заявка
№ RU 2018145693
МПК C12N15/12

Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов BDNF, VEGFA, BFGF, NGF, GDNF, NT3, CNTF, IGF1, для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, способ его получения и применения, штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- BDNF, или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- VEGFA, или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- BFGF, или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- NGF, или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- GDNF, или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- NT3, или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- CNTF, или Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- IGF1, несущий генотерапевтический ДНК-вектор, способ его получения, способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического ДНК-вектора

Авторы:
Савелиева Наталиа (AT)
Номер заявки
2018145693
Дата подачи заявки
21.12.2018
Опубликовано
25.06.2020
Страна
RU
Как управлять
интеллектуальной собственностью
Формула изобретения

1. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов: BDNF, VEGFA, BFGF, NGF, GDNF, NT3, CNTF, IGF1, для повышения уровня экспрессии этого целевого гена в организме человека и животных, при этом генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-BDNF или VTvaf17-VEGFA или VTvaf17-BFGF или VTvaf17-NGF или VTvaf17-GDNF или VTvaf17-NT3 или VTvaf17-CNTF или VTvaf17-IGF1 имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID №1 или SEQ ID №2 или SEQ ID №3 или SEQ ID №4 или SEQ ID №5 или SEQ ID №6 или SEQ ID №7 или SEQ ID №8 соответственно.

2. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов: ген BDNF, ген VEGFA, ген BFGF, ген NGF, ген GDNF, ген NT3, ген CNTF, ген IGF1 по п.1, отличающийся тем, что каждый из созданных генотерапевтических ДНК-векторов: VTvaf17- BDNF или VTvaf17-VEGFA или VTvaf17-BFGF или VTvaf17-NGF или VTvaf17-GDNF или VTvaf17-NT3 или VTvaf17-CNTF или VTvaf17-IGF1 по п. 1 за счет ограниченного размера векторной части VTvaf17, не превышающей 3200 п.н., обладает способностью эффективно проникать в клетки человека и животных и экспрессировать клонированный в него целевой ген, выбранный из группы генов: ген BDNF, ген VEGFA, ген BFGF, ген NGF, ген GDNF, ген NT3, ген CNTF, ген IGF1.

3. Генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов: ген BDNF, ген VEGFA, ген BFGF, ген NGF, ген GDNF, ген NT3, ген CNTF, ген IGF1 по п.1, отличающийся тем, что в составе генотерапевтического ДНК-вектора отсутствуют нуклеотидные последовательности вирусного происхождения и отсутствуют гены антибиотикорезистентности, обеспечивая возможность его безопасного применения для генетической терапии человека и животных.

4. Способ получения генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген, выбранный из группы генов: ген BDNF, ген VEGFA, ген BFGF, ген NGF, ген GDNF, ген NT3, ген CNTF, ген IGF1 по п.1, заключающийся в том, что каждый из генотерапевтических ДНК-векторов: VTvaf17-BDNF или VTvaf17-VEGFA или VTvaf17-BFGF или VTvaf17-NGF или VTvaf17-GDNF или VTvaf17-NT3 или VTvaf17-CNTF или VTvaf17-IGF1 по п.1 получают следующим образом: кодирующую часть целевого гена из группы BDNF, VEGFA, BFGF, NGF, GDNF, NT3, CNTF, IGF1 клонируют в ДНК-вектор VTvaf17 и получают генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-BDNF , SEQ ID №1 или VTvaf17-VEGFA, SEQ ID №2 или VTvaf17-BFGF, SEQ ID №3 или VTvaf17-NGF, SEQ ID №4 или VTvaf17-GDNF, SEQ ID №5 или VTvaf17-NT3, SEQ ID №6 или VTvaf17-CNTF, SEQ ID №7 или VTvaf17-IGF1, SEQ ID №8 соответственно.

5. Способ применения генотерапевтического ДНК-вектора на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущего целевой ген, выбранный из группы генов: ген BDNF, ген VEGFA, ген BFGF, ген NGF, ген GDNF, ген NT3, ген CNTF, ген IGF1 по п.1. для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, заключающийся во введении выбранного генотерапевтического ДНК-вектора по п.1 или нескольких выбранных генотерапевтических ДНК-векторов по п.1 в клетки, органы и ткани человека или животного, и/или во введении в органы и ткани человека или животного аутологичных клеток человека или животного, трансфицированных выбранным генотерапевтическим ДНК-вектором по п.1 или несколькими выбранными генотерапевтическими ДНК-векторами по п.1, или в сочетании обозначенных способов.

6. Способ получения штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- BDNF или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-VEGFA или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-BFGF или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-NGF или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-GDNF или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-NT3 или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-CNTF или штамма Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-IGF1, который заключается в электропорации компетентных клеток штамма Escherichia coli SCS110-AF генотерапевтическим ДНК-вектором по п.1 и последующей селекцией стабильных клонов штамма с использованием селективной среды.

7. Штамм, полученный по п.6, Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17- BDNF или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-VEGFA или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-BFGF или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-NGF или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-GDNF или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-NT3 или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-CNTF или штамм Escherichia coli SCS110-AF/VTvaf17-IGF1, несущий генотерапевтический ДНК-вектор по п.1 для его наработки с возможностью культивирования штамма без использования антибиотиков.

8. Способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического ДНК-вектора по п.1, заключающийся в масштабировании бактериальной культуры штамма по п.7 до количеств, необходимых для наращивания бактериальной биомассы в промышленном ферментере, после чего биомассу используют для выделения фракции, содержащей целевой ДНК-продукт - генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-BDNF или VTvaf17-VEGFA или VTvaf17-BFGF или VTvaf17-NGF или VTvaf17-GDNF или VTvaf17-NT3 или VTvaf17-CNTF или VTvaf17-IGF1 по п.1, многостадийно фильтруют и очищают хроматографическими методами.

Как компенсировать расходы
на инновационную разработку
Похожие патенты