СПОСОБ СТИМУЛЯЦИИ ВЫРАБОТКИ ПРОСТАГЛАНДИНОВ В ОРГАНИЗМЕ

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, биологии и ветеринарии и может быть использовано как в практической медицине, так и для научных исследований. Сущность способа стимуляции выработки простагландинов в организме: больному проводят сеансы озонотерапии, заключающиеся в озонировании 100-150 мл аутокрови больного в стерильном стеклянном флаконе озонокислородной смесью с концентрацией озона 5000 мкг/л. Применение способа позволяет стимулировать выработку простагландинов в организме. 4 ил.

Способ стимуляции выработки простагландинов в организме, отличающийся тем, что больному проводят сеансы озонотерапии, заключающиеся в озонировании 100-150 мл аутокрови больного в стерильном стеклянном флаконе озонокислородной смесью с концентрацией озона 5000 мкг/л.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, биологии и ветеринарии и может быть использовано как в практической медицине, так и для научных исследований.

В настоящее время возросший интерес к простагландинам можно объяснить их вездесущностью (они обнаружены во всех органах и тканях человека и животного), высокой биологической активностью (они оказывают действие в чрезвычайно малых дозах, измеряемых нанограммами), широким спектром действия, по многообразию сравнимым с эффектом гормонов. Содержание простагландинов в тканях организма весьма низкое и синтезируются простагландины в тканях организма в небольших количествах. В сутки организм человека синтезирует примерно 100 мкг основных простагландинов и уже за время одного кругооборота крови простагландины разрушаются на 90%. На сегодняшний день в значительной степени изучены пути их синтеза и метаболизма, показано участие простагландинов в регуляции функций различных систем и органов, выдвинуты гипотезы об их участии в патогенезе некоторых заболеваний и сделаны попытки применения простагландинов в различных областях медицины. Вместе с тем, представляется актуальным дальнейшее изучение этого биологически активного вещества, его свойств, разработки способов и факторов воздействия на него, их стимуляции, а также разработки новых способов определения простагландинов в биологической жидкости и тканях.

За прототип предлагаемого изобретения выбран известный способ стимуляции выработки простагландинов в организме, MCMILLAN R.M. et al/ Interactions of murine macrofages with monosodium urate cristals: stimulation of lysosomal enzyme release and prostoglandin synthesis (J. Rheumatol/1981, Jul-Aug., p. 555-562, реф. Найдено из БД PubMed, PMID 6946240 /Найдено 13.10.2006/ (он-лайн).

Известный способ заключается в том, что для стимуляции лизосомного фермента и синтеза простогландина на мышиные бактериальные макрофаги воздействуют кристаллами мононатриевого урата (MSUM). После воздействия происходило выделение медиаторов воспаления из клеток. Авторы отмечали быстрый всплеск синтеза простогландина Е₂ (ПГЕ₂), завершавшийся через 2 часа.

Описанный способ стимуляции синтеза простогландинов касается применения у экспериментальных животных специфического химического агента - кристаллов моногидрата мононатриевого урата. Эта соль является естественным метаболитом организма, выделяется с мочой.

Недостатком известного способа является то, известный способ применяют в экспериментальной медицине с исследовательскими целями на мышах, уровень обмена которых существенно отличается от человеческого. Избыток этой соли в организме человека может привести к камнеобразованию в почках. Поэтому как химический реагент для стимуляции простогландинов данный урат и приемлем в экспериментальной медицине, однако возможность его применения для стимуляции выработки простогландинов у человека в клинической практике вызывает большое сомнение.

Задачей предлагаемого изобретения является повышение безопасности процедуры и обеспечение возможности более широкого терапевтического воздействия.

Поставленная задача в известном способе стимуляции выработки простагландинов в организме решается тем, что больному проводят сеансы озонотерапии, заключающиеся в озонировании 100-150 мл аутокрови больного в стерильном стеклянном флаконе озонокислородной смесью с концентрацией озона 5000 мкг/л.

Предлагаемое изобретение отвечает критериям изобретения «новизна» и «изобретательский уровень», так как в процессе проведения патентно-информационных исследований не выявлено источников патентной и научно-технической литературы, порочащих новизну предлагаемого способа, равно как и технических решений с существенными признаками предлагаемого способа.

Из отечественной и зарубежной литературы известны способы стимуляции выработки биологически активных веществ, например серотонина, гистидина и других, в организме человека путем проведения озонотерапии. Однако наличие этих биологически активных веществ в организме достаточно велико и их обнаружение и количественная оценка после воздействия озонокислородной смеси на биологические жидкости не вызывает особых затруднений. Другая ситуация с короткоживущими биологически активными веществами. Известно, что при окислении озоном жирных кислот происходит биотрансформация продуктов этого окисления в короткоживущие биологически активные вещества, например простагландины, которые могут играть существенную роль в обеспечении компенсаторно-приспособительных реакций организма при патологии.

Параметры способа, такие как объем озонированной крови, объемная скорость озонирования и концентрация озона в озонокислородной смеси, получены эмпирическим путем. Увеличение или уменьшение параметров не приводят к получению положительного эффекта.

Предлагаемый способ позволяет получить следующий положительный эффект.

Предлагаемый способ позволяет стимулировать выработку простагландинов после воздействия озонокислородной смесью. Для клиники предлагаемый способ имеет очень важное значение. Его значимость прежде всего в том, что он позволяет подтвердить теоретическое предположение об окислении жирных кислот и биотрансформации продуктов этого окисления в короткоживущие биологически активные вещества, в том числе и простагландины, которые могут играть существенную роль в обеспечении компенсаторно-приспособительных реакций организма при патологии. Предлагаемый способ безопасен для пациента. Более того, в механизмах лечебного действия озона дифференцируют его первичные реакции и вторичное опосредованное влияние благодаря образовавшимся озонидам (продуктам взаимодействия с жирными кислотами и липопротеинами), которые могут более длительное время циркулировать в сосудистом русле и тем самым обеспечить возможность более широкого терапевтического воздействия.

Для доказательства возможности стимуляции выработки и регистрации полученного эффекта были проведены экспериментальные исследования. Поскольку, как уже отмечалось, кристаллографически простагландины не определялись, необходимо было сначала получить кристаллографическую картину с тестирующим агентом, в качестве которого был выбран искусственно синтезированный простагландин Е1. В настоящее время искусственно синтезирован и успешно применяется для лечения сосудистых заболеваний лекарственный препарат Альпростадил (Вазапростан), представляющий собой стабилизированный синтетический аналог простагландина Е1 (А.В.Покровский А.В., 1999).

Целью исследования было определение возможности регистрации активации простагландина после воздействия озонокислородной смесью с помощью кристаллографии и экспериментального обоснования теоретического предположения о том, что озонотерапия стимулирует образование простагландинов в организме человека. Объектом исследования являлась сыворотка крови 30 пациентов. Были выделены три группы:

В контрольной группе - 10 человек, которые не принимали Вазапростан и им не назначалась озонотерапия;

В группе Б больным проводили сеансы озонотерапии, заключающиеся в озонировании 100-150 мл аутокрови больного озонокислородной смесью с концентрацией озона 5000 мкг/л.

В группе В больным внутривенно вводили раствор лекарственного препарата «Вазапростан».

Результаты экспериментов (фиг.1, фиг.2, фиг.3, фиг.4)

1. Кристаллограмма лекарственного препарата «Вазапростан» in vitro (фиг.1).

В поле зрения определяется до 80% базисных структур - нитевидных кристаллов. Вторичные структуры представлены характерными ромбовидными кристаллами в количестве 1 ед. в поле зрения. Дендритные кристаллы занимают до 20% от общей площади.

2. Кристаллограмма плазмы больного после введения лекарственного препарата «Вазапростан» (фиг.2).

В поле зрения определяется до 70% базисных структур - нитевидных кристаллов. Вторичные структуры представлены характерными ромбовидными кристаллами, которых насчитывается 1 ед. в поле зрения, дендритные кристаллы занимают до 20% общей площади. Атипичные кристаллы занимают до 10% от общей площади.

3. Кристаллограмма плазмы больного до озонотерапии (фиг.3).

В поле зрения определяется до 80% базисных структур. Вторичные структуры представлены дендритными кристаллами до 20% от общей площади.

4. Кристаллограмма плазмы больного после озонотерапин (фиг.4).

В поле зрения определяется до 70% базисных структур - нитевидных кристаллов. Вторичные структуры представлены характерными ромбовидными кристаллами в количестве 1 ед. в поле зрения. Дендритные кристаллы занимают до 30% от общей площади.

На кристаллограммах больных группы Б и группы В визуально определяется идентичная картина вторичных структур в виде характерных ромбовидных кристаллов, которая полностью совпадает с кристаллограммой лекарственного препарата «Вазапростан». Проведение сеансов озонотерапии стимулирует выработку простагландинов, так же как и внутривенное введение лекарственного препарата «Вазапростан». Полученные данные говорят о том, что, стимулируя выработку простагландинов путем проведения озонотерапии, происходит не только увеличение, выработка «родных» для данного больного короткоживущих биологически активных веществ, но и пролонгация их активного действия.

Предлагаемый способ позволяет стимулировать выработку простагландинов и повысить с помощью кристаллографии точность определения простагландинов в биологической жидкости больного после воздействия озонокислородной смесью. Кроме того, способ экономически выгоден по сравнению с введением лекарственного препарата «Вазапростан», при использовании которого курс лечения составляет приблизительно 30 тыс. руб., а курс озонотерапии 3-4 тысячи руб. Но не только экономическая эффективность отличает предложенный способ стимуляции выработки простагландинов, от применения «Вазапростапа», но и фармакокинетика, так как использование «Вазапростана» - это экзогенный путь введения простагландинов (т.е. в чем-то насильственный), тогда как озонотерапия стимулирует выработку эндогенных простагландинов. В механизмах лечебного действия озона дифференцируют его первичные реакции и вторичное опосредованное влияние благодаря образовавшимся озонидам (продуктам взаимодействия с жирными кислотами и липопротеинами), которые могут более длительное время циркулировать в сосудистом русле. Для клиники предлагаемый способ имеет важное значение. Его значимость прежде всего в том, что он позволяет подтвердить теоретическое предположение об окислении жирных кислот и биотрансформации продуктов этого окисления в короткоживущие биологически активные вещества, в том числе и простагландины, которые могут играть существенную роль в обеспечении компенсаторно-приспособительных реакций организма при патологии.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

Утром у пациента натощак делают забор крови. Пробирку с кровью центрифугируют в течение 15 минут при скорости 3000 об/мин, отделяют плазму и проводят кристаллографическое исследование. Для этого полученную плазму разводят 0.9%-ным кристаллообразующим раствором NaCl в соотношении 1:10. Субстрат наносят на предметное стекло, выдерживают при комнатной температуре в течение 24 часов для полной организации кристаллов и исследуют под микроскопом. Пациенту проводят сеанс озонотерапии, заключающийся в озонировании 100-150 мл аутокрови больного в стерильном стеклянном флаконе озонокислородной смесью с концентрацией озона 5000 мкг/л. После окончания сеанса у пациента аналогичным образом забирают и готовят плазму для кристаллографического исследования. Плазму разводят 0,9%-ным кристаллообразующим раствором NaCl в соотношении 1:10. Субстрат наносят на предметное стекло и оставляют в темном месте при комнатной температуре на 24 часа для полной организации кристаллов. Результаты исследуют под микроскопом при небольшом увеличении. Наличие простагландинов в биологической жидкости определяют по характерной кристаллографической картине. При наличии вторичных структур, представленных в виде характерных ромбовидных кристаллов, судят о наличии простагландинов в биологической жидкости больного.

Литература

1. Гамалея Н.Ф. Механизмы биологического действия лазеров, "Лазеры в клинической медицине", М., Изд-во Медицина, 1981 г., с.38-85.

2. Stenson W.F., Parker C.W. Prostaglandins.In Immunopharmacology, ed, By P.Sirois and M. Rola-Pleszczynski, Elsevier/North Holland, Amsterdam, 1982.

3. Шелепин А.А. Клиническая иммунология. Учебное пособие. М., Изд-во УДН, 1990, стр.35).

4. Stenson W.F., Parker C.W. Prostaglandins, macrophages and immunity, J. Immunol, 125, 1-5, 1980.

5. Перетяган С.П. О многофакторном механизме лечебного действия озона. Нижегородский медицинский журнал 2003. Приложение. Озонотерапия, с.6-7.

6. Покровский А.В., Кошкин В.М., Кириченко А.А. Чуприн А.В. Вазапростан (простагландин Е1) в лечении тяжелых стадий артериальной недостаточности нижних конечностей. Пособие для врачей (2-е издание) Москва, 1999, с.16.

7. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Клиническая кристаллография: становление, проблемы, перспективы Кристаллографические методы исследования в медицине. Сб. науч. трудов, 1-й Всероссийской научно-практической конференции, Москва, 14-15 октября 1997 г., с.3-7.