[1] Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к получению
инактивированной вакцины против сальмонеллеза телят.
[2] Сальмонеллез крупного рогатого скота - инфекционная болезнь, характеризующаяся явлениями бактериемии, токсемии, абортами или
рождением нежизнеспособного молодняка. Наиболее подвержен заболеванию молодняк в возрасте 10-30 дней. У маточного поголовья болезнь проявляется абортами. При остром течении у молодняка процесс
начинается с общего угнетения и отказа от корма. Одновременно повышается температура тела до 41oC и выше, развивается адинамия и залеживание, парезы передних конечностей. При
несвоевременном лечении смерть может наступить через 36-48 часов после появления клинических признаков. При затяжном течении болезни на 2-3-и сутки у телят появляется диаррея. Фекалии становятся
серо-желтыми, с большим количеством слизи и прожилками крови, имеют неприятный запах. Заболевание распространяется по типу энзоотии, нарастает постепенно и длительное время держится на высоком
уровне.
При этом в неблагополучном хозяйстве нередко переболевает 80-90% телят при уровне летальности 20-80%. Ущерб складывается из затрат на лечение, гибели молодняка. Заболевание регистрируется во
всех
регионах страны. При использовании эффективных вакцин гибель молодняка крупного рогатого скота снижается.
[3] Известна вакцина концентрированная формолквасцовая против сальмонеллеза
телят,
выпускаемая Краснодарской биофабрикой. Вакцина содержит серовары сальмонелл дублин и тифимуриум. Вакцину применяют для профилактики сальмонеллеза крупного рогатого скота в хозяйствах,
неблагополучных
по данному заболеванию. Стельным коровам вакцину вводят двукратно за 50-60 дней до отела, в дозах 10 и 15 мл с интервалом 8-10 дней. Телят иммунизируют, начиная с 1-2-дневного
возраста, двукратно, с
интервалом 3-5 дней в дозе 1-1,5 мл для первой и 1,5-2 мл для второй прививки. По достижении телятами 1,5-2 месячного возраста их ревакцинируют однократно в дозе 2 мл. Телят,
полученных от
вакцинированных коров, прививают с 17-20-дневного возраста, а телят от невакцинированных коров прививают в 8-10-дневном возрасте двукратно в дозе 1-2 мл с интервалом 8-10 дней.
[4] В
настоящее время применяют также вакцину против сальмонеллеза телят из аттенуированного штамма Сальмонеллы дублин; живую вакцину против сальмонеллеза молодняка /из штаммов Сальмонеллы
тифимуриум N 3 и
Сальмонеллы дублин N 6/. В неблагополучных по сальмонеллезу хозяйствах стельных коров иммунизируют концентрированной формолквасцовой вакциной, которую вводят согласно наставлению.
Телят, полученных от
вакцинированных коров, прививают живыми вакцинами в 17-20-дневном возрасте, от невакцинированных коров в 10-15-дневном возрасте однократно, в дозе 1 млрд живых м.т. при подкожном
введении или же
двукратно перорально с интервалом в 2 дня в дозе 100 млрд м.т., в случае применения вакцины против сальмонеллеза молодняка из штаммов Сальмонеллы тифимуриум N 3 и Сальмонеллы дублин N
6.
[5]
Задача наших исследований - получение инактивированной, ареактогенной вакцины против сальмонеллеза телят, обеспечивающей создание напряженного длительного иммунитета в организме
животного, уменьшение
кратности введения.
[6] В предлагаемой вакцине в качестве антигенов использованы следующие штаммы сальмонелл: Сальмонелла дублин N 1449, выделенный из абортированных
плодов в 1989 г. ;
Сальмонелла тифимуриум N 159, полученный из музея типовых культур лаборатории Бактериологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им.
Я.Р.Коваленко,
Москва.
[7] Помимо этого нами использован в качестве иммуностимулятора штамм Родококка екви N 2, выделенный от крупного рогатого скота из хозяйств Московской области в 1986
г.
[8]
Предложенная вакцина включает антигены двух сероваров сальмонелл: дублин и тифимуриум в физиологическом растворе с 0,4-0,5% формалина, адъювант - масло-ланолиновая смесь, содержащая
взвесь клеток
родококка - иммуностимулятора.
[9] Штамм Сальмонелла дублин N 1449 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки
Грамотрицательные
мелкие палочки с
закругленными концами, длиной 1-6 мкм, шириной 0,4-0,6 мкм, подвижные. Хорошо растет на обычных питательных средах, на бульоне образует осадок, равномерное помутнение среды, пленку и
пристеночное
кольцо. На полужидком агаре растет по всему столбику среды.
[10] Физиолого-биохимические свойства
Аэроб, способный расти в микроанаэробных условиях. Оптимум pH 7,2,
температуры
37oC.
[11] Не расщепляет мочевину, индол не образует, выделяет сероводород, ферментирует глюкозу, сорбит, арабинозу, мальтозу, утилизирует цитрат, малонат натрия,
цитрат натрия с
глюкозой; имеет ферменты лизиндекарбоксилазу и орнитиндекарболазу.
[12] Агглютинируется сальмонеллезными сыворотками: 0 - 1,9,12; Н - g, p, --.
[13] Патогенна
для белых мышей:
ЛД50 равна 5 • 104 клеток при внутрибрюшинном заражении.
[14] Штамм Сальмонелла тифимуриум N 159 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки
Грамотрицательные, подвижные, мелкие, слегка изогнутые палочки, формирующие на МПА выпуклые колонии 1-3 мм в диаметре, прозрачные или беловатого цвета.
Хорошо растут на обычных питательных средах, на МПБ образуют пленку и пристеночное кольцо.
[15] Физиолого-биохимические свойства
Аэроб, способный расти в микроанаэробных условиях.
Оптимум pH 7,2, температуры 37oC.
[16] Не изменяет молоко, не разжижает желатин, не выделяет индол, не разлагает мочевину; выделяет сероводород, сбраживает глюкозу, маннит,
сорбит, арабинозу, инозит, мальтозу с образованием кислоты; лактозу и сахарозу не сбраживает; имеет ферменты лизиндекарбоксилазу и орнитиндекарболазу.
[17] Агглютинируется сальмонеллезными
сыворотками: 0 - 1,4,5,12; H - i; 1,2.
[18] Патогенна для белых мышей: ЛД50 составляет 5 • 103 клеток при внутрибрюшинном заражении.
[19] Штамм
Родококка екви N 2 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки
Грамположительные, неподвижные палочковидной и кокковидной формы бактерии, формирующие
выпуклые колонии до 1 мм диаметром, серовато-желтого цвета.
[20] Характерен медленный рост на обычных питательных средах /до 4-9 суток/, но при обогащении 10% сыворотки при 37oC
отмечается хороший рост через 24 часа.
[21] Физиолого-биохимические свойства
Аэроб, оптимум pH 7,2-7,4, температуры 30oC.
[22] В отношении углеводов,
аминокислот, многоатомных спиртов не активен, но сбраживает глюкозу. Не образует индол, сероводород, не разлагает желатин, не лизирует эритроциты крови животных. Имеет ферменты: каталазу, уреазу.
Непатогенный - при внутрибрюшинном введении белым мышам массой 18-20 г в дозе 10 • 109 микробных тел не вызывает их гибели в течение 14 суток.
[23] Способ приготовления
вакцины состоит в следующем:
Пример 1. Для приготовления 1 литра вакцины берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе с 0,4-0,5% формалина. Концентрация клеток в 1 мл
взвеси 90 млрд м.т.
[24] Антигены: Salmonella dublin - 300
Salmonella typhimurium - 100
Взвесь клеток Rodococcus equi на физиологическом растворе, содержащая в 1 мл 200
млрд микробных клеток - 100.
[25] Легкое минеральное масло и ланолин безводный в соотношении 83-87 : 17-13 - остальное.
[26] После перемешивания всех компонентов концентрация
формалина составит 0,2-0,25%.
[27] Применяют вакцину однократно в дозе 2,0 мл коровам и 1,0 мл телятам с профилактической целью в животноводческих хозяйствах, неблагополучных по
сальмонеллезу телят.
[28] Пример 2. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе c 0,4-0,5% формалина /в 1 мл бактериальной
взвеси содержится 90 млрд микробных клеток/ в следующем количестве: /мл/
Антигены: Salmonella dublin - 285
Salmonella typhimurium - 95
Взвесь клеток родококка на
физиологическом растворе, содержащем в 1 мл 200 млрд микробных клеток - 95 мл.
[29] Масло-ланолиновый адъювант в соотношении 83-87 : 17-13 - остальное.
[30] Пример 3. Вакцину
готовят аналогично примеру N 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе, содержащем 0,4-0,5% формалина /в 1 мл содержится 90 млрд микробных клеток/.
[31]
Антигены: Salmonella dublin - 315
Salmonella tuphimurium - 105
Взвесь микробных клеток родококка /концентрация в 1 мл 200 млрд м.кл./ - 105 мл.
[32] Масло-ланолиновая
смесь в соотношении 83-87 : 17-13 - остальное.
[33] Поименованные в одном из примеров 1,2,3 компоненты вакцины помещают в гомогенизатор и по истечении 10-15 минут гомогенизации вакцину
фасуют во флаконы.
[34] Как видно из примеров, предложенная вакцина является ареактогенной, обеспечивает создание в организме животного длительного и напряженного иммунитета против
сальмонеллеза телят при однократном введении телятам 1,0 мл, коровам 2,0 мл за 50-60 дней до отела.
[35] Вакцина апробирована нами на 105 телятах и 53 коровах с положительным результатом в
1995-1997 гг.
[36] Вакцина найдет применение в животноводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу телят.
