[1]Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской промышленности, и
касается способа разделения гемоглобина крови на гем и глобин.
[2]Цель изобретения - повышение концентрации тема и глобина.
[3]Способ осуществляется путем суспен- дирования клеток эритроцитов, отделенных
от плазмы, в растворе кислоты, где гемоглобин диссоциируют на гем и глобин, из этого
раствора гем осаждают водным раствором карбоксиметиллцеллюлозы, а глобин остается в растворе.
[4]Пример.100 г фракции эритроцитов, отделенных от плазмы, содержащей гемоглобин
, причем общее содержание белка составляет 350 мг/г веса, разбавляют в 200 г
воды и рН раствора доводят до 1,5 путем добавления 1,0 соляной кислоты. К данному
раствору прибавляют 1,5%-ный раствор карбоксиметилцеллюлозы в воде в количестве
, дающем массовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы к белку, равное
[5]около 1:10. Прибавление карбоксиметилцеллюлозы повышает величину рН, и путем
прибавления гидроокиси натрия рН доводят до 2,4 Центрифугирование с силой, соответствующей
8000 д, в течение 15 мин приводит к получению 70% общего белка в
растворе, который имеет концентрацию белка 4,0%. Используя силу центрифугирования
, соответствующую 10000 д. в течение 30 мин выход белка можно повысить до
85%. При использовании силы центрифугирования ЮОООд содержание железа осадка
составляет 1,8% и содержание белка осадка составляет 75%.
[6]Первоначальное количество белка и железа 35 и 0,158 г соответственно. На сухой
основе общее количество белка и железа в теме состаляет 5,25 и 0,126 г соответственно
. Общее количеоство карбоксиметилцеллюлозы составляет 3,5 г главным образом в фракции тема.
[7]П р и м е р 2. 100 г эритроцитов (300 мг белка/г), отделенных от плазмы, разбавлясо
[15]ют 500 г воды, рН раствора доводят до 1,4 с
помощью 1М водного раствора соляной кислоты и добавляют 2,010 г 0,2%-ного водного
раствора карбоксимети л целлюлозы (класс замещения по крайней мере 1,1, весовое соотношение
карбоксиметилцеллюлозы к белку составляет около 1:75), рН доводят до 2,4 и
смеси позволяют отстояться в течение 15 мин. Осажденный комплекс гем-карбоксиме-
тилцеллюлоза отделяют от белкового раствора центрифугированием (2x1 ч, 15000д).
Результаты опытов приведены в табл.1 и 2.
[16]Первоначальное количество белка и железа
составляет 30 и 0,135 соответственно. Количество белка и железа после второго
центрифугирования в фракции гема составляет 1,5 и 0,110 г соответственно.
[17]Пример 3.100 г фракции эритроцитов, отделенной от плазмы, причем общее содержание
белка составляет 360 мг/r мокрой массы, разбавляют 200 г воды и рН раствора
доводят до 1,8 путем добавления 1 М соляной кислоты. К этому раствору прибавляют
1%-ный раствор карбоксиметилцеллюлозы в воде, что дает весовое соотношение карбоксиметилцеллюлозы
к белку, равное 1:20. После прибавления раствора карбоксиметилцеллюлозы
рН доводят до 3,0 прибавлением 1М гидроокиси натрия. После центрифугирования с силой ЮОООд в течение
30 мин получают 70% общего белка в растворе, который имеет содержание белка
4,7%. Содержание железа и белка осадка составляет 0,8 и 84% соответственно.
[18]Первоначальное количество белка и железа составляет 36 и 0,158 г соответственно
. Количество белка и железа в фракции гема на сухой основе составляет 10,8 и 0.123 г соответственно.
[19]Пример 4. ЮС г кровяных телец (300 мг белка/г), отделенных от плазмы, разбавляют
500 г воды. рН раствора доводят с помощью 1М водного раствора соляной кислоты
до 1,4 и добавляют 2010 г 0,02%-ного водного раствора КМЦ. Смесь оставляют
стоять в течение 15 мин и осажденный гем- КМЦ-комплекс отделяют от белкового раствор
центрифугированием.
[20]Пример 5. 100 г фракции гемоцитов,
отделенной от плазмы и содержащей гемоглобин , общее содержание белка в котором
составляет 350 мг/г влажного веса, разбавляют 200 г воды и показатель рН этого раствора
доводят до 1,4-1,5 посредством
[21]добавления 1,0 М раствора хлористоводородной
кислоты, к этому раствору добавляют 1,5 М раствор карбоксиметилцеллюлозы
(CMC) в воде в количестве, позволяющем
[22]достичь весового соотношения карбоксиметилцеллюлозы
и белка, равное примерно 1:10. Добавление раствора карбоксиметилцеллюлозы
увеличиваеет значение рН, и в результате добавления хлориетоводородной
кислоты или гидроокиси натрия гарантируется сохрнность показателя рН в
интервале от 2,4 до 3,0. Обрзовавшийся осадок отделяют от раствора, центрифугируют
с приложением силы, соответствующей
[23]8000 д, в течение 15 мин. 70% общего содержания
белка получают в растворе, концентрация белка в котором равнялась 4,0% с
использованием центробежной силы, соответствующей 10000 g в течение 30 мин, при
[24]этом выход белка можно увеличить до 85. Осадок можно использовать в качестве лре-
парата гема либо гем можно выделить из этого осадка. При использовании центробежной
силы, равной 10000 д, содержание
[25]железа в осадке равнялось 1,8 %, а содержание
белка 75 %ч
[26]Пример 6. 100 г гемоглобинсодержа-
щей фракции эритроцитов, (350 мг белка/г) отделенной от плазмы, разбавляют с помощью
200 г воды и рН полученного раствора доводят соляной кислотой до столь
низкого значения, что рН этого раствора при добавлении 230 г 1,5%-водного раствора карбоксиметилцеллюлозы
оставался ниже 3.
[27]Полученный осадок отделяют от раствора
центрифугированием (8000 д, 15 мин). Перед центрифугированием рН должен быть
в интервале 2,2 - 3,0, чтобы обеспечить осаждение карбоксиметил целлюлозой,
[28]По известному способу окончательная концентрация белка равна 0,038%, выход
67%, раствор гема получен разбавлением и требует дополнительной концентрации.
[30]Способ разделения гемоглобина крови
на гем и глобин путем диссоциации гемоглобина эритроцитов и разделения гема и глобина
, отличающийся тем, что, с целью
[31]повышения концентрации гема и глобина,
диссоциацию проводят в интервале рН 1,4- 3,0, а разделение - осаждением водным
раствором карбоксиметилцеллюлозы при соотношении осадителя к белку 1:75 - 1:10.
[33]Та-б л и ц а 2
[34]
