[1]Изобретение относится к области органической химии - новым биологически активным соединениям - замещенным пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепинам, а именно к 1-метил-5-(4-хлорфенил)-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепин-6-ону 1 формулы:
[2]
[3]соединение 1 обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве потенциального лекарственного средства с антимикотическими свойствами.
[4]Аналогом по структуре заявляемому соединению является 7-хлор-4-(4-этилфенил)-5,6-дигидро-4H-бензо[ƒ]пирроло[1,2-a][1,4]диазепин 2, обладающий антимикотической активностью [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 75, 3453-3458; doi: 10.1016/j.bmcl.2005.05.007] формулы:
[5]
[6]Эталоном сравнения был выбран кетоконазол 3 формулы:
[7]
[8]который широко применяется в лечебной практике, и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - с. 918; Med. Chem. Res. 2013, 22, 211-218; doi: 10.1007/s00044-012-0021-2].
[9]Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепинов веществ с выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью.
[10]Поставленная задача достигается получением 1-метил-5-(4-хлорфенил)-4,5-дигидро-6H-пирроло[1,2-а] [1,4]бензодиазепин-6-она, который обладает антимикотической активностью.
[11]Заявляемое соединение 1 синтезируют обработкой N-(2,5-диоксогексил)-N-(4-хлорфенил)-2-нитробензамида карбонильным железом при нагревании, а затем выдерживании суспензии при комнатной температуре с последующей нейтрализацией кислоты NaHCO3 и выделением целевого продукта стандартными методами синтетической органической химии по схеме:
[12]
[13]Пример 1. Получение соединения 1. Железную пыль (3 г) добавляют к раствору N-(2,5-диоксогексил)-N-(4-хлорфенил)-2-нитробензамида (1 г) в ледяной уксусной кислоте (20 мл). Реакционную смесь нагревают до кипения и выдерживают при комнатной температуре 1 час (ТСХ контроль). Затем реакционную смесь выливают в холодную воду (100 мл) и нейтрализуют NaHCO3 до рН ~ 7. Выпавший осадок отфильтровывают и тщательно промывают горячим этилацетатом (5 × 30 мл). Объединенные органические фракции сушат над безводным Na2SO4 и упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток очищают методом колоночной хроматографии, используя элюент: этилацетат - петролейный эфир, 1:2. Перекристаллизовывают из смеси ацетон - петролейный эфир. Выход 77%. Найдено: С, 70.93; Н, 4.73; N, 8.51. Вычислено для C19H15ClN2O: С, 70.70; Н, 4.68; N, 8.68%. Спектр ЯМР1Н, (300 МГц, CDCl3), δ, м.д.: 2.36 (с, 3Н, СН3), 4.37 (д,2J=15.6 Гц, 1H, СН2), 4.67 (д,2J=15.6 Гц, 1H, СН2), 6.07 (с, 2Н, HPyr), 7.26 (д,3J=8.7 Гц, 2Н, HAr), 7.29-7.32 (м, 1Н, HAr), 7.36 (д,3J=8.7 Гц, 2Н, HAr), 7.39-7.44 (м, 1Н, HAr), 7.55-7.60 (м, 1Н, HAr), 7.98-8.01 (м, 1H, HAr). Спектр ЯМР13С (75 МГц, CDCl3), δ, м.д.: 14.0, 47.8, 105.6, 109.7, 124.5, 126.3, 127.5 (2С), 129.3 (2С), 129.6, 130.7, 130.8, 131.4, 131.8, 132.6, 135.3, 141.3, 167.6. Полученное соединение 1 представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в хлороформе, толуоле, ацетоне, этилацетате, этаноле.
[14]
[15]Пример 2. Для характеристики антимикотической активности соединений использовали стандартные параметры: минимальная подавляющая концентрация (МПК), которую определяли модифицированным методом двукратных серийных разведений (Методические рекомендации: Грибы рода Candida. Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам, Москва, 2009; МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и минимальная фунгицидная концентрация (МФК).
[16]Тесты проводили с использованием культуры модельных микроорганизмов Candida albicans АТСС 10231 на питательной среде Мюллера-Хинтона с добавлением 2% глюкозы в 96-луночных полистироловых планшетах. Концентрация микроорганизмов в лунках перед началом культивирования составляла 2,5*105 КОЕ/мл. Культивирование проводили при 37°С без перемешивания. Определение МПК и высевы для определения МФК производили через 24 ч. Исследуемые соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до полного растворения в концентрации 20 мг/мл и ниже, в зависимости от растворимости. Вносили в питательную среду так, чтобы количество ДМСО не превышало 5%.
[17]Пример 3. Острую токсичность (ЛД50, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г.H. Першина [Першин Г.H. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 1971, 109-117]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД50 составляет >1500 мг/кг.
[18]Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н. Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977, стр. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице: 
[19]МПК* - минимальная подавляющая концентрация,
[20]МФК** - минимальная фунгицидная концентрация.
[21]Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 сопоставимо по антимикотической активности с препаратом сравнения (Кетоконазол) по отношению к С.albicans. Таким образом, это делает возможным использование 1-метил-5-(4-хлорфенил)-4,5-дигидро-6H/-пирроло[1,2-a][1,4]бензодиазепин-6-она 1 для создания новых лекарственных средств в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.
