заявка
№ RU 2021108003
МПК C12Q1/6806

СПОСОБЫ И СРЕДСТВА ПОЛУЧЕНИЯ БИБЛИОТЕКИ ДЛЯ СЕКВЕНИРОВАНИЯ

Авторы:
КРИСТИАНСЕН, Лена (US)
Номер заявки
2021108003
Дата подачи заявки
13.12.2019
Опубликовано
19.01.2023
Страна
RU
Дата приоритета
14.12.2025
Номер приоритета
Страна приоритета
Как управлять
интеллектуальной собственностью
Формула изобретения

1. Способ секвенирования нуклеиновой кислоты, включающий:

получение образца, содержащего нуклеиновую кислоту;

приведение образца в контакт с ДНК-связывающей молекулой;

приведение образца в контакт с инсерционным ферментным комплексом с получением меченых фрагментов нуклеиновых кислот, причем инсерционный ферментный комплекс ингибируется ДНК-связывающей молекулой; и

секвенирование меченых фрагментов нуклеиновых кислот с получением чтений последовательности.

2. Способ по п. 1, в котором образец представляет собой популяцию клеток, одиночную клетку, популяцию клеточных ядер или ядро одиночной клетки.

3. Способ по любому из пп. 1, 2, в котором образец содержит первичные нуклеиновые кислоты и вторичные нуклеиновые кислоты, причем ДНК-связывающая молекула предпочтительно связывает вторичные нуклеиновые кислоты, а не первичные нуклеиновые кислоты.

4. Способ по п. 3, в котором первичные нуклеиновые кислоты содержат ядерную ДНК.

5. Способ по п. 3, в котором вторичные нуклеиновые кислоты содержат митохондриальную ДНК (мтДНК) или внехромосомную ДНК.

6. Способ по любому из пп. 1-5, в котором ДНК-связывающая молекула содержит ДНК-краситель, аффинную метку, лиганд, фермент, пептид или биомолекулу.

7. Способ по п. 6, в котором ДНК-краситель содержит краситель Hoechst, SYBR Gold, Sytox Orange, Pico Green или Qubit.

8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором инсерционный ферментный комплекс представляет собой транспосому, содержащую транспозазу.

9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором секвенирование выполняют путем анализа с секвенированием доступного для транспозазы хроматина (ATAC-seq) или путем секвенирования полного генома.

10. Способ по п. 9, в котором ATAC-seq содержит массовый ATAC-seq или ATAC-seq на одиночных клетках.

11. Способ по любому из пп. 1-10, который ингибирует, снижает или устраняет вторичные секвенирующие чтения.

12. Способ ингибирования, снижения или устранения вторичных секвенирующих чтений, включающий:

получение образца, содержащего первичные нуклеиновые кислоты и вторичные нуклеиновые кислоты;

приведение образца в контакт с ДНК-связывающей молекулой, которая предпочтительно связывает вторичные нуклеиновые кислоты; и

выполнение транспонирования ДНК на открытом хроматине, причем вторичные нуклеиновые кислоты не транспонируются или транспонируются с более низкой эффективностью, чем первичные нуклеиновые кислоты.

13. Способ по п. 12, в котором образец представляет собой популяцию клеток, одиночную клетку, популяцию клеточных ядер или ядро одиночной клетки.

14. Способ по любому из пп. 12, 13, в котором ДНК-связывающая молекула содержит ДНК-краситель, аффинную метку, лиганд, фермент, пептид или биомолекулу.

15. Способ по п. 14, в котором ДНК-краситель содержит краситель Hoechst, SYBR Gold, Sytox Orange, Pico Green или Qubit.

16. Способ по любому из пп. 12-15, в котором транспонирование ДНК выполняют с использованием анализа с секвенированием доступного для транспозазы хроматина (ATAC-seq) или секвенирования полного генома из гДНК или из одиночных клеток.

17. Способ по п. 16, в котором ATAC-seq содержит массовый ATAC-seq или ATAC-seq на одиночных клетках.

18. Способ по любому из пп. 12-17, в котором приведение образца в контакт с ДНК-связывающей молекулой блокирует или снижает транспонирование во вторичные нуклеиновые кислоты.

19. Способ по любому из пп. 12-18, в котором первичные нуклеиновые кислоты содержат ядерную ДНК.

20. Способ по п. 19, дополнительно включающий секвенирование ядерной ДНК.

21. Способ по любому из пп. 12-20, в котором вторичные нуклеиновые кислоты содержат митохондриальную ДНК (мтДНК) или внехромосомную ДНК.

22. Библиотека нуклеиновых кислот, содержащая первичные секвенирующие чтения, полученные путем секвенирования ДНК, причем библиотека нуклеиновых кислот не включает в себя или имеет сниженное представление вторичных секвенирующих чтений.

23. Библиотека нуклеиновых кислот по п. 22, в которой секвенирование ДНК представляет собой анализ с секвенированием доступного для транспозазы хроматина (ATAC-seq) или анализ гДНК с секвенированием полного генома.

24. Библиотека нуклеиновых кислот по любому из пп. 22, 23, в которой первичные секвенирующие чтения представляют собой секвенирующие чтения ядерной ДНК.

25. Библиотека нуклеиновых кислот по любому из пп. 22-24, в которой вторичные секвенирующие чтения представляют собой секвенирующие чтения митохондриальной ДНК (мтДНК) или секвенирующие чтения внехромосомной ДНК.

26. Библиотека нуклеиновых кислот по любому из пп. 22-25, в которой вторичные секвенирующие чтения снижены, ингибированы или устранены благодаря ДНК-связывающим молекулам, которые предпочтительно связываются со вторичной ДНК.

27. Библиотека нуклеиновых кислот по п. 26, в которой ДНК-связывающая молекула способна связываться со специфической нуклеотидной последовательностью для устранения, снижения или ингибирования секвенирующих чтений или библиотек секвенирования для целевых областей нуклеиновых кислот.

28. Библиотека нуклеиновых кислот по п. 26, в которой ДНК-связывающая молекула содержит ДНК-краситель, аффинную метку, лиганд, фермент, пептид или биомолекулу.

29. Библиотека нуклеиновых кислот по п. 28, в которой ДНК-краситель содержит краситель Hoechst, SYBR Gold, Sytox Orange, Pico Green или Qubit.

30. Библиотека нуклеиновых кислот по любому из пп. 22-29, которая создана из популяции клеток, одиночной клетки, популяции клеточных ядер или ядра одиночной клетки.

Как компенсировать расходы
на инновационную разработку
Похожие патенты