[1] Изобретение относится к области биологии и медицины и направлено на
инактивацию активных форм кислорода (АФК), генерируемых лейкоцитами периферической крови в результате как непосредственного контакта клеток с чужеродными поверхностями в экстракорпоральном контуре,
так и опосредованно через гуморальные системы плазмы. Изобретение может быть использовано при выборе лечебной тактики при проведении экстракорпоральной гемокоррекции, в частности при использовании
гемосорбционных технологий.
[2] Широкому использованию гемосорбционных технологий препятствуют осложнения, связанные с развитием признаков генерализованного воспалительного процесса (Whole
body inflammation [1]). Определяющая роль в его генезе принадлежит активации гуморальных и клеточных систем крови в ответ на ее контакт с инородными поверхностями в экстракорпоральном контуре.
Ведущей
триггерной системой генерализованного воспаления является система контактной активации, способная как непосредственно, так и через инициацию ею других гуморальных систем, стимулировать
лейкоциты и
эндотелиальные клетки [2]. Стереотипным ответом лейкоцитов на воздействие стимулов различной природы является индукция генерации ими АФК, обладающих как мощным повреждающим действием, так
и
выступающих в качестве медиаторов воспаления широкого спектра действия, непосредственно индуцируя клетки-участники воспаления, а также шунтирующих активацию гуморальных систем крови [7, 8, 9]. В
результате генерируемые лейкоцитами АФК не только поддерживают, но и выступают в качестве амплификаторов генерализованного воспаления [10].
[3] Одним из наиболее частных осложнений,
которые
наблюдаются в 20% случаев всех гемоперфузий через сорбенты является озноб [3], который можно считать одним из внешних проявлений процесса генерализованного воспаления. Лечебная тактика,
связанная с
купированием озноба, основана на неспецифической терапии и предполагает согревание больного с введением промедола, супрастина, глюконата кальция. Данная лечебная тактика может служить
аналогом
предлагаемого изобретения. Основным его недостатком можно считать отсутствие специфического воздействия на факторы, запускающие и поддерживающие процесс генерализованного воспаления.
[4]
Настоящее изобретение направлено на разработку лечебной тактики при проведении гемосорбции с целью коррекции осложнений, обусловленных действием активных форм кислорода в результате
активации
лейкоцитов крови.
[5] Для достижения поставленной цели предложено проводить гемоперфузию крови через различные сорбенты на фоне введения антиоксидантных препаратов.
[6]
Исследования, проведенные авторами, показали, что можно использовать практически любое антиоксидантное средство. В качестве наиболее перспективного терапевтического средства в настоящий момент
признана супероксиддисмутаза (СОД) [4]. Причем, оптимальные результаты получены при введении СОД в дозе 50-500 мкг/кг.
[7] Известно, что действие СОД направлено не только на инактивацию
первичного продукта активированных нейтрофильных лейкоцитов - O2-, но и определяет прерывание цепи образования других активных форм кислорода [4]. Универсальным методом,
регистрирующим продукцию АФК лейкоцитами крови, является метод люминолзависимой хемилюминесценции [5]. Нами установлено, что процедура гемоперфузии через различные сорбенты сопровождается активацией
лейкоцитов крови, что ведет к активной генерации АФК с последующим развитием и поддержанием генерализованного воспалительного процесса [6].
[8] Уровень активации клеток в ответ на
гемоперфузию оценивали по индексу хемилюминесценции (ХЛ), который представляет собой отношение светосуммы ХЛ к числу нейтрофилов в пробе, умноженное на тысячу.
[9] Применение СОД в ходе
гемоперфузии через различные сорбенты существенно снижало индекс ХЛ, что свидетельствует о падении активности клеток.
[10] Изобретение иллюстрируется следующим примером.
[11]
Морских свинок наркотизировали нембуталом (30-40 мг/кг) и катетеризировали сонную артерию и яремную вену для подключения экстракорпорального контура. Свертывающую систему крови блокировали гепарином
(500 ед/кг). Гемоперфузию проводили по схеме артерия ---> вена. Кровь в экстракорпоральный контур подавали с помощью перистальтического насоса со скоростью 15 мл/ч. В контур включали колонки с
сорбентом объемом 2,0 мл. Время гемоперфузии составляло 60 мин. У контрольных животных кровь перфузировали через экстракорпоральный контур без включения в него колонки с сорбентом. Кровь для оценки
количества лейкоцитов в циркуляции и их активации в контуре забирали до начала гемосорбции, через 30 и 60 минут - в ходе гемоперфузии и через 1 и 2 часа после окончания процедуры. Оценивали уровень
спонтанной и форболмеристатацетат (ФМА) - индуцированной ХЛ и количество нейтрофилов в пробе (как основных продуцентов АФК), из него рассчитывали индекс ХЛ.
[12] В экспериментах по оценке
влияния СОД на ХЛ и адгезивные свойства лейкоцитов в качестве гемоконтактного препарата применяли крупнозернистую агарозу 4Б, как наиболее реактогенный материал, что было выявлено в предварительных
опытах. Раствор СОД (50-500 мкг/кг) подавали перестальтическим насосом в течение всей процедуры гемоперфузии на колонку с агарозой или в венозный катетер сразу после колонки. Результаты экспериментов
представлены в таблице.
[13] Проведение гемосорбции на фоне инфузии СОД снижает индекс ХЛ (спонтанной и индуцированной) в 2 раза на 30-ой минуте процедуры. В конце гемоперфузии через
сорбент (60 мин) индекс ХЛ понижается практически до уровня индекса ХЛ контрольных животных и остается несколько ниже во время двух последующих регистраций (1 и 2 часа).
[14] Таким образом,
применение антиоксидантного средства в процессе гемоперфузии через сорбенты приводит к инактивации АФК, что отражает индекс ХЛ. СОД может быть рекомендована как антиоксидантный препарат для
купирования процесса генерализованного воспаления, развивающегося в ходе гемоперфузии через гемосорбенты, и, очевидно, при контакте крови с чужеродными поверхностями в экстракорпоральном контуре при
использовании методов эфферентной терапии.
[15] Список литературных источников
1. Wachtfogel Y. T., Dela Cadena R.A., Colman R.W. Structural biology, cellular in teractions and
pathophysiology of the contact system//THromb. Res. 1993, v. 72.
[16] 2. Colman R. W. Surface mediated defence reactions: the plasma contact activation system//J.Clin.Invest. 1984, v. 73,
p. 1249-1253.
[17] 3. Лопухин Ю.М., Молоденков М.Н. Гемосорбция. -М.: Медицина, 1985, 287 с.
[18] 4. Halliwell B. , Cutteridge J.M.C., Cross C.E.Free radicals, antioxidants, and
human diseas: where are we now?//J.Lab.Clin.Med. 1992, v. 119, N6, p. 598-620.
[19] 5. Yonemaru M., Stephens K.E., Ishizaka A., Zheng H., Hogue R.S., Crowley J.J., Hatherill J.R., Raffin
T.A. Effects of tumor necrosis factor on PMA chemotaxis, chemiluminescence and elastase activity//J.Lab.Clin.Med. -1989, 6 v. 114, p. 674-681.
[20] 6. Yankovsky O.Yu., Kuznetsov S.I. The
chemiluminescence (CL-) of leukocytes as a useful witness of the compatibiliti of sorbents for haemoperfusion//Oxygen'95, The Ann.Meet. of Oxygen Soc., Nov. 16-20, 1995, Pasadena, Abstr. N 2-62.
[21] 7. Зенков Н.К., Меньшикова Е.Б., Тергин С.М. Окислительный процесс. Диагностика, терапия, профилактика. -РАМН, Сибирское отделение, Новосибирск, 1993, 181 с.
[22] 8. Янковский
О.
Ю. , Слепенков С.В. Редокс-факторы как модуляторы клеточных функций//Вестн. СПб университета. 1995, сер. 5, вып. 3, с. 78-84.
[23] 9. Vogt W. , Zabern I., Notle R. Some properties of HO
radical treated human C 5.//Immunobiol. 1988, v. 178, N 1/2, p. 72-77.
[24] 10. Poch B., Gansauge F., Schoenberg M.H., Berger H.G. Cytokinrelease in whole blood under stimulation with
oxygen radicals//Intencive Care Medicine. 1994, v.20, suppl. 1, p. 55.
