[2]Разработка относится к области биотехнологии и медицины, а именно к созданию высокопористых полимерных частиц, используемых в регенеративной медицине, тканевой инженерии и хирургии, а также в качестве назальных или трансдермальных форм доставки лекарств или в качестве кровоостанавливающих средств.
[4]Ввиду высоких требований к используемым сегодня изделиям в регенеративной медицине и тканевой инженерии существует потребность в разработке новых материалов. Помимо биосовместимости и биорезорбируемости материалы должны обладать подходящей структурой и соответствовать механическим свойствам прилежащих тканей. Для замещения мягких тканей, плавной доставке лекарственных средств хорошо подходят природные и синтетические гидрогели, которые обеспечивают хороший контакт, способность к заполнению дефектов произвольной формы и диффузию низкомолекулярных соединений. Однако в ряде случаях низкие значения модуля упругости гидрогелей не позволяют их использовать в нативной форме. Пористые полимерные микрочастицы могут быть использованы в качестве наполнителя для гидрогелей, существенно изменяю как структуру, так и увеличивая прочность гелей, что открывает новые возможности в данной области. Кроме этого, пористые полимерные частицы могут быть использованы индивидуально, например, в качестве кровоостанавливающих средств.
[5]В патенте US 5654008 был раскрыт способ получения биодеградируемых, биосовместимых микрочастиц, включающих биодеградируемый, биосовместимый связывающий полимер и биологически активное вещество. Для растворения используют смесь двух нетоксичных растворителей, свободных от галогенизированных углеводородов. Эту смесь растворителей диспергируют в водном растворе для образования эмульсии, которую затем добавляют в водную экстракционную среду, с помощью которой контролируется скорость экстракции каждого растворителя. После чего образуются биодеградируемые, биосовместимые микрочастицы, содержащие биологически активное вещество.
[6]В патенте RU 2786452 C1 был описан способ получения микрочастиц биоразлагаемого полимера, несущих стероидное лекарственное средство, включающие стадии: 1) получения раствора стероидного лекарственного средства и биоразлагаемого полимера в массовом соотношении от 1:99 до 3:7; 2) Распыления раствора в раствор углеводорода С5-10, который поддерживают при температуре ниже точки плавления органического растворителя, с образованием микрочастиц 3) добавления микрочастиц в водный раствор соли для растворения и удаления органического растворителя; 4) обессоливание микрочастиц. Описанное изобретение обеспечивает получение микрочастиц, несущих стероидное лекарственное средство, с длительным высвобождением, которые обладают превосходной биосовместимостью, биоразлагаемостью, пористостью и механической прочностью.
[7]В патенте RU 2737742 раскрыто изобретение, относящаяся к пористым микрочастицам биоразлагаемого полимера, предназначенным в качестве наполнителя для средств используемых против морщин. Пористые микрочастицы характеризуются сферическим профилем, диаметром частиц в диапазоне от 10 до 50 мкм, порами, имеющими диаметр в диапазоне от 0,1 до 10 мкм, и коэффициентом пористости в диапазоне от 10 до 20%. В качестве порообразователя использовали тетрадакан и технику элюирования органического растворителя в водную фазу. Описан также полимерный наполнитель для улучшения состояния при морщинах, включающий пористые микрочастицы биоразлагаемого полимера и один или несколько биосовместимых носителей.
[8]В патенте США №6377198, в котором описывают пористый каркас, имеющий непрерывную полимерную фазу с высоко взаимосвязанным многомодальным распределением крупных и мелких пор круглой формы. Более крупные поры, должны обеспечивать открытое пространство для прорастания нативной ткани в толщу частиц, при этом более мелкие поры, как утверждается, образуют каналы между более крупными порами для улучшения контакта от клетки к клетке, проникновения питательных веществ, удаления метаболических отходов и поверхностного структурирования для способствования направленному росту клеток. Однако, описанные частицы получают сложными технологическими стадиями: образование однородного раствора базового полимера в смеси растворителей (например, 1,4-диоксана и воды); добавление макропористого буферного материала (например, NaCl) в раствор; резкое охлаждение капель раствора для отверждения базового полимера в форме частиц; извлечение частиц из устройства и затем промывка макропористого буферного материала от частиц.
[9]В патенте RU 2630135 был раскрыт способ получения полимерных микрочастиц, содержащих матричный полимерный материал непрерывной фазы и полимерные добавки из термопластичных полимеров, благодаря которым образуются нано- и микропоры. Пористая структура микрочастиц может быть образована без необходимости в сложных методиках и химических составах растворителей, традиционно применяемых для образования пористых микрочастиц. Микрочастицы характеризуются многомодальным распределением пор по размеру, что может обеспечить ряд различных преимуществ в зависимости от конкретного применения.
[10]Наиболее близким к настоящему изобретению относится патент RU 2159148. В патенте описан способ формирования микрочастиц материала из микрокапелек раствора в производстве медикаментозных средств. Микрокапельки материала и растворителя подают в секцию замораживания. Эта секция содержит сжиженный газ, под действием которого происходит замораживание. Замороженные микрокапельки приводят в контакт с нерастворяющей жидкостью в секции экстракции. Экстрагируют растворитель в нерастворяющую жидкость с формированием тем самым микрочастиц.
[11]Раскрытие изобретения
[12]Технической проблемой, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является создание высокопористых полимерных микрочастиц для дальнейшего их использования в различных областях биомедицины.
[13]Технический результат, на которое направлено изобретение, заключается в разработке универсального способа получения пористых полимерных микрочастиц с применением лиофильной сушки.
[14]Для достижения технического результаты был предложен способ получения пористых полимерных микрочастиц с применением лиофильной сушки включающий стадию приготовления полимерного раствора в том числе суспензий твердых частиц используя в качестве растворителей воду и неконцентрированные водные растворы кислот и щелочей или буферные водные растворы или 1,4-диоксан, диметилсульфоксид, при этом к навеске полимерного материала 0,5 масс% до 2 масс% сухого вещества от конечного раствора приливают от 98 до 99,5 масс. % растворителя, с последующим смешиванием на магнитной мешалке не менее 48 часов при комнатной температуре и скорости от 100 до 300 об/мин, стадию формирования аэрозоля с последующей шоковой заморозкой включающую залив полимерного раствора или суспензии в резервуар пневматического распылителя с последующим распылении при давлении 3 Бар в металлическую емкостью, наполненную жидким азотом на 2/3 объема при расстоянии от сопла распылителя до поверхности жидкого азота 30±5 см. и угле распыления 45±5°, основную часть жидкого азота испаряют при комнатной температуре, после частицы переносят в предварительно охлажденный до -195°С полипропиленовый стакан и оставляют в морозильной камере при температуре - 24°С в течении 24 часов до полного испарения азота, стадию высушивание замороженной суспензии включающую удаление растворителя из пор посредством сублимационной сушки с дальнейшей до сушкой сушильном шкафу при комнатной температуре.
[15]В предпочтительных вариантах:
[16]в качестве жидкой фазы на этапе приготовления раствора добавляют лекарственные и биологически активные растворимые формы не более 20 масс. % от сухого вещества.
[17]в качестве твердых частиц, используют нано- или микрочастицы до 10 мкм полимеры или сополимеры, нерастворимые в выбранном растворителе, не более 20 масс. % от сухого вещества.
[18]Совокупность приведенных выше существенных признаков приводит к тому, что:
[19]Получаемые данной методикой частицы имеют преимущественно сферическую форму и характерный размер от 10 до 1000 мкм, обладают сверхразветвленной системой взаимопроникающих пор. Общая пористость достигает 99 об. %.
[20]Структура частиц устойчива при нормальных условиях. Дальнейшие исследования показали перспективы их применения, как индивидуально, например, в роли кровеостанавливающих средств, так и в качестве наполнителей для гидрогелей. Такой подход позволяет увеличить модуль упругости гидрогелей и замедлить высвобождение биоактивных молекул, тем самым заметно расширив сферу применения таких материалов на практике.
[21]Краткое описание чертежей
[22]Описание последовательности действий для создания пористых микрочастиц представлены на следующих схемах.
[23]На фиг. 1 - Блок-схема этапов получения высокопористых микрочастиц
[24]На фиг. 2 - Схема стадии формирования аэрозоля с последующей шоковой заморозкой, состоящая из:
[25]- криованны со сжиженным азотом;
[27]- необходимые параметры (расстояние, угол)
[28]Осуществление и пример реализации изобретения
[29]Способ получения пористых полимерных микрочастиц, включает следующие стадии:
[30]- Приготовление полимерного раствора, в том числе суспензий твердых частиц в полимерном растворе.
[31]- Формирование аэрозоля с последующей шоковой заморозкой над криованной;
[32]- Высушивание замороженной суспензии в лиофильной камере;
[33]- Контроль характеристик материала
[34]Блок-схема этапов получения высокопористых микрочастиц приведена на фигуре 1.
[35]Приготовление полимерного раствора, в том числе суспензий твердых частиц в полимерном растворе
[36]Подходящие растворители для получения частиц данным способом: вода и неконцентрированные водные растворы кислот и щелочей, буферные водные растворы, 1,4-диоксан, диметилсульфоксид (ДМСО).
[37]Подходящие полимерные соединения для получения частиц данным способом: полиэфиры (полилактид, полигликолевая кислота, поликапролактон, поливалеролактон, полилактид-со-гликолид, поли(гидроксилбутилат, поли(гидроксивалерат), полигидроксиалканоат, полиэтиленгликоль), природные протеины (коллаген, желатин, фиброин шелка, кератин, спидроин), природные полисахариды (хитозан, гиалуроновая кислота, альгиновые кислоты и их соли, ацетат целлюлозы) и их сополимеры.
[38]Некоторые полимерные соединения могут быть химически модифицированы (химически сшиты) специальными агентами, добавляемыми перед формованием частиц для придания устойчивости к растворению в условиях биологической среды. В качестве таких соединений, по меньшей мере, могут быть использованы, но не ограничиваются ими: глутаровый альдегид, генипин, соли кальция, β-глицерофосфаты.
[39]В качестве жидкой фазы на этапе приготовления раствора могут быть добавлены лекарственные и биологически активные растворимые формы но не более 20 масс. % от сухого вещества.
[40]В качестве твердых частиц, при получении композиционных пористых микрочастиц, могут быть выбраны нано- или микрочастицы (до 10 мкм) различной морфологии: полимеры или сополимеры, нерастворимые в выбранном растворителе, минеральные наполнители (гидроксиапатит, трикальций фосфат), лекарственные и биологически активные нерастворимые формы и другие не более 20 масс. % от сухого вещества.
[41]Заранее рассчитанную навеску полимерного материала взвешивают на весах и добавляют в стеклянную закрывающуюся тару из расчета от 0,5 масс% до 2 масс% сухого вещества от конечного раствора. При необходимости добавляют лекарственные формы или твердые частицы наполнителя с массовой концентрацией от сухого остатка полимерного соединения от 0 до 20%. Далее приливают заранее рассчитанное количество выбранного растворителя (от 98 до 99,5 масс. %). Суспензии оставляют на магнитной мешалке не менее 48 часов при комнатной температуре и скорости от 100 до 300 об/мин до полного растворения полимера и ресуспендирования наполнителя.
[42]Формирование аэрозоля с последующей шоковой заморозкой
[43]Приготовленный полимерный раствор или суспензию заливают в резервуар пневматического распылителя. Далее раствор распыляют при давлении 3 Бар в заранее подготовленную металлическую емкостью для улавливания частиц аэрозоля, наполненную жидким азотом на 2/3 объема. Расстояние от сопла распылителя до поверхности жидкого азота составляет ~ 30±5 см, угол распыления 45±5°. Образовавшиеся капли (частицы золя) подвергаются шоковой заморозке при контакте с жидким азотом, образуя преимущественно сферические полимерные частицы с закристаллизованным растворителем в структуре. В процессе заморозки происходит микрофазное разделение растворитель-полимер и формируется пористая структура будущих частиц. Далее частицы оседают на дно емкости, основную часть жидкого азота испаряют при комнатной температуре, а частицы переносят в предварительно охлажденный до -195°С полипропиленовый стакан и оставляют в морозильной камере при температуре - 24°С в течении 24 часов до полного испарения азота.
[44]Высушивание замороженной суспензии в лиофильной камере
[45]Растворитель из пор удаляют методом сублимационной сушки. Полипропиленовые стаканы с замороженными частицами переносят на заранее охлажденную при -24°С подложку лиофильной камеры. Далее подложку с образцом помещают в лиофильную установку и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки должна составлять от - 60 до -120°С. После завершения процесса сублимации полученные частицы извлекают из лиофильной установки и сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение суток для удаления остаточных паров растворителя.
[46]Контроль характеристик материала
[47]Контроль характеристик материала осуществляют согласно техническим требованиям на выпускаемую продукцию.
[48]Заявляемое техническое решение заключается в том, что: Получают полимерный раствор в водном или органическом растворителе, с концентрацией не более 2 масс. %. При необходимости добавляют наполнитель, для получения суспензии твердых частиц, или сшиватель для фиксации полимерной структуры после лиофилизации. Далее раствор распыляют при помощи метода аэрозольного распыления в ванну со сжиженным азотом для формирования структуры частиц, как показано на рис. 2. После чего растворитель лиофильно удаляют.
[49]Приведенные ниже примеры иллюстрируют варианты заявленного изобретения, но не ограничивают его.
[51]2 г гранул полилактида марки 4032D (Ingeo, Nature Works) с молекулярной массой 200 кДа растворяют в 98 г 1,4-диоксана в стеклянной таре при постоянном перемешивании. После полного растворения гранул, раствор переливают в резервуар пневмораспылителя, и распыляют в криованну под углом 45°, как показано на фигуре 2. Далее замороженные частицы собирают при помощи предварительно замороженного при температуре -196°С выпуклого шпателя в пластиковые одноразовые контейнеры для сбора биоматериала объемом 100 мл. Контейнеры предварительно охлаждают сжиженным азотом, для предотвращения плавления частиц. После сбора частиц контейнеры закрывают перфорированным слоем фольги и термостатируют при температуре -24°С, до полного удаления газообразного азота не менее 24 часов. После контейнеры переносят в камеру лиофильной установки на заранее охлажденную подложку лиофильной камеры и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки составляет -74°С. После завершения процесса сублимации полученные частицы извлекают из лиофильной установки и сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение суток для удаления остаточных паров растворителя.
[53]2 г гранул поликапролактона марки PC 12 (corbion) с молекулярной массой 100 кДа растворяют в 98 г 1,4-диоксана в стеклянной таре при постоянном перемешивании. После полного растворения гранул, раствор переливают в резервуар пневмораспылителя, и распыляют в криованну под углом 45°, как показано на фигуре 2. Далее замороженные частицы собирают при помощи предварительно замороженного при температуре -196°С выпуклого шпателя в пластиковые одноразовые контейнеры для сбора биоматериала объемом 100 мл. Контейнеры предварительно охлаждают сжиженным азотом, для предотвращения плавления частиц. После сбора частиц контейнеры закрывают перфорированным слоем фольги и термостатируют при температуре -24°С, до полного удаления газообразного азота не менее 24 часов. После контейнеры переносят в камеру лиофильной установки на заранее охлажденную подложку лиофильной камеры и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки составляет -74°С. После завершения процесса сублимации полученные частицы извлекают из лиофильной установки и сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение суток для удаления остаточных паров растворителя.
[55]1 г порошка хитозана Primex ChitoClear HQG 10 (43000) с молекулярной массой 80 кДа растворяют в 99 г 1 масс. % раствора уксусной кислоты в стеклянной таре при постоянном перемешивании. После полного растворения порошка, раствор переливают в резервуар пневмораспылителя, и распыляют в криованну под углом 45°, как показано на фигуре 2. Далее замороженные частицы собирают при помощи предварительно замороженного при температуре -196°С выпуклого шпателя в пластиковые одноразовые контейнеры для сбора биоматериала объемом 100 мл. Контейнеры предварительно охлаждают сжиженным азотом, для предотвращения плавления частиц. После сбора частиц контейнеры закрывают перфорированным слоем фольги и термостатируют при температуре -24°С, до полного удаления газообразного азота (не менее 24 часов). После контейнеры переносят в камеру лиофильной установки на заранее охлажденную подложку лиофильной камеры и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки составляет -74°С. После завершения процесса сублимации полученные частицы извлекают из лиофильной установки и сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение суток для удаления остаточных паров растворителя.
[57]1 г стерильного порошка хитозана Primex ChitoClear HQG 10 (43000) с молекулярной массой 80 кДа растворяют в 99 г стерильного 1 масс. % раствора уксусной кислоты в стеклянной таре при постоянном перемешивании. После полного растворения порошка, к раствору добавляют rhBMP-2 с концентрацией от 1 до 20 масс. % от сухого остатка полимера. Далее раствор переливают в резервуар пневмораспылителя, и распыляют (в ламинарном боксе) в криованну под углом 45°, как показано на фигуре 2. Далее замороженные частицы собирают при помощи предварительно замороженного при температуре -196°С выпуклого шпателя в охлажденные круглодонные закрывающиеся колбы для сушки стерильных материалов. После сбора частиц контейнеры закрывают и термостатируют при температуре -24°С, до полного удаления газообразного азота (не менее 24 часов). После колбы подключают к камере лиофильной установки и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки составляет -74°С. После завершения процесса сублимации колбы отсоединяют от лиофильной установки и переносят в ламинарный бокс для извлечения частиц.
[59]1 г порошка хитозана Primex ChitoClear HQG 10 (43000) с молекулярной массой 80 кДа растворяют в 99 г 1 масс. % раствора уксусной кислоты в стеклянной таре при постоянном перемешивании. Далее по каплям при постоянном перемешивании добавляют 1 мл 5 масс. % предварительно разбавленного глутарового альдегида и перемешивают не менее 5 и не более 10 минут. Далее раствор переливают в резервуар пневмораспылителя, и распыляют в криованну под углом 45°, как показано на фигуре 2. Далее замороженные частицы собирают при помощи предварительно замороженного при температуре -196°С выпуклого шпателя в пластиковые одноразовые контейнеры для сбора биоматериала объемом 100 мл. Контейнеры предварительно охлаждают сжиженным азотом, для предотвращения плавления частиц. После сбора частиц контейнеры закрывают перфорированным слоем фольги и термостатируют при температуре -24°С, до полного удаления газообразного азота (не менее 24 часов). После контейнеры переносят в камеру лиофильной установки на заранее охлажденную подложку лиофильной камеры и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки составляет -74°С. После завершения процесса сублимации полученные частицы извлекают из лиофильной установки и сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение суток для удаления остаточных паров растворителя.
[61]1 г порошка хитозана Primex ChitoClear HQG 10 (43000) с молекулярной массой 80 кДа растворяют в 99 г 1 масс. % раствора уксусной кислоты в стеклянной таре при постоянном перемешивании. Далее добавляют 70 мг порошка генипина и перемешивают не менее 5 и не более 10 минут. Далее раствор переливают в резервуар пневмораспылителя, и распыляют в криованну под углом 45°, как показано на фигуре 2. Далее замороженные частицы собирают при помощи предварительно замороженного при температуре -196°С выпуклого шпателя в пластиковые одноразовые контейнеры для сбора биоматериала объемом 100 мл. Контейнеры предварительно охлаждают сжиженным азотом, для предотвращения плавления частиц. После сбора частиц контейнеры закрывают перфорированным слоем фольги и термостатируют при температуре -24°С, до полного удаления газообразного азота (не менее 24 часов). После контейнеры переносят в камеру лиофильной установки на заранее охлажденную подложку лиофильной камеры и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки составляет -74°С. После завершения процесса сублимации полученные частицы извлекают из лиофильной установки и сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение суток для удаления остаточных паров растворителя.
[63]1 г порошка хитозана Primex ChitoClear HQG 10 (43000) с молекулярной массой 80 кДа растворяют в 99 г 2 масс. % раствора уксусной кислоты в стеклянной таре при постоянном перемешивании. Далее добавляют нитрат серебра (ACS Reagent, ≥99.0%, Honeywell Fluka) в соотношении 1/0,10; 1/0,21; 1/0,52 и 1/1,04 и термостатируют растворы при 60°С в темном месте для формирования наночастиц. Затем растворы переливают в резервуар пневмораспылителя, и распыляют в криованну под углом 45°, как показано на фигуре 2. Далее замороженные частицы собирают при помощи предварительно замороженного при температуре -196°С выпуклого шпателя в пластиковые одноразовые контейнеры для сбора биоматериала объемом 100 мл. Контейнеры предварительно охлаждают сжиженным азотом, для предотвращения плавления частиц. После сбора частиц контейнеры закрывают перфорированным слоем фольги и термостатируют при температуре -24°С, до полного удаления газообразного азота (не менее 24 часов). После контейнеры переносят в камеру лиофильной установки на заранее охлажденную подложку лиофильной камеры и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки составляет -74°С. После завершения процесса сублимации полученные частицы извлекают из лиофильной установки и сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение суток для удаления остаточных паров растворителя.
[65]1 г порошка хитозана Primex ChitoClear HQG 10 (43000) с молекулярной массой 80 кДа растворяют в 99 г 2 масс. % раствора уксусной кислоты в стеклянной таре при постоянном перемешивании. Далее добавляют 0,01, 0,05 или 0,10 г наночастиц целлюлозы и перемешивают до полного диспергирования и получения суспензии. Далее растворы озвучивают в ультразвуковой ванне в течение 15 минут и переливают в резервуар пневмораспылителя. Потом суспензии распыляют в криованну под углом 45°, как показано на фигуре 2. Далее замороженные частицы собирают при помощи предварительно замороженного при температуре -196°С выпуклого шпателя в пластиковые одноразовые контейнеры для сбора биоматериала объемом 100 мл. Контейнеры предварительно охлаждают сжиженным азотом, для предотвращения плавления частиц. После сбора частиц контейнеры закрывают перфорированным слоем фольги и термостатируют при температуре -24°С, до полного удаления газообразного азота (не менее 24 часов). После контейнеры переносят в камеру лиофильной установки на заранее охлажденную подложку лиофильной камеры и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки составляет -74°С. После завершения процесса сублимации полученные частицы извлекают из лиофильной установки и сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение суток для удаления остаточных паров растворителя.
[67]2 г порошка ацетата целлюлозы (Sigma Aldrich) с молекулярной массой 50 кДа растворяют в 98 г 1,4-диоксана в стеклянной таре при постоянном перемешивании. После полного растворения порошка, раствор переливают в резервуар пневмораспылителя, и распыляют в криованну под углом 45°, как показано на фигуре 2. Далее замороженные частицы собирают при помощи предварительно замороженного при температуре -196°С выпуклого шпателя в пластиковые одноразовые контейнеры для сбора биоматериала объемом 100 мл. Контейнеры предварительно охлаждают сжиженным азотом, для предотвращения плавления частиц. После сбора частиц контейнеры закрывают перфорированным слоем фольги и термостатируют при температуре -24°С, до полного удаления газообразного азота не менее 24 часов. После контейнеры переносят в камеру лиофильной установки на заранее охлажденную подложку лиофильной камеры и сублимируют растворитель из частиц в течение 3 суток с глубиной вакуума 0.250 мбар (режим «Основной сушки» («Main drying»)) с последующим досушиванием в течение 5 часов при давлении 0.030 мбар (режим «Финальной сушки» («Final drying»)). Температура конденсатора на протяжении всего процесса сушки составляет -74°С. После завершения процесса сублимации полученные частицы извлекают из лиофильной установки и сушат в вакуумном сушильном шкафу при комнатной температуре в течение суток для удаления остаточных паров растворителя.
