 1 Бейкера (капсульный антиген ) без предварительной ее актива ции.

Однако с помощью этого диагностикума удается идентифицировать только капсульные (типичные) штаммы чумного микроба.

Целью изобретения является получение эритроцитарного диагностикума, ко торый позволяет идентифицировать как капсульные (типичные), так и бескап

сульнью (атипичные) штаммы чумного микробз.

Эта цель достигается применением в качес1ве сенситина для эритроцитов фракции V чумного микроба.

Методика выделения фракции V и приготовления На ее основе эритроцитарного диагностикума заключается в следующем ;

Фракцию Y выделяют из бескапсульного и атоксичного варианта ЕВ при помоа (И наргс ающих концентраций анионного поверхностно-активного вещества - дезоксихолата натрия (ДОХ). После 4-кратного воздействия малых концентраций ДОХ (от 0,00ь до 0,32) на бактериальную массу и последующего удаления надосадочных жидкостей в ее остаток добавляют ДОХ до 1,285й. В надосадочную жидкость добавляют 5 объемов ацетона, осадок диализуют и лиофильно высушивают. Полученную таким

образом фракцию V используют в качестве сенситина для эритроцитов.

Лля получения диагностикума берут формалинизированные эритроциты барана , которые обрабатывают раствором та Нина в разведении 1:l600QO в течение 13 мин при 37°С„ Затем эритроциты осаждают путем центрифугирования в течение 3 мин при 2UUO об/мин. Осадок эритроцитов трижды отмывают 20-30кратными количествами физиологическо го раствора рН-°7, и доводят их до 2, концентрации этим же раствором, Необходимое количество фракции V разводят физиологическим раствором :До концентрации 1000 мкг/мл и добавляют ДОХ с таким расчетом, чтобы его конечная концентрация составляла %, После 13-20 мин контакта при комнат ной температуре смесь фракции V и ДОХ добавляют в эритроциты из расчета 10 мкг на 1 мл 2,3-2 танизированнь1х эритроцитов. После встряхивания роЦиты помещают в холодильник при .: на Ib-lii ч. За 2 ч до конца сенсио - .лисации ь эритроциты добавляют формалин до //. Затем эритроциты осаж;г .0Т iT,T;:- :(( V , -;;p);ai ;|,лг; „ ;саДОК

трижды промывают большими количествами нормальной кроличьей сыворотки, разведенной 1:230 физиологическим раствором. Осадок эритроцитов доводят до 10 концентрации сахарозо-желатозной средой (З желатозы + /,j% сахэ розы на дистиллированной воде), разливают по мл в ампулы или пенициллиновые флаконы и подвергают лиофильному высушиванию в любом вакуум-сушильном аппарате. Остаточная влажность не должна превышать более 3%с Ампулы и флаконы с высушенными эритроцитами

с запаивают или герметически закупорива ют. Приготовленный таким образом диагностикум можно хрмчить при комнатной температуре.

Предлагаемый способ обес 1ечивает

0 идентификацию как каг;сульныл (типимных ) , так и бескапсульных (агипичных ) атоксичных штаммов чумного микроба . Это позволяет с большой достоверностью применять его в практике

5 эпизоотологического обследования природных очагов чумы, а также для и.ндикации и идентификации типичных и де фектных в антигенной отношении штам

: Ч- МНОГО M.iKO-/Ji;