СПОСОБ АЦИЛИРОВАНИЯ ПЕПТИДОВ

1. Способ получения N-ацилированного пептида, который включает стадии:

а) осуществление взаимодействия пептида, содержащего по крайней мере одну свободную аминогруппу, с ацилирующим агентом общей формулы I

где n равно 0-8;

R¹ означает COOR⁴;

R² означает липофильную часть молекулы;

R³ вместе с карбоксильной группой, к которой присоединен R³, означает реакционноспособный сложный эфир или реакционноспособный N-гидроксиимидоэфир; и

R⁴ выбирают из группы, включающей водород, С_1-12-алкил и бензил;

в основных условиях в водной смеси;

b) омыление сложноэфирной группы ацилированного пептида (COOR⁴) в основных условиях, если R⁴ не является водородом;

с) выделение N-ацилированного пептида;

характеризующийся тем, что водная смесь, используемая на стадии а), содержит менее 10% мас./мас. апротонного полярного растворителя.

2. Способ по п.1, в котором реакцию на стадии а) выполняют в водной смеси, содержащей менее 8% мас./мас. апротонного полярного растворителя, предпочтительно менее 5% мас./мас. апротонного полярного растворителя и еще предпочтительнее менее 3% мас./мас. апротонного полярного растворителя.

3. Способ по п.1, в котором ацилирующий агент добавляют к реакционной смеси в виде твердого вещества.

4. Способ по п.1, в котором реакцию на стадии а) выполняют в присутствии апротонного полярного растворителя, причем указанный апротонный полярный растворитель выбирают из группы, включающей N-метил-2-пирролидон, тетрагидрофуран и диметилсульфоксид.

5. Способ по п.1, в котором весь апротонный органический растворитель добавляют к реакционной смеси в качестве растворителя для ацилирующего агента.

6. Способ по.п.4, в котором ацилирующий агент добавляют к реакционной смеси в виде раствора, стабилизированного путем добавления кислоты.

7. Способ по п.1, в котором указанную кислоту добавляют к апротонному полярному растворителю в концентрации от 0,01% мас./мас. до 1% мас./мас., предпочтительно в концентрации от 0,05% мас./мас. до 0,5% мас./мас.

8. Способ по п.1, в котором указанную кислоту выбирают из группы, включающей серную кислоту, метансульфоновую кислоту и трифторуксусную кислоту.

9. Способ по п.1, в котором реакцию на стадии а) выполняют без апротонного полярного растворителя.

10. Способ по п.1, в котором R⁴ означает водород.

11. Способ по п.1, в котором R⁴ выбирают из группы, включающей С_1-8-алкил и бензил.

12. Способ по п.1, в котором R³ вместе с карбоксильной группой, к которой присоединен R³, означает реакционноспособный N-гидроксиимидоэфир.

13. Способ по п.1, в котором сложный эфир ацилированного пептида подвергают омылению при значении рН в пределах 10-14, предпочтительно при рН в пределах 9-13.

14. Способ по п.1, в котором рН реакционной смеси на стадии а) находится в пределах от рН 9 до рН 13, предпочтительно в пределах от рН 10 до рН 12 или более предпочтительно в пределах от рН 11,0 до рН 11,5.

15. Способ по п.1, в котором температура реакционной смеси на стадии а) находится в интервале 0-50°С, предпочтительно в интервале 5-40°С и более предпочтительно в интервале 10-30°С.

16. Способ по п.1, в котором R² выбирают из группы, включающей С_3-39-алкил, С_3-39-алкенил, С_3-39 -алкадиенил и стероидные остатки.

17. Способ по п.1, в котором R²-C(=O)- выбирают из группы, включающей литохолоил и гексадеканоил.

18. Способ по п.1, в котором пептид, используемый в качестве исходного вещества на стадии а), имеет чистоту, равную по крайней мере 80%, по крайней мере 90%, по крайней мере 93%, по крайней мере 95% или по крайней мере 97% при определении методом ВЭЖХ с обращенной фазой.

19. Способ по п.1, в котором указанный пептид выбирают из группы, включающей GLP-1, экзендин-4, GLP-2, глюкагон, инсулин, аналоги и производные любых вышеуказанных веществ.

20. Способ по п.1, в котором указанный пептид является агонистом GLP-1.

21. Способ по п.1, в котором указанный пептид выбирают из группы, включающей экзендин-3, экзендин-4, Arg³⁴-GLP-1(7-37), Gly⁸-GLP-1(7-36)-амид, Gly⁸-GLP-1(7-37), Val⁸-GLP-1(7-36)-амид, Val⁸-GLP-1(7-37), Val⁸Asp²²-GLP-1(7-36)-амид, Val⁸Asp²²-GLP-1(7-37), Val⁸Glu²²-GLP-1(7-36)-амид, Val⁸Glu²²-GLP-1(7-37), Val⁸Lys²²-GLP-1(7-36)-амид, Val⁸Lys²²-GLP-1(7-37), Val⁸Arg²²-GLP-1(7-36)-амид, Val⁸Arg²²-GLP-1(7-37), Val⁸ His²²-GLP-1(7-36)-амид, Val⁸His²²-GLP-1(7-37), дез(В30)-инсулин человека и их аналоги.

22. Способ по п.1, в котором указанный пептид выбирают из HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPSKKKKKK-NH2 (ZP-10) и его аналогов.

23. Способ по п.1, в котором реакционная смесь, используемая на стадии а), содержит буфер, пригодный для сохранения по существу постоянного значения рН в течение всей реакции.

24. Способ по п.1, в котором указанный пептид не является инсулиновым пептидом, т. е. не является инсулином или его аналогом.