[1]
Изобретение относится к способам определения количества сахарозы (сахара), глюкозы в биологических и водных растворах.
[2] Существующие способы определения уровня сахарозы в водных
растворах определяются в основном приборами поляриметрами, использующими поляризованный свет, проходящий через раствор, и вращающий луч в зависимости от концентрации сахарозы в растворе.
[3]
Несмотря на грубость замера, метод используется в пищевой промышленности.
[4] В биологических же средах уровень глюкозы определяется при помощи более точных способов. Так при определении
уровня глюкозы в крови, сыворотке, плазме крови, а также в моче применяют ортотолуидиновый метод. Это наиболее близкий способ по достигаемому эффекту.
[5] Принцип этого метода состоит в том,
что в кислой среде при повышенной температуре глюкоза образует с ортотолуидином комплексное соединение сине-зеленого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации глюкозы в исследуемом
растворе, которая колориметрируется на приборе ФНК (фото-колориметр-нефилометр).
[6] Однако этот метод для определения уровня глюкозы в моче используется на практике редко, т.к. метод
сложен, многооперационен и требует высокой квалификации исполнителя.
[7] На практике существуют унифицированные методы оценки уровня глюкозы в моче.
[8] 1. Качественные методы
оценки наличия глюкозы в моче:
1.1. Проба Гайнеса. Принцип "Проба Бенедикта". Реактивы - 13,3 г химически чистого кристаллического сульфата меди растворяют в 400 мл воды, 50 г едкого натра
растворяют в 400 мл воды и 15 г чистого глицерина разводят в 300 мл воды. Все три раствора смешивают. Одну каплю мочи и 9 капель реагента доводят до кипения.
[9] При отсутствии глюкозы цвет
реактива не меняется.
[10] Методика принята как унифицированная. Приказ Министра здравоохранения СССР 290 от 11 апреля 1972 г., с. 18-19.
[11] 1.2. Применение реактивной бумаги
"Глюкотест". Проба энзимологическая с помощью реактивной бумаги.
[12] Принцип - метод основан на окислении глюкозы ферментом глюкозооксидазы. Изменение окраски реактивной бумаги
соответствует присутствию в моче глюкозы.
[13] Метод принят как унифицированный. Приказ Министра здравоохранения СССР от 11 апреля 1978 г., с. 16-18.
[14] 2. К количественным
методам уровня глюкозы в моче относятся следующие.
[15] 2.1. Поляриметрический метод.
[16] Мочу подкисляют уксусной кислотой, кипятят, охлаждают, фильтруют, отсорбируют и снова
фильтруют. Заполняют трубку поляриметра профильтрованной мочой. Закрывают шлифованным стеклом, помещают в аппарат. По углу отклонения поляризованного луча определяют % содержание глюкозы.
[17] Метод принят как унифицированный. Приказ Министра здравоохранения СССР 290 от 11 апреля 1972 г., с. 20-21.
[18] 2.2. Колориметрический метод (модификация метода Альтгаузена). 4 мл
испытываемой мочи смешивают с 1 мл 10% раствора едкого натрия. Ставят в кипящую водяную баню на 3 мин. Через 10 мин, колориметрируют на ФКН.
[19] Количество глюкозы в процентах находят на
калибровочной кривой.
[20] "Унифицированные методы клинических лабораторных исследований" В.1. Биохимические методы. Под редакцией проф. В.В. Меньшикова, Москва, 1970, с. 87-89.
[21] 3. Существуют другие методы определения глюкозы в моче (титрационный, бродильный, ортотолуидиновый), которые редко применяют в практических лабораториях.
[22] "Методические
указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследования". Раздел биохимических исследований. Москва, 1972 г., с. 60.
[23] Литература: Справочник по клиническим
лабораторным методам исследования под редакцией Е.А. Кост. Издательство второе переработанное и дополненное. - М.: Медицина, 1972 г., с. 224-227.
[24] Существующие указанные количественные
методы сложны, многоперационны, требуют большого количества специального оборудования и высокой квалификации исполнителя, а также обладают низкой точностью при малом уровне глюкозы в моче.
[25] Низкий уровень точности замера количества глюкозы в моче обуславливается не регистрирующими приборами, а самими способами.
[26] До настоящего времени не существует
высокочувствительного ферментивного метода, который бы позволил определять глюкозу в моче у здоровых людей и мог быть рекомендован для клинико-диагностических целей.
[27] Целью
предлагаемого изобретения является способ определения уровня глюкозы, сахарозы в биологических и водных растворах, который значительно проще и обладает высокой чувствительностью.
[28]
Способ дает возможность определять уровень глюкозы в моче как здорового человека, так и больных сахарным диабетом.
[29] Предлагаемый способ является единым для растворов биологических и
водных и заключается в следующем.
[30] На покровное стекло капают одну каплю концентрированной ортофосфорной кислоты, добавляют каплю исследуемого раствора и нагревают эту навеску до
температуры 240±20oС в течение 1-3 минут. Степень потемнения навески пропорциональна концентрации глюкозы или сахарозы в растворе, и изменение цвета обуславливается глубокими
изменениями углеродной структуры.
[31] После этого накрывают указанную навеску стеклом (толщиной 1,5-2 мм) и делают качественную оценку по аналогии с указанным методом "Глюкотест" для мочи,
т. е. , если светлый цвет, то уровень глюкозы в норме, если темный, - выше нормы.
[32] При таком визуальном способе оценки уровня глюкозы и сахарозы в растворах используется и шкала
цветности для более диференцированного определения уровня глюкозы, сахарозы в растворах.
[33] Для качественной оценки указанную навеску после температурной обработки растворяют в 50 мл
дисцилированной воды, заливают в 10 мм кювету и колометрируют на приборе ФКН. Количество глюкозы или сахарозы в моче или в водном растворе определяют на калибровочной кривой. Графики определения
глюкозы в водном раствор и биологическом прилагаются (фиг.1, 2).
[34] График замера сахарозы принципиально ничем не отличается от графика глюкозы.
