[1]Изобретение относится к химии
полимеров, а именно к политрипептидам , обладающим энантовой селективностью
в реакциях гидролиза п -нитрофениловых эфиров карбобензокси-Dи I, -аланина и используемых в качест
ве катализаторов для разделения рацемических аминокислот на оптичес кие антиподы.
Целью Изобретения является повышение энантовой селективности полипептидов .
Изобретение иллюстрируется примерами , в которых использованы следующие сокращения:
t-Boc - третбутилоксикарбонил/ 0-NPS - ортонитрофеннпсульфенил ОТср - 2,4,5-трихлорфениловьш
эфир, Bzl - бензил{ D1-IF - диметйпформамид;
DCC - дициклогексилкарбодиимид; EtjN - триэтиламин; P-NFA - паранитрофенилацетат{
EtoAC - этилацетат Z -1сарбобензоксИ} Ala-L - аламин
Ser-L - серии , His-L - гистидин; Tyr-L - тирозин;
GIn-L - глута,миновая кислота; ONP - паранитрофениловый .эфир; С - концентрация;
S - концентрация субстрата; Е - концентрация политрипептида Tfa - трифторуксусная кислота;
К - константа первого порядка скорости расщепления субстрата; Кл - условная константа второго
порядка скорости расщепления субстр та. Пример.
Boc-Tyr(OBzI)-GIu(JBrI)OTcp (I К охлажденному до раствору 2,5 г t-Boc-Tyr(OBzI)-OH и 3,6 г
DCC в 20 мл тетрагидрофурана при перемешивании добавляют 3 г HCI GIu(BrL)-OTcp и 0,66 мл EtjN.
При этой температуре смесь перемети вают 2 ч, затем оставляют на 16 ч
при комнатной температуре, выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат
упаривают в вакууме досуха. .Остаток растворяют в EtoAC и промывают5%-нь1
раствором лимонной кислоты, водой, 0,5%-ным раствором соды,водой. Сушат над Naj SO .Фильтрат упа)иваю
1 2 в вакууме досуха. Получают 4,36 г сырого продукта (I) с выходом 95%,
+ 6,94 (С 4 ЭА) RrA 0,96, 0,76. Пример 2.
Tb.H.-Ty((y8ze -oTcp (и) к раствору 4,3 г продукта (I) в 15 мл добавляют 2 мл (
1,5 экв) Tfa, энергично перемешивают в течение 40 мин при 20°С. Растворитель упаривают досуха под
вакуумом. Избыток Tfa удаляют обработкой бензолом. Остаток обрабатывают абсолютным эфиром.
Получают 4,8 г сырого продукта (II) с выходом 80%, (С 4, ЭА) RjA 0,64; R В 0,9.
Пример 3. t-Boc-AEa-Tyr(oB7ie,-Qeuiy6ze -OTcpIII) Синтезируют аналогично продукту
(I), исходя из 1 г t-Boc-AIa4)H, 1,8 г DCC, 4,1 г продукта (II),
0,673 мл EtjN. Получают 4,07 г продукта (III) -с выходом 90%. Мр - 11,1 (С 2,5 3A),RfA 0,95,
0,67. П р и м е р 4. Tfa.H-Aec«-Tyr(08ze)-G,eu(yBze)-OTcpiv)
Продукт (IV) получают аналогично продукт (II), исходя из г продукта (III), растворенного в смеси
(2:1) хлористого метилена и Tfa при перемешивании в течение 4 ч. После
соответствующей обработки получают 2,4 г продукта (IV) с выходом 78%. R.A 0,56, 0,51.
П р и м е р 5. poBi) Н -Аба -Tijr(oBzE)-Geu (у Bze)n-OH (V) 1,7 г продукта (IV) растворяют в
1,7 г DMF, добавляют 1 г экв . Хорошо перемешивая, смесь оставляют
при 20 С на 8 сут. Продукт вьщеляют обработкой смесью метанол-эфир (1:3). Вьщеленный продукт очищают
диализом против смеси вода - диоксан (1:1) и лиофильно высушивают. Получают 0,89 г полимера (V) с
мол.м. 8280. П р и м е р 6. Boc-Hi5(im8zel-5er-Gieu(j-e2e)-OTcp (VI)
Синтезируют аналогично гфодукт (I), исходя из 1,5 г t-Boc-rHis (im BzI)-Ser, 0,94 г DCC, 2,5 г
3 HCI GIu(jBzI)-OTcp и 0,64 мл EtjN
Получают 2,58 г продукта (VI) с выходом 89,2%. RjA 0,36, R,B .0,72.
Пример. Hce-Hi5{im82e)-5er-qeu(yBze)-oTcp(vii) к раствору4 г продукта (VI) в
20 мл абсолютного EtoAC добавляют 3,33 мл 3 н. HCI/EtoAC. Через 1 ч продукт осаждают сухим эфиром. Осадок
неоднократно промьшают эфиром. и высушивают под вакуумом. Получают 2,5 г продукта (VII) с выходом
6i4,1%, т.пл. 150°C, 0,13 Пример 8. poeuH-Hi5(m Bze -5er-Qeu(ijBaeVOH(VII
Синтезируют аналогично продукту .(V), исходя из 2 г HCI-His(imBzI)Ser-G u (jBzI)-OTcp, 2 мл Ш1,
0,36 мл EtjN. Получают 1,7 г полиме ра.. П р и м е .р 9.
роВиН-(Аеа-Т1)Г-Аеи)„-6н (IX) 0,5 г продукта (V) раст-воряют в
12 мл смеси диоксан-метанол-концентрированная НСК (1:1:0,25) и гидрируют над Pd чернью в течение
i2 сут при 20±2 С. После вьщеления продукт (IX) диализуют против воды
в течение 4 ч и лиофилизуют. Получают 0,28 г продукта. Этот продукт далее очищают гель- -фильтрацией на
колонке (,0 см), заполненной сефадаксом G 25, элюант вода.Фрак ционирование проводят с помощью
коллектора фракции LKB со скорост 12 мл/ч. Для определения мол. веса продукт пропускают через откалибро
;ванную маркерными белками колонку (,0 см) с сефадексом G-50, со скоростью элюиции 12 мл/ч . Мол.м.
равна 10000. Пример 10. Соединение (X) получают аналогично продукту (IX),
исходя из 0,6 г продукта N Ш/Ь смеси метанол - DNF (1:10) в течение 0514
|3 сут. Выход диализованного продукта против воды в течение 4 ч составляет 0,25 г. Мол.м. определенная
гель-фильтрацией на сефадексе G-50, равна 6500. Пример 11. Кислотный гидролиз
соединений (IX) и (X). По 2 мг очищенных политрипептидов растворяют в разных ампулах со
стократным избытком 6 н. НОВ. Запаянные в токе азота ампулы вьщерживают при 105 С в течение 18 ч.
Затем ампулы вскрывают, содержимое сушат в вакуум-эксикаторе. Остатки растворяют в дистиллированной воде
и хроматографируют на бумаге в присутствии соответствующих свидетелей . Получают следующие результаты:
RjAIa - 0,31, Туг - 0,41, GIu - 0,27, RjHis - 0,08, Ser 0 ,18, GIu - 0,26. Б качестве свидетеля
для сравнения величин R/ на полоске хроматографической бумаги
рядом с гидролизатом наносят соответствующие стандартные аминокислоты
, в результате получены следующие величины RJ.: Ala - 0,30, Туг - 0,41, GIu - 0,26, His 0,09,
Ser - 0,18. Пример 12.В кювету р объемом 0,6 мл вчосят 0,36 мл
0,1 М фосфатного буфера, рН 8,0, 0,2 мл водного раствора политрипептида с концентрацией 0,1 М (на
мономерную единицу) и по 0,04 мл раствора субстратов с концентрациями 510-з, 1-10-2 , 2. lOj, .о-2.
6«10-2, 8-10-2, 10.10-2 М. Кювету вносят в спектрофотометр и измеряют изменение оптической плотности
раствора как функцию времени. При холостом опыте раствор политрипептида
не вносят. Полученные значения констант приведены в табл. 1 ( рН 8,0, t 30°С). 1 В
табл.2 приведена зависимость энантовой селективности от мол.м. политрипептидов.
Таким образом, изобретение позволяет повысить энантову селектийность политрипептидов.
