[1]Изобретение относится к ветеринарной медицине и может быть использовано при производстве нативной сыворотки крови животных для увеличения выхода сыворотки от объема взятой крови.
[2]Известен способ получения сыворотки крови взрослого крупного рогатого скота для культивирования клеток животных и человека, включающий забор крови в стерильные стеклянные 10 или 20 литровые емкости, предварительно смоченные 100-200 мл 5%-ным раствором натрия хлористого, 2-х часовую выдержку взятой крови при комнатной температуре при дальнейшем размещении емкостей с кровью в наклонном положении в холодильной камере на 72 часа при температуре +1…+2°С (Патент РФ №2460786, МПК А61К 33/00, опубликован 27.10.2003).
[3]Известен классический способ получения нативной сыворотки крови реконвалесцентов, которую изготавливают областные, межрайонные ветеринарные лаборатории и ветлечебницы, включающий забор крови в емкости с физиологическим раствором (из расчета 50 см3 раствора на 1 л крови), после чего кровь ставят в помещение с температурой +25°С на 5-6 часов, при последующей обводки сгустка фламбированной стеклянной палочкой для отрыва сгустка от стенок емкости и после слива сыворотки проводят ее консервацию. (Наставление по изготовлению и применению сыворотки из крови реконвалесцентов при ящуре: Ветеринарное законодательство, т. 1, под редакцией А.Д. Третьякова 1972. - с. 628-630).
[4]Недостатком данных способов получения сывороток является следующее. На практике выход сыворотки составляет от 25 до 40%, а количество сгустка крови, соответственно 60-75% от объема полученной крови. В то же время в сгустке крови содержится большое количество не извлеченной сыворотки, однако данные способы не учитывают этого обстоятельства, утилизируя сгусток, что приводит к большим потерям нативной сыворотки.
[5]Известен способ получения нативной сыворотки использующий сгусток крови в качестве дополнительного источника сыворотки отраженный в патенте №2196591 МПК А61К 33/14 «Препарат и способ профилактики и лечения диареи у телят», включающем забор крови, отслаивание крови на водяной бане при температуре +37…+38°С в течение 30-40 минут или при комнатной температуре в течение 12-15 часов при дальнейшей выдержке субстрата в холодильнике при температуре +4…+5°С до наступления максимальной ретракции, после слива сыворотки сгусток крови подвергали отжатию путем его смешивания с гипохлоритом натрия концентрацией 350-300 мг/л из расчета 300 мл гипохлорита на 1 л сгустка при выдержке субстрата в течение 24 часов в прохладном месте. Объединение всех партий сыворотки, которые были получены методом отсоса (слива) - основная партия и отжатая из сгустков крови с добавлением гипохлорита натрия осуществляли после раздельного центрифугирования и консервирования сывороток. (Патент РФ №2196591 МПК А61К 33/14, А61К 35/16, опубликован 2003.01.20 - прототип).
[6]Недостатком данного способа является то, что он не позволяет получить цельную сыворотку в связи с тем, что во время переработки сгустка вводится большое количество гипохлорита натрия, снижающее активность сыворотки, то есть снижается титр антител.
[7]Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является разработка способа, обеспечивающего получение цельной сыворотки при высоком ее выходе от объема взятой крови.
[8]Указанный технический результат достигается тем, что в способе получения нативной сыворотки крови животных, включающем взятие крови, в емкости, ее отслаивание при температуре +37…+38°С при последующей ретракции сгустка в холодильнике при температуре +4…+6°С, отсос сыворотки и отжатие сгустков крови, центрифугирование, консервирование и объединение сывороток, согласно заявленному изобретению, взятие крови осуществляют после предварительного смачивания стенок емкости гипохлоритом натрия концентрацией 350-300 мг/л из расчета 3,0-3,5 мл гипохлорита натрия на 1 л объема емкости, используемой для взятия крови, а процесс отслаивания проводят в течение 2-3 часов при последующей ретракции сгустка в холодильнике в течение 16-18 часов, при этом перед размещением емкости с кровью в холодильник производят отделение сформировавшегося сгустка путем встряхивания емкости при закрытой крышке, а после отсоса основной партии сыворотки сгусток измельчают до частиц 4-6 см3 и выдерживают в холодильнике при температуре +2…+4°С в течение не менее 24 часов для осуществления ретракции измельченного сгустка и после слива сыворотки ее центрифугируют, консервируют и объединяют с основной партией.
[9]На первом этапе исследований определялась оптимальная длительность процесса ретракции при получения основной партии сыворотки (без отжатия сгустка) в сравнительном варианте по заявленному способу и способу по прототипу, при этом по прототипу кровь отслаивали при температуре +37…+38°С в течение 30-40 минут, а по заявленному способу при той же температуре в течение 2-3 часов. Как показали исследования, максимальный выход нативной сыворотки во время ретракции отстоявшегося сгустка в холодильнике при температуре +4…+6°С по заявленному способу наблюдался при длительности процесса ретракции от 16 до 18 часов при количественном выходе нативной сыворотки на уровень 350-355 мл из одного литра исходной крови, в то время как длительность процесса ретракции по прототипу была на уровне 22-24 часов при максимальном выходе сыворотки 317-319 мл. 
[10]Таким образом, увеличение времени отслаивания сгустка крови до 2-3 часов сокращало не только длительность процесса ретракции сгустка в холодильнике, но и увеличивало выход нативной сыворотки на 10,7%. Результаты исследований представлены в таблице 1.
[11]На следующем этапе исследований выявлялась оптимальная степень измельчения сгустков крови после окончательной ретракции при получении основной партии сыворотки. Процесс ретракции данных сгустков проводился при предварительно отработанных параметрах процесса, а именно, при выдержке измельченных сгустков в холодильнике при температуре +2…+4°С в течение не менее 24 часов. Для проведения опыта сгустки массой 1 кг измельчали: до гомогенного состояния, до состояния фарша и на частицы размером от 1 до 7 см3 и выдерживали в холодильнике при температуре+2…+4°С в течение 25 часов. Результаты исследований представлены в таблице 2.
[12]
[13]
[14]Таким образом, оптимальной степенью измельчения сгустка, полученного после извлечения основной партии сыворотки следует считать размер частиц сгустка от 4 до 6 см3, что обеспечивает дополнительно от 39,5 до 41,0 мл нативной качественной (без разбавления) сыворотки крови, и составляет 11,3% дополнительно к основной партии, а в целом по сравнению с прототипом превышение выхода сыворотки было на уровне 22,0%.
[15]Заявленный способ осуществляется следующим образом. Взятие крови производили в 5 литровые емкости после предварительного смачивания внутренних стенок емкости 15 мл гипохлорита натрия концентрацией 350 мг/л, что позволяет свести до минимума риск развития случайно попавшей облигатной микрофлоры при взятии крови в производственных условиях Использование более концентрированного гипохлорита натрия и увеличение вносимого объема приводит к гемолизу эритроцитов, уплотнение сгустка не происходит, он очень рыхлый, полученная сыворотка темно красного цвета, не пригодная для дальнейшего использования. Данный прием позволяет обеспечить антисептику в процессе взятия, отслаивания, а так же легкое последующее отделение сгустка от стенок емкости путем ее встряхивания при закрытой крышке сосуда, не нарушая антисептики субстрата при постановке его в холодильник. Взятую кровь отслаивали, выдерживая в термостате при температуре +37°С в течение 3 часов, и после встряхивания емкости и отделения сгустка от стенок помещали в холодильник с температурой +5°С на 18 часов (до окончательной ретракции), далее производили отсос сыворотки, а сгусток измельчали до размера частиц 4-6 см3 и выдерживали при в холодильнике при температуре +2…+4°С в течение 24 часов. После слива сыворотки ее центрифугировали, консервировали и объединяли с основной партией.
[16]Использование заявленного способа получения нативной сыворотки крови животных позволяет получить цельную (не разбавленную) сыворотку при высоком ее выходе от объема взятой крови.
